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中国实验方剂学杂志 2019年第2期25卷 201-205页

作者：张亚楠包永睿孟宪生王帅李天骄辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600 辽宁省组分中药工程技术研究中心辽宁大连116600 辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600

目的:明确苎麻根石油醚部位体外抗胃癌活性并揭示其发挥药效的物质基础,为苎麻根的开发利用奠定基础。方法:采用噻唑蓝(MTT)法考察不同给药剂量,不同给药时间下苎麻根石油醚部位对人胃癌HGC-27细胞的增殖抑制作用及其与时间、剂量的关系... 详细信息

目的:明确苎麻根石油醚部位体外抗胃癌活性并揭示其发挥药效的物质基础,为苎麻根的开发利用奠定基础。方法:采用噻唑蓝(MTT)法考察不同给药剂量,不同给药时间下苎麻根石油醚部位对人胃癌HGC-27细胞的增殖抑制作用及其与时间、剂量的关系;采用流式细胞仪检测苎麻根石油醚部位作用于人胃癌HGC-27细胞后细胞凋亡率和细胞周期的变化;通过GC-MS对发挥药效的苎麻根石油醚部位进行成分解析。结果:不同质量浓度的苎麻根石油醚部位作用于人胃癌HGC-27细胞24,48,72 h后,均呈现出较好的细胞增殖抑制作用,并呈现一定的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P <0. 05);苎麻根石油醚部位作用人胃癌HGC-27细胞后可诱导细胞凋亡,影响细胞周期的正常变化,G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增多;通过GC-MS鉴定出苎麻根石油醚部位中26种化学成分,主要包括谷甾醇、豆甾醇等。结论:苎麻根石油醚部位为其抗胃癌活性部位,其发挥药效的主要成分为甾醇类化合物,为苎麻根在临床上的合理应用及其在抗肿瘤方面的进一步研究奠定基础。

关键词：苎麻根人胃癌HGC-27细胞株细胞周期细胞凋亡色相色谱-质谱

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用于肿瘤细胞三维培养的微流控芯片构建及培养条件研究

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中国药理学通报 2016年第4期32卷 581-585页

作者：徐为峰王帅孟宪生包永睿辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600 辽宁省组分中药工程技术研究中心辽宁沈阳110032 辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600

目的设计制作用于肿瘤细胞三维培养的微流控芯片,以海藻酸钙凝胶为细胞支架,基于芯片研究适合的凝胶形成、溶解条件,利用该条件长期培养SMMC-7721细胞并检测其活力。方法利用CDR软件、软光刻技术、模塑法、等离子键合法等设计并制作出... 详细信息

目的设计制作用于肿瘤细胞三维培养的微流控芯片,以海藻酸钙凝胶为细胞支架,基于芯片研究适合的凝胶形成、溶解条件,利用该条件长期培养SMMC-7721细胞并检测其活力。方法利用CDR软件、软光刻技术、模塑法、等离子键合法等设计并制作出微流控芯片并验证其适用性;在芯片中三维培养肝肿瘤细胞SMMC-7721,观察细胞形态,以IPP软件辅助计算细胞在72h的存活率。结果设计制作的微流控芯片适合于肿瘤细胞三维培养;芯片中培养的肝癌细胞72 h内生长状态良好,存活率达(96.1±4.5)%,细胞堆积排列紧密,出现肿瘤细胞聚集体(tumor cell spheroid,TCS)。结论该文设计构建用于肿瘤细胞三维培养的微流控芯片,并用于肝癌细胞SMMC-7721培养,细胞生长状态良好,且细胞生长与聚集状态表现出一定特殊性。利用该芯片进行肿瘤细胞三维培养,可以为肿瘤细胞生长状态研究及抗肿瘤药物筛选提供更有利的方式。

关键词：微流控芯片肿瘤细胞肿瘤微环境细胞三维培养海藻酸钙凝胶培养条件

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基于灰色关联度分析的荆芥抗Caco-2细胞总黄酮纯化工艺研究

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中草药 2015年第11期46卷 1615-1619页

作者：马聪王帅孟宪生包永睿辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600 辽宁省组分中药工程技术研究中心辽宁大连116600 辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600

目的通过灰色关联度分析技术及对Caco-2肠癌细胞增殖情况的影响来评价荆芥总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺。方法以总黄酮静态吸附量和解吸率为考察指标筛选大孔吸附树脂型号,采用单因素试验,优化其纯化总黄酮的工艺条件,并采用MTT法测定Cac... 详细信息

