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营养学报 2017年第3期39卷 294-298页

作者：董璐萌王雅溶陈阳尹田鹏李小波杜联峰陈彩玉辛雪梅遵义医学院珠海校区珠海市中药基础及应用研究重点实验室珠海519000

目的探讨菊花提取物(Chrysanthemum morifoliuin Ramat extract,CRE)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致帕金森病(PD)小鼠的保护作用及机制。方法 C57BL/6小鼠40只随机分为4组,每组10只,分别为正常组(NC)、模型组(MC)、CRE低剂量组(LC)和CRE高剂量组(HC)。LG和HC每日以CRE溶液灌胃,剂量分别为100、200mg/kg qd,NC和MC每日以等量蒸馏水灌胃,连续19 d。在第11d,除NC组外,其余组小鼠腹腔注射MPTP溶液,NC组注射等体积的生理盐水,1/d,连续5d。以爬杆法、转轴法和拉力法评价PD小鼠的行为学能力,免疫组化法(IHC)观察酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数,ESI-QTOF-MS法检测纹状体多巴胺含量,采用分光光度法测定小鼠脑黑质中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平的变化。结果 MPTP诱导小鼠大脑发生病变,MG组行为学评分、黑质TH阳性细胞表达量、纹状体多巴胺水平及大脑黑质SOD、GSH-Px活性均显著下降,脑黑质MDA含量显著升高。与MG比较,LG、HG组行为学障碍显著改善,小鼠黑质TH阳性神经元表达、纹状体内多巴胺含量及小鼠脑黑质内SOD、GSH-Px水平均显著提高,MDA含量显著下降。结论 CRE对MPTP诱发的PD小鼠有良好的治疗作用,可能通过抑制氧化损伤起到对PD小鼠起保护作用。

关键词：菊花帕金森病(PD) 酪氨酸羟化酶多巴胺氧化应激

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肺炎链球菌血红素结合脂蛋白PiuA的表达、纯化和表征

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微生物学通报 2018年第11期45卷 2409-2417页

作者：乐尧金郭众阳小燕遵义医学院珠海校区生物工程系珠海市中药基础及应用研究重点实验室广东珠海519041

【背景】肺炎链球菌是社区获得性肺炎最常见的致病菌之一,它也会引起脑膜炎、鼻窦炎、中耳炎、菌血症等一系列疾病,对人类(特别是儿童、老人、免疫缺陷患者)健康造成重大威胁。铁是肺炎链球菌生存和感染所必需的元素之一,其中血红素转... 详细信息

【背景】肺炎链球菌是社区获得性肺炎最常见的致病菌之一,它也会引起脑膜炎、鼻窦炎、中耳炎、菌血症等一系列疾病,对人类(特别是儿童、老人、免疫缺陷患者)健康造成重大威胁。铁是肺炎链球菌生存和感染所必需的元素之一,其中血红素转运系统PiuABCD是肺炎链球菌最重要的铁转运系统。【目的】克隆、表达和纯化肺炎链球菌血红素转运系统脂蛋白PiuA,并在体外表征PiuA蛋白的血红素结合特性。【方法】将肺炎链球菌D39菌株中的piuA(spd_1652)基因连接到载体pBAD-HisA上,在大肠杆菌Top10菌株中进行异源表达,然后运用Ni-NTA亲和层析纯化PiuA-His蛋白,并用肠激酶切掉His标签获得不含标签的PiuA蛋白,最后运用圆二色谱、紫外光谱和荧光光谱表征PiuA蛋白的血红素结合特性。【结果】构建了pBAD/HisA-PiuA重组表达载体,获得了纯度大于95%的PiuA蛋白,圆二色谱显示PiuA蛋白与Hemin结合后,其二级结构不发生改变;紫外光谱结果显示PiuA蛋白具有血红素结合能力;荧光光谱结果显示apo-PiuA蛋白与Hemin结合常数K=3.4×10~5 L/mol。【结论】肺炎链球菌血红素转运系统脂蛋白PiuA能够特异地结合血红素,为肺炎链球菌的生存和感染提供必需的铁源,PiuA蛋白的体外表征结果为针对PiuABCD血红素转运系统设计抗菌药物奠定了基础。

关键词：肺炎链球菌血红素结合脂蛋白PiuA 圆二色谱紫外光谱荧光光谱

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绿原酸对Aβ25.35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

