检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床解剖学杂志 2015年第6期33卷 655-661页

作者：王艳闵鹤鸣张苗苗秦书俭闵连秋包翠芬辽宁医学院附属第一医院神经内科辽宁医学院细胞生物学教研室辽宁医学院解剖学教研室辽宁省高校分子生物与新药开发重点实验室辽宁锦州121000

目的探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1)对缺氧复氧BMSCs增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法实验分为BMSCs正常对照组、BMSCs缺氧复氧组(Model组)、人参皂苷Rg11×10^(-7)、1×10^(-6)、1×10^(-5)mol/L处理组、尼莫地... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1)对缺氧复氧BMSCs增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法实验分为BMSCs正常对照组、BMSCs缺氧复氧组(Model组)、人参皂苷Rg11×10^(-7)、1×10^(-6)、1×10^(-5)mol/L处理组、尼莫地平2.5×10^(-7)mol/L处理组(阳性对照组)。各组分别于缺氧复氧12h前加入完全培养基(正常对照组、Model组)、人参皂苷Rg1(人参皂苷Rg1各处理组)、尼莫地平(阳性对照组)。建立缺氧复氧BMSCs模型。采用TUNEL法检测各组的细胞凋亡率,免疫荧光和免疫印迹技术定性定量检测各组增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Bcl-2、Bax的表达情况。结果TUNEL结果显示,BMSCs正常对照组未见明显凋亡细胞,Model组可见明显的凋亡细胞,与Model组比较,其余各处理组凋亡细胞数量均减少,以人参皂苷Rg1(1×10^(-5)mol/L)组最为明显。免疫荧光和免疫印迹结果显示,BMSCs正常对照组可见少量的PCNA、bcl-2、bax表达;Model组的PCNA、bcl-2的表达减少,但bax的表达显著增高,bcl-2/bax比值降低;与Model组比较,人参皂苷Rg1各组PCNA、bcl-2表达均呈不同程度的增高,而bax表达呈现相反的趋势,bcl-2/bax比值增高,以Rg1(1×10^(-5)mol/L)组最为明显。结论人参皂苷Rg1预处理对缺氧复氧BMSCs具有保护作用,其机制可能与下调bax的表达,上调PCNA、bcl-2的表达,抑制BMSCs凋亡和促进BMSCs增殖有关。

关键词：人参皂苷Rg1 BMSCs 增殖凋亡

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ZHX3基因沉默对BMSCs中成骨相关因子表达的影响

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天津医药 2015年第12期43卷 1356-1360页

作者：张苗苗包翠芬王艳闵鹤鸣秦书俭辽宁医学院人体解剖与组织胚胎教研室锦州121000 辽宁省高校分子生物与新药开发重点实验室辽宁医学院附属第一医院神经内科辽宁医学院细胞生物学教研室

目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对... 详细信息

目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对照组)。荧光显微镜下测定细胞转染率并采用免疫印迹技术鉴定转染是否成功;采用免疫荧光化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时smad3、smad4、RUNX2表达情况。结果(1)复苏培养的细胞具有BMSCs表型。(2)转染后,ZHX3沉默组和载体对照组均表达绿色荧光,空白对照组不表达荧光,且沉默组ZHX3基因表达显著低于载体对照组。(3)免疫荧光结果显示,smad3、smad4的阳性表达位于细胞核和细胞质,RUNX2的阳性表达主要定位于细胞核。3组细胞均可见阳性表达细胞,且空白对照组与载体对照组之间荧光强度未见显著差异,但ZHX3基因沉默组的荧光强度显著低于2个对照组。(4)免疫印迹检测smad3、smad4、RUNX2的条带于空白对照组和载体对照组中无显著差异,但均显著高于ZHX3沉默组(P<0.05)。结论ZHX3基因沉默后BMSCs体外成骨能力延迟,可能通过下调smad3、smad4、RUNX2来发挥作用。

关键词： DNA结合蛋白质类锌指基因同源盒转录因子基因沉默间质干细胞 smad3 smad4 RUNX2 转录抑制因子-锌指蛋白和同源框3

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人葡萄糖调节蛋白78基因磷酸化位点的真核突变载体的构建及表达

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中国生物制品学杂志 2014年第7期27卷 881-884页

作者：宋慧娟赵颂苏荣健辽宁医学院辽宁省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室辽宁锦州121001

