检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2023年第11期43卷 886-892页

作者：林家锋胡思漫蒋卓婧赵微李永刚绍兴市疾病预防控制中心微生物检验科绍兴312071 锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室锦州121000

目的筛选轮状病毒非结构蛋白2(nonstructural protein 2,NSP2)与宿主细胞的互作蛋白,为抗病毒靶标的发掘提供理论依据。方法NSP2-pGEX-6P-1重组质粒转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达,GST亲和层析法获得NSP2-GST纯化蛋白,Western blot进... 详细信息

目的筛选轮状病毒非结构蛋白2(nonstructural protein 2,NSP2)与宿主细胞的互作蛋白,为抗病毒靶标的发掘提供理论依据。方法NSP2-pGEX-6P-1重组质粒转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达,GST亲和层析法获得NSP2-GST纯化蛋白,Western blot进行验证。将NSP2-GST及GST纯化蛋白作为靶蛋白,通过GST pull-down捕获与MA104宿主细胞互作的差异蛋白。经银染后,将差异条带通过蛋白质胶内酶解及质谱法筛选出相应蛋白质,借助Protein Pilot平台过滤肽段,由Paragon算法获得蛋白质名称和相关的生物学功能。通过蛋白质互作网络图和GO功能注释分析,展示互作蛋白间的潜在联系。同时,利用HDOCK软件对排名前三的蛋白质进行分子对接预测,结合对接分数和置信分数加以验证,揭示蛋白质间的可视化对接模型。结果SDS-PAGE和Western blot表明NSP2重组蛋白纯化成功。经GST pull-down联合蛋白质谱鉴定,筛选出PKM2等10种可能与NSP2互作的宿主蛋白质;GO分析及互作图展示出RPS4X、EZR、SUPT16H、EIF2S3介导分子表达,PKM2、LDHA、ATP5A1参与能量代谢,HSP90、ACTB、ANXA2参与生物运动过程,并且彼此之间存在功能联系及互作网络。分子对接显示出PKM2、HSP90、RPS4X与NSP2存在互作关系,相互作用力强,能够形成稳定结构。结论成功发现宿主细胞中PKM2、HSP90、RPS4X等蛋白质与NSP2存在互作关系,为轮状病毒感染过程的探究及相关防控策略的制定提供参考。

关键词：轮状病毒非结构蛋白2 互作蛋白分子对接

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胸腺退化与重建的最新研究进展

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国际免疫学杂志 2022年第5期45卷 543-547页

作者：王哲凌虹张毓哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学免疫学教研室哈尔滨150081 锦州医科大学生命科学院辽宁锦州121000

胸腺是T淋巴细胞发育分化的主要场所,是由高度特化的胸腺上皮细胞构成的三维网络结构的组织器官。胸腺中含有不同发育和分化阶段的T淋巴细胞,这些T淋巴细胞形成了一个能够特异性识别不同种类抗原、同时对自身抗原产生耐受的T淋巴细胞库... 详细信息

胸腺是T淋巴细胞发育分化的主要场所,是由高度特化的胸腺上皮细胞构成的三维网络结构的组织器官。胸腺中含有不同发育和分化阶段的T淋巴细胞,这些T淋巴细胞形成了一个能够特异性识别不同种类抗原、同时对自身抗原产生耐受的T淋巴细胞库。随着成人年龄的不断增长,胸腺会随着年龄变化产生一定程度的结构萎缩和功能衰退。胸腺退化也是免疫衰老的重要诱因,胸腺退化会使CD4+T细胞群发生异质性改变,导致机体免疫力下降,增加机体患感染、自身免疫性疾病和肿瘤的风险。文章系统综述胸腺退化的机制,以及细胞因子、激素、细胞疗法等在促进胸腺重建中的作用。

关键词：胸腺退化胸腺再生免疫重建

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纳尔逊海湾病毒μNS蛋白与σNS蛋白的表达分析

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中国现代医学杂志 2020年第2期30卷 22-26页

作者：董晗郑国峰张军李永刚中国医科大学附属第四医院呼吸内科辽宁沈阳110005 锦州医科大学病原微生物教研室辽宁锦州121000

目的研究呼肠孤病毒科纳尔逊海湾病毒非结构蛋白μNS与σNS在感染及转染细胞中的表达和分析。方法在感染细胞中,通过免疫荧光方法在共聚焦显微镜下观察μNS蛋白的表达,以及μNS和σNS共定位情况;同时通过转染质粒的方法观察非感染细胞中... 详细信息

目的研究呼肠孤病毒科纳尔逊海湾病毒非结构蛋白μNS与σNS在感染及转染细胞中的表达和分析。方法在感染细胞中,通过免疫荧光方法在共聚焦显微镜下观察μNS蛋白的表达,以及μNS和σNS共定位情况;同时通过转染质粒的方法观察非感染细胞中μNS和σNS的表达及共定位情况。结果μNS蛋白在感染细胞和单独转染质粒细胞中都形成包涵体样结构,σNS和μNS蛋白相互作用,σNS和μNS蛋白共定位存在于包涵体样结构内。结论μNS不仅可以在病毒感染细胞中,而且可以在单独转染的细胞中形成包涵体样结构,σNS可以与μNS相互作用,共定位于感染和转染细胞的包涵体样结构中。

关键词：病毒蛋白基因表达调控,病毒

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人致病性呼肠孤病毒μNS互作蛋白筛选与鉴定

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中国公共卫生 2019年第4期35卷 480-483页

作者：董晗郑国峰李永刚张军中国医科大学附属第四医院呼吸科辽宁沈阳110005 锦州医科大学病原微生物教研室

目的筛选呼肠孤病毒μNS蛋白的胞内未知互作蛋白并对其进行定性鉴定,为呼肠孤病毒药物的开发提供参考依据。方法将构建好的载有M3基因片段的质粒pEFHAM3及空质粒分别转染至293T细胞中,通过免疫沉淀方法得到M3基因片段编码的μNS蛋白及... 详细信息

