检索结果-内蒙古大学图书馆

实验生物学报 2005年第2期38卷 177-182页

作者：张杰冯晨刘莹姜淼杨嘉宁陈菲宋宇彤王格于秉治中国医科大学基础医学院生化教研室沈阳110001 辽宁省计划生育科学研究院生殖医学重点开放实验室

hbrp(Human BSP-Related Protein)是我们实验室最近在睾丸组织中克隆的一个人与BSP(bovine seminal plasma)蛋白相关的新基因.为了将有关该新基因信息与现有人类基因组转录图相整合,我们应用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridiza... 详细信息

hbrp(Human BSP-Related Protein)是我们实验室最近在睾丸组织中克隆的一个人与BSP(bovine seminal plasma)蛋白相关的新基因.为了将有关该新基因信息与现有人类基因组转录图相整合,我们应用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization-FISH)法进行了该基因的人染色体基因定位,结果成功地将hbrp基因定位在人19号染色体长臂1区3带上.hbrp基因是在对BSP蛋白功能的研究过程中发现并克隆的,其同源性分析发现,与其序列最相近的是BSP蛋白家族.hbrp基因编码的蛋白质氨基酸序列中含有四个纤连蛋白Ⅱ型结构域,而BSP蛋白结构中含有两个前后排列的纤连蛋白Ⅱ型结构域,表明该蛋白可能是一种与BSP蛋白相关的结合蛋白.以前的研究中,我们发现BSP不仅能抑制PKC的活性,还能抑制酪氨酸蛋白激酶(TPK)的活性,根据BSP的这一功能,对HBRP蛋白与TPK的关系进行了研究,结果证明HBRP蛋白对TPK活性有明显的抑制作用.现将实验方法及所观察结果报道如下:

关键词： hbrp 新基因染色体定位抑制作用 TPK 活性荧光原位杂交 19号染色体基因定位人类基因组同源性分析睾丸组织基因信息人染色体研究过程 BSP 实验室克隆蛋白转录

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神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 760-764,803页

作者：李宏图刘晓玉庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室发育生物学教研室沈阳110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室沈阳110031

目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进... 详细信息

目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定。用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量,并计算病毒滴度,初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率。结果PCR和测序证实,构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为4×108TU/ml。慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞,当感染复数为80时,感染效率达100%。结论成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体。

关键词：神经元抑制性沉默元件双链RNA 慢病毒载体

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神经元限制性沉默因子与大鼠骨髓间充质干细胞向神经元诱导分化的关系

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 702-706,799页

作者：刘斌李宏图张涛孟凡彪刘晓玉庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室发育生物学教研室沈阳110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室沈阳110031

目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的D... 详细信息

目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的DMEM培养液和二甲基亚砜诱导大鼠MSCs分化成神经元,再通过实时定量PCR分析NRSF以及NRSF调控的基因在诱导前后表达的变化。结果应用β-巯基乙醇、无血清DMEM培养液和二甲基亚砜的诱导方案可以将MSCs诱导分化成神经元样细胞,诱导后的细胞神经元标记物神经元特异性烯醇化酶呈阳性,实时定量PCR检测NRSF基因表达显著下调,NRSF的靶基因神经营养酪氨酸激酶三型受体、突触相关蛋白25、L1细胞黏附分子、神经元钙结合蛋白受体表达有不同程度的上调。结论MSCs的神经元分化与NRSF下调及其调控的神经元分化相关基因表达上调有关。NRSF很可能是MSCs向神经元方向分化的关键基因,抑制NRSF表达可能是促进MSCs向神经元分化的关键步骤。

关键词：骨髓间充质干细胞神经元限制性沉默因子分化神经元

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弥漫性掌跖角化病一家系16例

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中华皮肤科杂志 2005年第5期38卷 327-327页

作者：韩维田姜淼边超英王格李学付李伟洲辽宁省计划生育科学研究院生殖医学开放实验室沈阳110031

先证者男,24岁.患者2岁起双手掌、足底皮肤出现角化过度,皮肤表面出现细小裂纹,并有不同程度的增厚,随年龄增长,病情逐渐发展.皮损为光滑、硬化而均匀,半透明,蜡黄色,逐渐延伸至掌跖侧缘.皮肤科情况:掌跖角化明显,累及整个手掌或足底.... 详细信息