目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)基因编码区磷酸化位点的真核突变载体,并在肝癌SMMC-7721细胞中进行表达。方法利用定点诱变技术将GRP78基因的两个磷酸化位点进行突变,即203位苏氨酸(T)用丙氨酸(A)替换... 详细信息

目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)基因编码区磷酸化位点的真核突变载体,并在肝癌SMMC-7721细胞中进行表达。方法利用定点诱变技术将GRP78基因的两个磷酸化位点进行突变,即203位苏氨酸(T)用丙氨酸(A)替换,466位酪氨酸(Y)用苯丙氨酸(F)替换,以质粒pEGFP-N1-GRP78为模板,进行PCR扩增后,构建突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F),并进行DNA测序分析。将测序正确的突变质粒转染肝癌SMMC-7721细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western blot法检测融合蛋白在细胞中的表达。结果突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F)经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;突变质粒组荧光蛋白表达分布于细胞质内,细胞核内无表达产物分布;3个突变质粒转染组在相对分子质量约105 000处均可见目的蛋白条带,大小与预期相符。结论成功构建了人GRP78单突变T203A、Y466F和双突变T203A/Y466F真核表达载体,并可在肝癌SMMC-7721细胞中表达,为进一步研究GRP78基因磷酸化位点T203、Y466在肝肿瘤侵袭和转移中的作用奠定了基础。

关键词：葡萄糖调节蛋白78 磷酸化位点定点诱变真核细胞基因表达

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人GRP78蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第10期27卷 1079-1082页

作者：宋慧娟李宏丹魏嘉苏荣健辽宁医学院辽宁省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室辽宁锦州121001

目的:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-GRP78,诱导表达、纯化后检测GRP78蛋白的抗原活性。方法:利用PCR方法从本实验室已构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)上扩增GRP78基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组载体pGEX-4T-1-GRP78。转化... 详细信息

目的:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-GRP78,诱导表达、纯化后检测GRP78蛋白的抗原活性。方法:利用PCR方法从本实验室已构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)上扩增GRP78基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组载体pGEX-4T-1-GRP78。转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,再将所表达的融合蛋白进行纯化。经SDS-PAGE分析后,将所得产物用Thrombin切割;进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价。结果:酶切和测序结果均证实GRP78原核表达载体构建正确,可诱导表达;ELISA检测显示纯化后的人GRP78抗原具有免疫原性。结论:成功构建了人GRP78基因的原核表达载体,获得了纯化的GRP78蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究以GRP78为基础的肝细胞癌的血清学检测提供了抗原。

关键词： GRP78 原核表达蛋白纯化肝细胞癌

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肝细胞生长因子对肝癌细胞系SMMC-7721失巢凋亡的影响

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世界华人消化杂志 2010年第8期18卷 819-824页

作者：谷艳娇奥瑞芳苏荣健辽宁医学院病理学教研室辽宁省锦州市121001 山西省荣军医院病理科山西省太原市30031 辽宁医学院科学实验中心辽宁省高校分子细胞生物学和新药开发重点实验室辽宁省锦州市121001

目的:探讨HGF对SMMC-7721失巢凋亡的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:悬浮培养SMMC-7721,建立失巢凋亡模型,应用TUNEL染色观察凋亡率.分别悬浮培养SMMC-7721、HGF处理后SMMC-7721及LY294002预处理后的HGF处理细胞,用台盼蓝染色观察... 详细信息

目的:探讨HGF对SMMC-7721失巢凋亡的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:悬浮培养SMMC-7721,建立失巢凋亡模型,应用TUNEL染色观察凋亡率.分别悬浮培养SMMC-7721、HGF处理后SMMC-7721及LY294002预处理后的HGF处理细胞,用台盼蓝染色观察细胞失巢凋亡后存活率,用MTT检测细胞的增殖能力的变化,流式细胞仪检测失巢凋亡细胞的早、晚期凋亡率,Hoechst染色观察不同处理细胞的凋亡情况.应用免疫印迹技术检测失巢凋亡后Akt、p-Akt、FAK、p-FAK的表达.结果:TUNEL染色显示,悬浮培养的SMMC-7721失巢凋亡率远大于贴壁培养的SMMC-7721(21.72%±6.85%vs66.67%±7.66%,P<0.05);台盼蓝染色显示,HGF处理后的SMMC-7721存活率明显高于悬浮培养细胞(P<0.05),而HGF不能提高经LY294002预处理后细胞的存活率;MTT实验显示HGF处理细胞A值明显大于悬浮培养细胞(P<0.05),LY294002预处理细胞与悬浮培养细胞相似.流式细胞仪和Hoechst33258染色均显示HGF处理后细胞的失巢凋亡明显低于悬浮培养细胞(P<0.05),而经LY294002处理后细胞的失巢凋亡率明显升高.蛋白印迹结果显示HGF处理后细胞Akt、FAK、p-Akt、p-FAK的表达均升高,而经LY294002预处理后,其表达与悬浮培养SMMC-7721一致.结论:在肝细胞癌SMMC-7721失巢凋亡过程中,HGF通过活化Akt和FAK来增强细胞的抗失巢凋亡能力,该作用受PI3K的调节.