目的通过灰色关联度分析技术及对Caco-2肠癌细胞增殖情况的影响来评价荆芥总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺。方法以总黄酮静态吸附量和解吸率为考察指标筛选大孔吸附树脂型号,采用单因素试验,优化其纯化总黄酮的工艺条件,并采用MTT法测定Caco-2细胞抑制率,同时应用灰色关联度分析技术,计算总黄酮质量分数与对肿瘤细胞增殖抑制率的关联度。结果 HPD-400型大孔吸附树脂对荆芥总黄酮有较好的吸附分离性能,荆芥药材以0.1 g/m L的生药质量浓度、0.8 g/m L(药材/湿树脂)的上柱量上柱,用2倍柱体积(BV)水洗除杂,用8 BV、70%乙醇进行洗脱,体积流量均为4 BV/h,收集洗脱液,挥干,同法进行第2次纯化,总黄酮质量分数为92.15%,对Caco-2细胞增殖抑制率为86.17%,总黄酮质量分数与抑制率灰色关联系数为0.950 2。结论此工艺条件稳定可行,体外抗Caco-2肿瘤细胞药效明确,为开发以荆芥总黄酮纯化物为主成分的抗癌新药奠定基础。

关键词：荆芥总黄酮 HPD-400型大孔吸附树脂纯化工艺 Caco-2细胞灰色关联度

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HPLC法测定不同产地荆芥中6种黄酮类成分

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中草药 2017年第11期48卷 2292-2295页

作者：樊佳新王帅孟宪生包永睿李天娇辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600 辽宁省组分中药工程技术研究中心辽宁大连116600 辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600

目的通过对不同产地荆芥Schizonepeta tenuifolia中6种黄酮类成分的检测,为其质量控制提供依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法建立荆芥药材中黄酮类成分的检测方法,并以6种黄酮类成分的量为数据来源,对其进行聚类分析。结果不同产地荆... 详细信息

目的通过对不同产地荆芥Schizonepeta tenuifolia中6种黄酮类成分的检测,为其质量控制提供依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法建立荆芥药材中黄酮类成分的检测方法,并以6种黄酮类成分的量为数据来源,对其进行聚类分析。结果不同产地荆芥中6种黄酮类成分的量差异较大,木犀草苷、槲皮苷、橙皮苷、木犀草素、芹菜素、香叶木素的线性范围分别是0.030~0.148μg、0.222~1.108μg、0.357~1.784μg、0.058~0.292μg、0.054~0.269μg、0.050~0.247μg,加样回收率为96.32%~99.97%,RSD<2.20%;其中,安徽产地聚为一类,河南1与广东产地为聚一类,河南2、河北、云南、四川、湖北、甘肃产地聚为一类。结论建立的方法简单、灵敏,可用于荆芥的多指标成分的质量控制;其次,河南1、河南2、河北、云南、四川、湖北、广东、甘肃的亲缘关系较近,可以作为同一药用来源。

关键词：荆芥 HPLC 黄酮聚类分析香叶木素木犀草苷槲皮苷橙皮苷木犀草素芹菜素

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复方中药质量标志物的发现与量效色卡可视化技术

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药学学报 2019年第2期54卷 222-227页

作者：孟宪生包永睿王帅李天娇罗国安辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600 辽宁省组分中药工程技术研究中心辽宁大连116600 辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600 清华大学化学系北京100084

针对复方中药化学成分复杂、治疗病症宽泛、质量控制指标不能准确反映其功能属性的现状,笔者以气滞胃痛颗粒复方的质量标志物研究过程为例,创新研究思路与技术方法,构建了"基于功能,明确主治"、"组效相关,多组多效"... 详细信息

针对复方中药化学成分复杂、治疗病症宽泛、质量控制指标不能准确反映其功能属性的现状,笔者以气滞胃痛颗粒复方的质量标志物研究过程为例,创新研究思路与技术方法,构建了"基于功能,明确主治"、"组效相关,多组多效"、"组分解析,系统整合"、"谱效相关,见谱见效"、"量效色卡,质量可视"逐层递进的五步复方中药质量控制与评价新模式。建立了基于多重功效的组效对应、多组多效药理药效综合评价体系,完善发展了全时段等基线多波长覆盖融合指纹图谱技术,首次研制开发"谱-效色卡"软件,实现中药药效的"可视化"。旨在为复方中药整体性质量控制提供探索性解决方案。

关键词：中药复方质量标志物谱效关系量效色卡

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基于谱效关系的朝鲜天南星和东北天南星相似性评价

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中国实验方剂学杂志 2018年第11期24卷 44-48页