先证者男,24岁.患者2岁起双手掌、足底皮肤出现角化过度,皮肤表面出现细小裂纹,并有不同程度的增厚,随年龄增长,病情逐渐发展.皮损为光滑、硬化而均匀,半透明,蜡黄色,逐渐延伸至掌跖侧缘.皮肤科情况:掌跖角化明显,累及整个手掌或足底.局部皮肤增厚,失去弹性,足底和手掌粗糙不平,皮肤纹理处发生皲裂,部分裂口很深.患者既往健康,智力正常.毛发、牙齿发育均正常。

关键词：掌跖角化病弥漫性家系皮肤表面不同程度年龄增长皮肤增厚皮肤纹理既往健康牙齿发育先证者双手掌足底皮肤科患者出现

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108例21三体综合征患儿危险因素分析

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中国生育健康杂志 2005年第1期16卷 29-32页

作者：姜淼李蕴清韩维田王格李学付辽宁省计划生育科学研究院生殖医学开放实验室沈阳110031 中国医科大学第87期英文班

目的　探讨 2 1 三体综合征的危险因素。　方法　应用Logistic回归模型 ,对 10 8例 2 1 三体综合征患儿和 6 2 7例后天致残儿童做对照进行危险因素分析。　结果　患儿娩出异常(17 5 9% ) ,患儿母亲具有不良生育史 (7 5 9% )、妊娠合并症... 详细信息

目的　探讨 2 1 三体综合征的危险因素。　方法　应用Logistic回归模型 ,对 10 8例 2 1 三体综合征患儿和 6 2 7例后天致残儿童做对照进行危险因素分析。　结果　患儿娩出异常(17 5 9% ) ,患儿母亲具有不良生育史 (7 5 9% )、妊娠合并症 (41 6 7% )、服药 (14 81% )和患儿父母孕前感染 (11 11%和 30 5 6 % )与对照组 (5 18%、 3 6 7%、 19 94 %、 4 31%、 2 0 7%和10 0 5 )比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ;Logistic回归模型分析 ,母亲患有先天遗传性疾病、孕前 1个月内服药、孕前 3个月内感染、本次妊娠合并症与父亲在妻子孕前 1个月患病进入模型。　结论　导致 2 1 三体综合征发生的危险因素 ,母亲远远大于父亲 ;在母亲患有先天遗传性疾病、孕前服药、感染及父亲近期患病情况下 ,建议不要受孕 ,一旦受孕应当进行产前诊断。

关键词： 21-三体综合征危险因素儿童 Logistic回归模型出生缺陷病

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REST/NRSF基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第32期15卷 6036-6040页

作者：李宏图施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省沈阳市110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室辽宁省沈阳市110031 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁省沈阳市110001

背景:神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达。目的:构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体。方法:针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退... 详细信息

背景:神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达。目的:构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体。方法:针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-RNAi载体连接产生L-shREST/NRSF慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。包装产生慢病毒颗粒,随后将其感染大鼠骨髓间充质干细胞,采用Real-timePCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效率。结果与结论:PCR和测序证实,构建出了REST/NRSFshRNA的慢病毒载体L-shREST/NRSF,并能稳定转染大鼠间充质干细胞,感染效率达100%。4组shRNA序列均有基因沉默效果,并以第3组shRN序列效果最为明显。结果表明,该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。

关键词：慢病毒载体 REST/NRSF shRNA 基因骨髓间充质干细胞

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序贯培养法诱导小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的研究

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解剖科学进展 2009年第4期15卷 370-375页

作者：顾文佳李宏图刘晓玉庞希宁中国医科大学发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室辽宁沈阳110031

目的诱导小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化。方法通过"序贯培养法"诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞,并应用RT-PCR、免疫荧光、端粒酶活性及基因芯片等对诱导结果进行检测。结果分化细胞表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、低分子... 详细信息

目的诱导小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化。方法通过"序贯培养法"诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞,并应用RT-PCR、免疫荧光、端粒酶活性及基因芯片等对诱导结果进行检测。结果分化细胞表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、低分子量神经微丝蛋白(NF-L)、神经细胞粘附分子1(NCAM1)、微管相关蛋白Tau等多种神经元标志物,免疫荧光显示NSE阳性率为(81±9.2)%,而神经胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)几乎不表达。基因芯片分析结果显示,在3张芯片中有8179个基因共表达,另有998个基因的表达完全不同,且有多种神经元基因的标志物表达明显升高。结论通过"序贯培养法"能有效地诱导小鼠胚胎干细胞向神经元分化。