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实用医学杂志 2017年第12期33卷 1913-1916页

作者：林茂王敏刘芳罗小金高仕琴王吉博彭浩王春梅遵义医学院珠海校区珠海市重点实验室:中药基础及应用研究实验室广东省珠海市519041

目的:研究绿原酸(CGA)对β淀粉样蛋白_(25-35)(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞凋亡的保护作用和机制。方法:20μmol/L的Aβ_(25-35)诱导PC12细胞构建细胞损伤模型,并以5个不同浓度CGA干预,CCK-8法检测细胞存活率以确定后续实验CGA的3个浓... 详细信息

目的:研究绿原酸(CGA)对β淀粉样蛋白_(25-35)(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞凋亡的保护作用和机制。方法:20μmol/L的Aβ_(25-35)诱导PC12细胞构建细胞损伤模型,并以5个不同浓度CGA干预,CCK-8法检测细胞存活率以确定后续实验CGA的3个浓度。随后,细胞随机分为Control组、Model组及3个浓度CGA组。流式细胞术检测细胞凋亡率;比色法检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;荧光染色检测线粒体膜电位(MMP);Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达。结果:CGA各组较Model组细胞存活率升高、凋亡率下降,SOD和GSH-Px活力升高、MDA水平降低,MMP耗散减少,Caspase-3表达下降(P<0.05)。结论:CGA对Aβ_(25-35)致PC12细胞凋亡有保护作用,其机制可能与改善细胞抗氧化能力和线粒体损伤有关。

关键词：绿原酸 β淀粉样蛋白 PC12细胞凋亡阿尔茨海默病

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黄连浸出液对脑缺血大鼠海马区BDNF mRNA表达的影响

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基因组学与应用生物学 2019年第11期38卷 5244-5249页

作者：牛宪立张青峰姬可平魏妮娜王润发彭冬冬曾婷婷遵义医学院药理学教研室暨贵州省基础药理重点实验室遵义563000 遵义医学院珠海校区生物工程系珠海519041 珠海市中药基础与应用研究重点实验室珠海519040

为了探究黄连浸出液对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA表达的影响,本研究随机将50只雄性SD大鼠(240±20)g分为假手术组、模型组、黄连浸出液低剂量(2.5 g/kg)、中剂量(5.0 g/kg)和高剂量(10.0 g/kg)治疗... 详细信息

为了探究黄连浸出液对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA表达的影响,本研究随机将50只雄性SD大鼠(240±20)g分为假手术组、模型组、黄连浸出液低剂量(2.5 g/kg)、中剂量(5.0 g/kg)和高剂量(10.0 g/kg)治疗组,采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型,假手术组不予线栓处理,术后对大鼠进行神经功能评分。对各治疗组给予灌胃治疗,按照人和大鼠等效剂量关系换算,每只大鼠1d灌胃两次,每次2.5 mL,连续灌胃3d。模型组、假手术组用等量生理盐水灌胃。应用RT-PCR测定了黄连浸出液对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区BDNF表达的影响。与假手术组(BDNF mRNA相对表达量为(0.386±0.011)比较),模型组大鼠海马区BDNF mRNA表达显著增加,相对表达量为(0.458±0.029),差异具有统计学意义(p<0.05);与模型组比较,黄连中剂量和高剂量治疗组BDNF mRNA的表达均显著增加,相对表达量分别为(0.622±0.040)和(0.518±0.033),差异均有统计学意义(p<0.05);与黄连高剂量组相比,中剂量治疗组差异更为显著(p<0.05)。本研究表明,黄连浸出液可促进脑缺血再灌注损伤大鼠海马区BDNF mRNA的表达,改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能,保护神经元,黄连浸出液中剂量(5.0 g/kg)作用更为明显。

关键词：黄连脑缺血再灌注脑源性神经营养因子

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乌头碱致斑马鱼和人心肌细胞心率失常模型的研究

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中国临床药理学杂志 2018年第12期34卷 1454-1456页

作者：崔国祯李婷英师伟王亮李铭源遵义医学院珠海校区生物工程系珠海市中药基础及应用研究重点实验室澳门大学中华医药研究院中药质量研究国家重点实验室

目的研究天然产物乌头碱致斑马鱼和人心肌细胞心率失常模型建立的可行性。方法将2 d大的心脏表达绿色荧光的斑马鱼幼鱼随机分为4组:对照组（0.1%DMSO）和低、中、高3个剂量实验组(1,3,10μmol·L-1乌头碱),每组12条。作用1 d后,用... 详细信息