作者：王帅包永睿杨欣欣李天娇孟宪生辽宁中医药大学药学院辽宁省组分中药工程技术研究中心辽宁省现代中药研究工程实验室

目的：对天南星药材指纹图谱与抗肿瘤药效进行相关分析,探讨基于主要药效成分的朝鲜天南星与东北天南星化学成分相似性,为朝鲜天南星临床合理应用提供实验数据。方法：采用高效液相色谱法,建立11批不同产地、不同采收期朝鲜天南星与东... 详细信息

目的：对天南星药材指纹图谱与抗肿瘤药效进行相关分析,探讨基于主要药效成分的朝鲜天南星与东北天南星化学成分相似性,为朝鲜天南星临床合理应用提供实验数据。方法：采用高效液相色谱法,建立11批不同产地、不同采收期朝鲜天南星与东北天南星药材指纹图谱;采用噻唑蓝（MTT）比色法考察其对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;同时采用灰色关联度分析、偏最小二乘回归分析方法,对6批朝鲜天南星和5批东北天南星进行谱效相关性分析,找到各自药效贡献较大成分,评价二者相似性。结果：成功建立了11批不同来源天南星药材的指纹图谱,同时验证了不同来源天南星的抗肿瘤药理活性。灰色关联分析结果显示朝鲜天南星与药效关联系数〉0.80的15个成分中有12个与东北天南星一致;偏最小二乘回归分析验证了灰色关联分析结果的合理性。综合分析证明,基于主要药效成分的朝鲜天南星与东北天南星具有较好的相似性。结论：本实验以抗肿瘤药效为导向,验证了朝鲜天南星与东北天南星基于化学成分的相似性,为朝鲜天南星作为习用品提供合理依据的同时,也为其质量控制提供实验依据。

关键词：朝鲜天南星东北天南星抗肿瘤谱效关系相似性评价

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赤芍总苷对人肝癌SMMC-7721细胞迁移的影响及作用机制探讨

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中国实验方剂学杂志 2015年第6期21卷 108-112页

作者：杨玉王帅孟宪生包永睿辽宁中医药大学药学院、辽宁省组分中药工程技术研究中心、辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600

目的:探讨赤芍总苷对肝癌细胞SMMC-7721细胞迁移能力的影响及对血管内皮生长因子(VEGF),环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:体外培养SMMC-7721细胞,随机分组,不加药物作用的为空白组,其他各组为赤芍总苷低、中、高剂量组,将不同质量浓... 详细信息

目的:探讨赤芍总苷对肝癌细胞SMMC-7721细胞迁移能力的影响及对血管内皮生长因子(VEGF),环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:体外培养SMMC-7721细胞,随机分组,不加药物作用的为空白组,其他各组为赤芍总苷低、中、高剂量组,将不同质量浓度(200,400,600 mg·L-1)的赤芍总苷作用于细胞24 h后,采用MTT法检测赤芍总苷对细胞抑制作用,细胞划痕实验测定迁移能力,RT-PCR检测COX-2 mRNA表达,Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果:与空白组比较,赤芍总苷能够明显的抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈现量效关系(P<0.01),并能够抑制细胞的迁移(P<0.01),RTPCR及Western blot结果显示,赤芍总苷作用细胞24 h后,可使COX-2 mRNA和VEGF蛋白的表达明显下降(P<0.01)。结论:赤芍总苷能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长、迁移,其机制可能是通过下调COX-2,VEGF的表达来实现,从而为赤芍总苷治疗肝癌的发展及其临床应用提供理论和实验依据。

关键词：赤芍总苷 SMMC-7721细胞细胞迁移环氧合酶-2 血管内皮生长因子

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正交试验量效比对法优选卷柏抗SMMC-7721肝肿瘤组分总黄酮的提取工艺

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中国实验方剂学杂志 2014年第2期20卷 1-4页

作者：齐冰包永睿孟宪生王帅辽宁中医药大学药学院辽宁省组分中药工程技术研究中心辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600

目的:优选卷柏抗SMMC-7721肝肿瘤组分总黄酮的提取工艺。方法:选取提取时间、提取次数、乙醇用量及体积分数为考察因素,以人肝癌细胞SMMC-7721抑制率为指标的正交试验结果优选总黄酮和穗花杉双黄酮提取量综合评分的权重系数比,并通过SPS... 详细信息

目的:优选卷柏抗SMMC-7721肝肿瘤组分总黄酮的提取工艺。方法:选取提取时间、提取次数、乙醇用量及体积分数为考察因素,以人肝癌细胞SMMC-7721抑制率为指标的正交试验结果优选总黄酮和穗花杉双黄酮提取量综合评分的权重系数比,并通过SPSS 17.0软件对有效组分与药效学指标进行Pearson相关系数分析。采用HPLC测定穗花杉双黄酮含量,流动相乙腈-0.5%乙酸水(33∶67),检测波长269 nm。结果:最佳提取工艺条件为加10倍量70%乙醇回流提取1次,每次3 h;穗花杉双黄酮含量与总黄酮含量的权重系数分别为0.7,0.3,反映含量指标与抑制率呈一定相关性。结论:以有效成分含量代表药效作为正交试验指标是科学合理的,优选的提取工艺稳定可行,为中药有效成分的提取提供新思路。