关键词：胚胎干细胞神经细胞序贯培养法诱导分化小鼠

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人胚植入后全胚胎体外培养初探

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解剖学报 2004年第5期35卷 488-488页

作者：王彤李建新曲文玉刘广兴徐兰芳许芷玲汪桂兰于秉治中国医科大学生物化学与分子生物学教研室辽宁省计划生育科学研究院辅助生殖实验室沈阳110031 辽宁省计划生育科学研究院辅助生殖实验室沈阳市妇婴医院生殖医学中心

全胚胎培养(whole embryo-culture,WEC)技术广泛应用于发育生物学、胚胎学、畸胎学、毒理学及药理学等学科的研究,人们已经成功地进行了鸟、鸡、蝾螈、大、小鼠、豚鼠、蛙、兔等的全胚胎培养.……

关键词：人胚植入全胚胎体外培养发育生物学畸胎学毒理学

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NRSE/RE-1 dsRNA诱导小鼠胚胎干细胞分化为NSE阳性的神经元样细胞

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生命科学研究 2009年第6期13卷 477-481页

作者：李宏图顾文佳孟凡彪马兰兰庞希宁中国医科大学发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室中国辽宁沈阳110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室中国辽宁沈阳110031

应用电打孔的方法将化学合成的NRSE/RE-1d sRNA转染小鼠胚胎干细胞,在去除LIF的条件下,直接接种培养,观察其分化情况,并对分化结果进行相关检测.结果显示分化细胞呈明显的神经样改变,免疫荧光显示NSE阳性率为(82.3±8.1)%.说明通过... 详细信息

应用电打孔的方法将化学合成的NRSE/RE-1d sRNA转染小鼠胚胎干细胞,在去除LIF的条件下,直接接种培养,观察其分化情况,并对分化结果进行相关检测.结果显示分化细胞呈明显的神经样改变,免疫荧光显示NSE阳性率为(82.3±8.1)%.说明通过转染NRSE/RE-1d sRNA能有效地诱导小鼠胚胎干细胞向神经元细胞分化.

关键词：胚胎干细胞 NRSE/RE-1d sRNA 诱导分化神经元样细胞

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调节正负向调节子重编程大鼠骨髓MSCs分化为胰岛素分泌细胞的研究

调节正负向调节子重编程大鼠骨髓MSCs分化为胰岛素分泌细胞的研究

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：李宏图施萍庞希宁中国医科大学医学细胞生物学教育部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室中国医科大学附属第一医院全科医学教研室

目的:重编程诱导大鼠MSCs向胰岛素分泌细胞分化。方法:原代培养的大鼠MSCs经分离、培养至第三代后,用负向调节子REST/NRSF、SHH慢病毒干扰载体以及正向调节子PDX1慢病毒过表达载体共转染并培养10天,实时定量PCR检测胰岛细胞分化相关基... 详细信息

目的:重编程诱导大鼠MSCs向胰岛素分泌细胞分化。方法:原代培养的大鼠MSCs经分离、培养至第三代后,用负向调节子REST/NRSF、SHH慢病毒干扰载体以及正向调节子PDX1慢病毒过表达载体共转染并培养10天,实时定量PCR检测胰岛细胞分化相关基因的表达,免疫荧光检测胰岛素,胰高血糖素及生长抑素的表达。ELISA检测胰岛素分泌。结果:慢病毒转染后胰岛素,胰高血糖素及生长抑素的表达明显升高,胰岛内分泌细胞分化的相关基因Ngn3、NeuroD1、Slc2a2、Nkx6.1和Mafa的表达都有不同程度的升高;并检测到胰岛素随葡萄糖浓度增加而分泌增加。结论:通过抑制REST/NRSF、SHH的表达及过表达PDX1能使大鼠MSC重编程分化为胰岛前体细胞,并表达和分泌胰岛素。

关键词：骨髓间充质干细胞重编程分化胰岛素分泌细胞

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