关键词：肝细胞癌失巢凋亡肝细胞生长因子 Akt 磷酸肌酸3激酶

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犬黑素皮质素受体-4裸质粒注射促进小鼠肥胖的研究

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安徽农业科学 2009年第15期37卷 7032-7034,7042页

作者：吕金钢李久纯巴彩凤王光川苏荣健张轶博辽宁医学院实验动物中心辽宁锦州121001 辽宁省锦州市动物防疫站辽宁锦州121001 辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室辽宁锦州121001 辽宁医学院免疫与病原微生物学教研室辽宁锦州121001

[目的]探讨犬黑素皮质素受体-4(MC4R)cDNA的重组真核表达质粒对小鼠肥胖的影响。[方法]3次尾静脉高压注射pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R质粒,RT-PCR成功验证小鼠体内犬MC4R表达后,适时监测每只小鼠的体重,同窝小鼠相互对照,利用两两比较的秩... 详细信息

[目的]探讨犬黑素皮质素受体-4(MC4R)cDNA的重组真核表达质粒对小鼠肥胖的影响。[方法]3次尾静脉高压注射pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R质粒,RT-PCR成功验证小鼠体内犬MC4R表达后,适时监测每只小鼠的体重,同窝小鼠相互对照,利用两两比较的秩和检验进行统计学分析。另外,用脂肪组织病理切片分析小鼠皮下脂肪细胞变化。[结果]试验得出,小鼠体重变化有统计学意义;饲养时间相同、相互对照组的每一组小鼠脂肪细胞直径对比明显,且具有统计学意义。[结论]犬MC4R基因在小鼠体内表达,能促进小鼠体重增加,为犬MC4R调节肥胖机制的研究提供理论依据。

关键词：犬黑素皮质素受体-4 裸质粒注射肥胖基因转染

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肝细胞生长因子对肝细胞癌细胞系SMMC-7721黏着斑激酶的影响

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世界华人消化杂志 2009年第20期17卷 2070-2073页

作者：苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳辽宁医学院科学实验中心辽宁省高校分子细胞生物学和新药开发重点实验室辽宁省锦州市121001 中国人民解放军总医院临床部消化科北京市100853

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布.应用免疫印迹技术检测FAK、Src... 详细信息

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布.应用免疫印迹技术检测FAK、Src的表达及磷酸化,免疫荧光技术检测FAK在SMMC-7721细胞中的分布.结果:HGF(50μg/L)可以促进FAKY397位点的磷酸化,对FAK的表达没有影响.应用PI3K抑制物LY294002处理后,FAKY397的磷酸化水平显著降低.HGF处理后,FAK主要位于细胞边缘,呈簇状分布,应用PI3K抑制物,FAK在细胞内弥散分布.HGF处理后,Src激酶和SrcY416的磷酸化水平明显增加,而经LY294002处理后,Src激酶与SrcY416的磷酸化水平明显降低.结论:肝细胞癌中,HGF以PI3K依赖性的方式促进FAK和Src的活化.