关键词：卷柏总黄酮正交试验量效对比噻唑蓝药效指标提取工艺单因素试验

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基于NF-κB信号通路参心麦和颗粒治疗大鼠冠心病作用机制探讨

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中国实验方剂学杂志 2015年第5期21卷 133-137页

作者：王玉凤王帅孟宪生包永睿关姗姗辽宁中医药大学药学院辽宁省组分中药工程技术研究中心辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600

目的:在参心麦和颗粒治疗缺血再灌注损伤大鼠模型疗效的基础上,探讨参心麦和颗粒对心肌缺血损伤大鼠在核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中的调控作用。方法:SD大鼠60只大鼠,随机分成假手术组、模型组、地尔硫卓组(36 mg·kg-1)、参... 详细信息

目的:在参心麦和颗粒治疗缺血再灌注损伤大鼠模型疗效的基础上,探讨参心麦和颗粒对心肌缺血损伤大鼠在核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中的调控作用。方法:SD大鼠60只大鼠,随机分成假手术组、模型组、地尔硫卓组(36 mg·kg-1)、参心麦和颗粒低、中、高剂量(0.17,0.51,1.53 g·kg-1)组,除假手术组外,其余各组造成缺血再灌注损伤模型,造模成功后,各给药组连续ig给予相应药物7 d,每天1次;基于NF-κB信号通路,采用ELISA检测大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)和IL-8水平;采用RT-PCR法检测大鼠心肌组织NF-κB,肿瘤坏死因子-α(TNF-α),诱生型一氧化氮合成酶(i NOS),细胞间黏附分子(ICAM-1)和血管细胞黏附分子(VCAM-1)mRNA表达水平;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织血管内皮生长因子(VEGF),热休克蛋白(HSP 70)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组IL-6和IL-8含量明显升高(P<0.01),NF-κB,TNF-α,i NOS,ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达明显升高(P<0.01),COX-2蛋白表达明显升高(P<0.01),VEGF和HSP 70蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,参心麦和颗粒能显著降低NF-κB信号通路中IL-6和IL-8含量(P<0.01),抑制NF-κB,TNF-α,i NOS,ICAM-1和VCAM-1 mRNA的表达(P<0.01),抑制COX-2蛋白表达(P<0.01),促进VEGF和HSP 70蛋白表达(P<0.01)。结论:参心麦和颗粒具有明显的抗心肌缺血损伤作用,其机制是通过抑制NF-κB信号通路中的炎症因子,激活血管保护因子,二者协同作用实现的,该研究为参心麦和颗粒治疗冠心病的临床推广应用提供理论依据。

关键词：参心麦和颗粒冠心病核转录因子-κB信号通路作用机制

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不同产地金银花质量评价

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中国实验方剂学杂志 2016年第5期22卷 80-83页

作者：解世全王帅孟宪生包永睿辽宁中医药大学药学院辽宁省组分中药工程技术研究中心辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600

目的:通过对14个不同产地金银花药材中指标成分绿原酸、木犀草苷、总酚酸、总黄酮的含量进行测定,找出4个成分之间的相关性,为合理评价金银花药材质量提供参考。方法:采用HPLC和UV法测定金银花中绿原酸、木犀草苷、总酚酸和总黄酮的含量... 详细信息

目的:通过对14个不同产地金银花药材中指标成分绿原酸、木犀草苷、总酚酸、总黄酮的含量进行测定,找出4个成分之间的相关性,为合理评价金银花药材质量提供参考。方法:采用HPLC和UV法测定金银花中绿原酸、木犀草苷、总酚酸和总黄酮的含量;采用相关程度分析方法对4种成分进行相关性分析。结果:以4种成分为综合考察指标,其中山东临沂产金银花药材中绿原酸、木犀草苷、总酚酸、总黄酮含量较高;通过相关性评价,判定金银花中绿原酸与总酚酸呈高度相关性,木犀草苷与总黄酮呈中度相关,绿原酸与木犀草苷呈中度相关,总酚酸与总黄酮呈中度相关。结论:通过对14个不同产地金银花药材指标成分评价及相关分析,为金银花药材质量的评价及合理利用提供实验数据。

关键词：金银花绿原酸木犀草苷总酚酸总黄酮

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