目的筛选呼肠孤病毒μNS蛋白的胞内未知互作蛋白并对其进行定性鉴定,为呼肠孤病毒药物的开发提供参考依据。方法将构建好的载有M3基因片段的质粒pEFHAM3及空质粒分别转染至293T细胞中,通过免疫沉淀方法得到M3基因片段编码的μNS蛋白及可能与之互作的宿主蛋白,对实验组及对照组蛋白分别进行蛋白质定性检测,分析差异蛋白。结果对所得蛋白样本进行蛋白质定性检测,得到丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、精胺合酶、角蛋白14、线粒体Rho GTPase 1、组蛋白H2B、40S核糖体蛋白S4、核糖体蛋白L26、肌动蛋白–2和未表征的蛋白质共9种差异蛋白。结论丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、精胺合酶、角蛋白14、线粒体Rho GTPase 1、组蛋白H2B、40S核糖体蛋白S4、核糖体蛋白L26、肌动蛋白–2和未表征的蛋白质中的1种或几种可能通过和μNS蛋白互作参与了呼肠孤病毒的复制。

关键词：呼肠孤病毒 μNS互作蛋白筛选鉴定

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牙龈卟啉单胞菌感染诱发雌鼠生殖异常的实验研究

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解放军医学杂志 2016年第8期41卷 653-659页

作者：魏克敏张轶博李新辽宁锦州锦州医科大学口腔临床医学 121000 辽宁锦州锦州医科大学病原微生物教研室 121000 锦州医科大学附属第二医院口腔修复科辽宁锦州121000

目的建立慢性感染牙龈卟啉单胞菌(P.g)的孕鼠模型,探讨牙龈卟啉单胞菌感染与早产及相关出生异常的关系。方法建立口腔牙周P.g感染模型,将52只雌鼠随机分为P.g感染组(n=26)和对照组(n=26)。对照组不做处理,P.g感染组将雌鼠麻醉,打开雌鼠... 详细信息

目的建立慢性感染牙龈卟啉单胞菌(P.g)的孕鼠模型,探讨牙龈卟啉单胞菌感染与早产及相关出生异常的关系。方法建立口腔牙周P.g感染模型,将52只雌鼠随机分为P.g感染组(n=26)和对照组(n=26)。对照组不做处理,P.g感染组将雌鼠麻醉,打开雌鼠第一磨牙髓腔并直接注入W83a菌株,再将牙填充,感染后6周,雌鼠进行合笼交配,以雌鼠阴道栓形成记为孕0d。提取牙根处肉芽组织的P.g进行培养。记录怀孕天数以及出生时子鼠体重,收集血清和胎盘组织以评估怀孕期间的全身及局部情况。结果在牙周感染P.g后,小鼠外周血血清TNF-α、IL-17、IL-6以及IL-1β水平明显升高。P.g感染组雌鼠的平均妊娠时间(18.25d)明显短于对照组(20.45d,P<0.01),子鼠出生体重也明显低于对照组(P<0.01)。免疫组织化学和PCR检测在胎盘组织发现了P.g。P.g感染可引起胎膜早破、胎盘早剥、滋养层和内皮细胞的退行性变及坏死,使胎盘组织内的多形核白细胞和巨噬细胞明显增加,同时伴有局部TNF-α和COX-2炎症因子表达增加。P.g感染雌鼠胎盘组织内皮细胞CD-31表达减少,DNA氧化损伤指标8-OHd G增加,凋亡因子caspase-3表达减少。结论感染P.g的雌鼠可出现早产及低出生体重等异常,进入胎盘的P.g可使血液和局部炎症因子表达增加。在孕前及时清除牙周或牙龈炎可防止部分生殖异常。

关键词：妊娠感染龈紫单胞菌细胞因子类早产生殖异常

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牙龈卟啉单胞菌对感染流感病毒肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响

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解放军预防医学杂志 2016年第4期34卷 489-492页

作者：王圣男李新李永刚潘亚萍锦州医科大学附属第二医院修复科辽宁锦州121001 辽宁医学院病原微生物实验室中国医科大学附属口腔医院口腔微生物教研室

目的观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)对感染流感病毒(H1N1)肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响,以期为探讨牙周病在肺疾病发病机制中的作用提供临床依据。方法利用不同MOI值***与MOI值为2的H1N1共同感染于肺上皮细胞,未感... 详细信息

目的观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)对感染流感病毒(H1N1)肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响,以期为探讨牙周病在肺疾病发病机制中的作用提供临床依据。方法利用不同MOI值***与MOI值为2的H1N1共同感染于肺上皮细胞,未感染的细胞作为阴性对照。利用硝酸还原酶法测定上清液中NO的浓度;Westernblot检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达水平。结果各组细胞在4 h、8 h、12 h、24 h内NO生成均有增加。4 h、8 h、12 h、24 h后E组NO的量分别为41.404±3.079、78.945±3.001、592.983±1.690、2360.660±4.199μmol/L,8 h、12 h、24 h与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。12 h、24 h ***促进H1N1感染的肺上皮细胞i NOS蛋白水平的表达,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。结论 ***与H1N1共同作用于肺上皮细胞能够促进i NOS的表达,最终促进NO的生成。

关键词：牙龈卟啉单胞菌流感病毒肺上皮细胞一氧化氮一氧化氮合酶

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