关键词：肝细胞癌肝细胞生长因子黏着斑激酶 PI3K

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肝细胞生长因子对肝细胞癌侵袭和转移的影响

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世界华人消化杂志 2008年第28期16卷 3152-3156页

作者：王庆军孙抒李宏丹魏嘉苏荣健延边大学基础医学院病理学与法医学教研部吉林省延吉市133000 辽宁医学院科学实验中心辽宁省教育厅分子细胞生物学和新药开发重点实验室辽宁省锦州市121001

目的:研究HGF对肝细胞癌SMMC-7721的上皮-间叶转化的作用,并对其机制进行探讨.方法:HGF处理SMMC-7721后,应用细胞培养、Transwell、划痕实验、WB技术研究HGF对肝癌细胞SMMC-7721上皮-间叶转化的作用.并应用PI3kinase抑制物LY29400210μm... 详细信息

目的:研究HGF对肝细胞癌SMMC-7721的上皮-间叶转化的作用,并对其机制进行探讨.方法:HGF处理SMMC-7721后,应用细胞培养、Transwell、划痕实验、WB技术研究HGF对肝癌细胞SMMC-7721上皮-间叶转化的作用.并应用PI3kinase抑制物LY29400210μmol/L预处理细胞,观察SMMC-7721的变化,研究PI3kinase对于HGF作用机制的影响.结果:Transwell和划痕实验显示HGF处理的细胞侵袭和转移能力增强,蛋白印迹结果显示HGF处理的细胞的N-cad、MMP-2、MMP-9和Vimentin的表达增加,E-cad的表达减少.LY294002预处理后,细胞不再受HGF的影响,细胞的形态没有明显变化,Transwell和划痕实验结果与未经处理的SMMC-7721相同.蛋白印迹结果显示:细胞的N-cad、MMP-2、MMP-9、Vimentin和E-cad的表达变化不明显.结论:HGF能够促进SMMC-7721的上皮间叶转化,这种作用通过PI3Kinase实现.

关键词：肝细胞生长因子肝细胞癌 EMT PI3K

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Smad2基因敲除小鼠冷冻胚胎库的建立

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实验动物科学 2008年第1期25卷 1-5页

作者：杨秀兰李慕江其辉尚士臣时彦胜孙岩松苏玉虹李文龙军事医学科学院实验动物中心北京100071 锦州医学院辽宁省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室锦州121000

目的建立Smad2基因敲除小鼠胚胎库。方法利用OPS法对Smad2基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻保存,并比较不同杂交组合小鼠的超数排卵数、解冻胚胎的复苏率及发育率。结果两组不同杂交组合(Smad2+/-♂×Smad2+/-♀和Smad2+/-♂×Sm... 详细信息

目的建立Smad2基因敲除小鼠胚胎库。方法利用OPS法对Smad2基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻保存,并比较不同杂交组合小鼠的超数排卵数、解冻胚胎的复苏率及发育率。结果两组不同杂交组合(Smad2+/-♂×Smad2+/-♀和Smad2+/-♂×Smad2+/+♀)小鼠平均超排卵数分别为14.13枚和24.60枚;复苏率分别为90.16%和91.67%;囊胚发育率分别为73.08%和77.05%。这些结果表明Smad2基因敲除杂合子母鼠的超排数量明显低于野生型母鼠的超排数量,而二者胚胎解冻后的复苏率和囊胚发育率没有显著差异。因此我们主要通过对野生型小鼠超数排卵,然后与Smad2基因敲除杂合子雄鼠交配的方法获取胚胎,进行玻璃化冷冻保存,现已冻存胚胎1256枚。结论成功建立了Smad2基因敲除小鼠胚胎库。

关键词： Smad2 基因敲除小鼠胚胎玻璃化冷冻

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遗传性白内障动物模型的研究进展

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遗传 2007年第2期29卷 137-144页

作者：杨秀兰苏玉虹李文龙军事医学科学院实验动物中心北京100071 锦州医学院辽宁省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室锦州121000

白内障是严重影响公众健康的重大疾病。人群中,大部分遗传性白内障是外显率较高的常染色体显性遗传,但也有X连锁和常染色体隐性遗传存在。随着分子生物学技术的发展,出现了许多白内障遗传动物模型,这些模型有助于揭示白内障的发病机制,... 详细信息

白内障是严重影响公众健康的重大疾病。人群中,大部分遗传性白内障是外显率较高的常染色体显性遗传,但也有X连锁和常染色体隐性遗传存在。随着分子生物学技术的发展,出现了许多白内障遗传动物模型,这些模型有助于揭示白内障的发病机制,为晶状体的发育和生理学研究提供新的见解,还有助于进一步了解遗传、环境和营养等因素对晶状体的作用方式,并为白内障遗传病的诊断和治疗提供依据。文章综述了遗传性白内障动物模型的相关基因、突变形式及其研究进展。

关键词：白内障遗传动物模型

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