目的研究天然产物乌头碱致斑马鱼和人心肌细胞心率失常模型建立的可行性。方法将2 d大的心脏表达绿色荧光的斑马鱼幼鱼随机分为4组:对照组（0.1%DMSO）和低、中、高3个剂量实验组(1,3,10μmol·L-1乌头碱),每组12条。作用1 d后,用活细胞工作站系统成像并分析斑马鱼心室跳动相对荧光的强度和心室的心搏量。将人胚胎干细胞诱导成具有跳动功能的心肌细胞,经1μmol·L-1乌头碱作用后,分析其自动跳动时钙离子的闪烁情况。结果经乌头碱作用1 d后的斑马鱼幼鱼,对照组心博量为（233.89±30.09）p L,低、中、高剂量实验组的心博量分别为（177.23±29.05）,（136.32±43.34）,（42.63±23.34）p L,其中,高剂量实验组心搏量显著减少（P<0.05）。作用10min后的人心肌细胞,对照组钙离子振荡频率和振荡幅度分别为21.67±2.86,102.20±7.35,低剂量实验组钙离子振荡频率和振荡幅度分别为46.66±6.66,57.06±6.63,药物处理后,钙离子振荡频率显著增加（P<0.05）,振幅显著降低（P<0.05）。结论经乌头碱作用后,斑马鱼幼鱼和人心肌细胞均表现出心率失常的特征,为抗心律失常药物开发提供了体内外药物筛选模型。

关键词：心律失常乌头碱斑马鱼人心肌细胞

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丹参素衍生物对斑马鱼促血管新生作用的研究

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中国药理学通报 2016年第6期32卷 795-800页

作者：崔国祯徐燕玲孙安露单璐琛王玉强李铭源遵义医学院珠海校区生物工程系珠海市中药基础及应用研究重点实验室广东珠海519041 澳门大学中华医药研究院中药质量研究国家重点实验室澳门999078 暨南大学药学院新药研究所广东广州510632

目的观察丹参素衍生物(ADTM)对斑马鱼胚胎血管新生的影响,并探讨其可能作用的信号通路。方法选择正常血管转基因斑马鱼和血管生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)诱导血管损伤转基因斑马鱼两种模型,分别给予50、100、200μmol·L^(-1... 详细信息

目的观察丹参素衍生物(ADTM)对斑马鱼胚胎血管新生的影响,并探讨其可能作用的信号通路。方法选择正常血管转基因斑马鱼和血管生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)诱导血管损伤转基因斑马鱼两种模型,分别给予50、100、200μmol·L^(-1)的ADTM干预处理,以0.1%的DMSO为空白对照,分别观察不同浓度的ADTM对斑马鱼肠下静脉血管(SIVs)的直径和内皮细胞数以及节间血管(ISVs)生长的影响,并对VRI和ADTM处理后的斑马鱼做转录组学研究。用荧光定量PCR的方法对转录组测序的4个基因进行验证。结果对于正常转基因斑马鱼模型,ADTM处理后,斑马鱼的SIVs血管直径明显增加,内皮细胞的数目轻微增加;在VRI损伤模型中,ADTM表现出修复ISVs损伤的效果。转录组分析表明,19个明显变化的基因富集在胰岛素信号通路。荧光定量PCR的结果与转录组中获得的序列吻合。结论对于正常和血管损伤的斑马鱼模型,ADTM均有促血管新生的效果,其作用机制可能与胰岛素信号通路的激活有关。

关键词：丹参素衍生物血管新生血管修复斑马鱼转录组胰岛素信号通路

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天然产物小分子抑制剂筛选方法的研究进展

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中药药理与临床 2016年第2期32卷 243-247页

作者：邹佳陈阳蔡仕宁王雅溶李铭源崔国祯遵义医学院珠海校区生物工程系珠海市中药基础及应用研究重点实验室珠海519041 澳门大学中华医药研究院中药质量研究国家重点实验室澳门999078

天然产物是小分子抑制剂的重要来源之一。然而由于天然产物种类繁多,结构多样,运用传统方法筛选效率低,工作量大。因此,寻找操作简单、效率高、成本低的抑制剂筛选方法一直是相关研究人员探索的课题。本文综述了近十年报道的从天然产物... 详细信息

天然产物是小分子抑制剂的重要来源之一。然而由于天然产物种类繁多,结构多样,运用传统方法筛选效率低,工作量大。因此,寻找操作简单、效率高、成本低的抑制剂筛选方法一直是相关研究人员探索的课题。本文综述了近十年报道的从天然产物中筛选小分子抑制剂的方法,其中重点阐述了色谱质谱检测系统,并对筛选方法的运用前景进行讨论和展望,以供同行参考。

关键词：小分子抑制剂筛选方法天然产物鉴定

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牛膝对小鼠非酒精性脂肪肝改善作用研究

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营养学报 2018年第1期40卷 93-95页

作者：胡娅娅陈阳李文娜黄欢郭亚东邓亮遵义医学院珠海校区珠海市中药基础及应用研究重点实验室珠海5190901 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室昆明650500

非酒精性脂肪肝病（non—alcoholic fatty liver disease，NAFLD）以脂肪在肝内沉积超过肝脏质量的5％～10％，弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性为主要特征，包括从肝单纯脂肪变性到非酒精性脂肪肝炎（non—alcoholic steatohepatitis，NASH... 详细信息

非酒精性脂肪肝病（non—alcoholic fatty liver disease，NAFLD）以脂肪在肝内沉积超过肝脏质量的5％～10％，弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性为主要特征，包括从肝单纯脂肪变性到非酒精性脂肪肝炎（non—alcoholic steatohepatitis，NASH）最后发展为纤维化、癌变的一种临床病理综合征。高脂饮食，营养失衡导致的肥胖和胰岛素抵抗是NAFLD发病的重要原因，已成为我国常见的慢性肝病之一，严重危害人民健康。

关键词：牛膝胆碱蛋氨酸缺乏非酒精性脂肪肝肝纤维化

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玉龙乌头的化学成分研究

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云南大学学报（自然科学版） 2018年第1期40卷 148-153页

作者：尹田鹏陈阳舒燕蔡乐丁中涛遵义医学院珠海校区珠海市中药基础及应用研究重点实验室广东珠海519041 云南大学云南省高校功能分子分析与生物转化重点实验室化学科学与工程学院云南昆明650091

运用色谱分离材料和手段,结合现代波谱分析技术,从乌头属植物玉龙乌头中首次分离鉴定了12个非生物碱成分:4-hydroxy-4-(5-(hydroxymethyl)furan-2-yl)butan-2-one(1),(E)-4-[5-(hydroxymethyl)furan-2-yl]but-3-en-2-one(2),5-羟甲基糠醛(3),E-3-carboxy-2-petene-dioate 5-methyl ester(4),Z-3-carboxy-2-petenedioate 5-methyl ester(5),对羟基反式肉桂酸(6),对羟基顺式肉桂酸(7),藜芦酸甲酯(8),环氧松柏醇(9),酪醇(10),连翘脂素(11)和β-sitosteryl-3-O-β-D-glucopyranoside-2'-O-palmitate(12).其中化合物1是一个新天然产物,其数据经2D NMR进行了归属并首次报道.

关键词：乌头属玉龙乌头化学成分核磁共振波谱法

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一种快速提取质粒DNA的方法

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保健文汇 2017年第12期 294-295页

作者：许朋余兰冯昆遵义医学院遵义医学院珠海校区珠海市中药基础及应用研究重点实验室

分子生物学技术发展迅猛,提取质粒DNA方法向着高通量、快速高效、广泛适用的方向发展.本实验采用二氧化硅修饰的磁珠设计了一种快速分离质粒DNA的试剂盒,并设计了多种引物,探索同一质粒DNA对两对引物,同一基因组DNA对两对引物进行PCR验... 详细信息

分子生物学技术发展迅猛,提取质粒DNA方法向着高通量、快速高效、广泛适用的方向发展.本实验采用二氧化硅修饰的磁珠设计了一种快速分离质粒DNA的试剂盒,并设计了多种引物,探索同一质粒DNA对两对引物,同一基因组DNA对两对引物进行PCR验证.结果表明:含磁性磁珠的试剂盒能够在10min内完成提取,产量较高;且样品对PCR无抑制作用,并适用于多种样品,应用此方法提取的DNA还可用于多重PCR.

关键词：提取质粒

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