检索结果-内蒙古大学图书馆

遵义医学院学报 2015年第5期38卷 479-487页

作者：王燕张金莉彭莉萍张晟春遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041 遵义医学院第五附属医院检验科广东珠海519041

目的构建在两种结肠癌细胞株SW480和SW620中微小RNA的差异表达文库,分离与结肠癌转移具有潜在相关性的微小RNA。方法以具有不同转移潜能的结肠癌细胞株SW480和SW620为材料,应用改良抑制性消减杂交联合反向斑点杂交技术,分离在两种细胞... 详细信息

目的构建在两种结肠癌细胞株SW480和SW620中微小RNA的差异表达文库,分离与结肠癌转移具有潜在相关性的微小RNA。方法以具有不同转移潜能的结肠癌细胞株SW480和SW620为材料,应用改良抑制性消减杂交联合反向斑点杂交技术,分离在两种细胞中差异表达的微小RNA,利用生物软件BLAST及MIREAP将分离到的微小RNA序列进行分析比对。结果鉴定出在SW480和SW620之间表达有明显差异的24种微小RNA,其中4种为新发现的微小RNA,并提交至Gen Bank数据库。这些微小RNA中经文献查询已知部分参与了结肠癌的发生发展过程,部分在基因转录、细胞周期循环、信号传导和细胞凋亡过程具有一定的功能。结论经过改良的抑制消减杂交技术可以高效地分离不同标本间差异表达的微小RNA;本研究得出的结果可为结肠癌细胞转移的分子生物学机制研究提供新的方向。

关键词：微小RNA 结直肠癌转移抑制性消减杂交反向斑点杂交技术

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UL27、UL29基因shRNA表达载体的构建及对HSV-2的干扰效应研究

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生物技术通报 2014年第5期30卷 202-209页

作者：吕延成潘晓瑜黄畅丁娟遵义医学院珠海校区生化与分子细胞生物学教研室珠海519040

探讨Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27、UL29基因联合靶向siRNA对HSV-2复制的影响。构建UL27、UL29基因的siRNA的重组表达载体并转染293细胞,通过实时荧光定量PCR技术和蛋白质印迹方法检测UL27、UL29基因的表达... 详细信息

探讨Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27、UL29基因联合靶向siRNA对HSV-2复制的影响。构建UL27、UL29基因的siRNA的重组表达载体并转染293细胞,通过实时荧光定量PCR技术和蛋白质印迹方法检测UL27、UL29基因的表达,终点滴定法检测细胞上清液中的各组病毒滴度,MTT法检测细胞的存活率。结果显示:(1)成功构建短发夹RNA(shRNA)重组表达载体。(2)转染后48 h,与空白组(空载体)相比,UL27 shRNA75组对UL27基因mRNA的抑制率为75.17%(P<0.05),UL29 shRNA1461组对UL29基因mRNA抑制率为66.08%,具有显著性差异(P<0.05)。UL27 shRNA75联合UL29 shRNA1461联合干扰组对UL27基因抑制率约为91.28%,UL29基因表达抑制率约为80.40%,与空白组比较具有显著性差异(P<0.05)。(3)终点滴定法结果显示单干扰组和联合干扰组可不同程度降低上清液中的病毒感染滴度,与空白组比较差异性显著(P<0.01)。(4)Western blot检测目的基因蛋白,单干扰组与联合干扰组可不同程度降低目的基因蛋白的表达,其中UL27shRNA75+UL29 shRNA1461联合干扰组能显著抑制相应的蛋白表达水平,蛋白表达量明显减少,与单干扰组相比具有显著差异(P<0.05)。(5)经MTT法检测,UL27 shRNA75、UL29 shRNA1461、UL27 shRNA75+UL29 shRNA1461联合干扰组的细胞存活率明显提高,差异有显著意义(P<0.05)。构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27、pGPU6/GFP/Neo-UL29重组表达载体,能在体外细胞水平上不同程度的干扰HSV-2 UL27、UL29基因表达,UL27、UL29联合干扰效率更高,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制。

关键词： RNA干扰短发夹RNA Ⅱ型单纯疱疹病毒 UL27基因 UL29基因

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菟丝子含药血清对大鼠肢芽细胞、骨形成蛋白2及Ⅱ型胶原表达的影响

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山东大学学报（医学版） 2014年第7期52卷 37-40页

作者：刘星李啸红王燕邹聪聪遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041 遵义医学院珠海校区人体解剖与组织胚胎学教研室广东珠海519041

目的探讨菟丝子含药血清对SD大鼠胚胎肢芽细胞增殖与分化、细胞中骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备高、中、低剂量(40、20、10 g/kg)菟丝子含药血清和正常血清。取E15后肢芽... 详细信息

目的探讨菟丝子含药血清对SD大鼠胚胎肢芽细胞增殖与分化、细胞中骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备高、中、低剂量(40、20、10 g/kg)菟丝子含药血清和正常血清。取E15后肢芽制成细胞悬液,接种到细胞培养板中,分别加入高、中、低剂量菟丝子含药血清和正常血清,作为高、中、低剂量组和阴性对照组。体外培养72 h,MTT法检测肢芽细胞的增殖,阿利新蓝染色检测肢芽细胞的分化,RT-PCR法检测肢芽细胞中BMP-2、Ⅱ型胶原mRNA的表达,Western blotting检测Ⅱ型胶原蛋白的表达。结果低、中剂量组细胞增殖较快,吸光度值高于阴性对照组(P<0.05);中剂量组软骨细胞集落数多于阴性对照组(P<0.05),高剂量组软骨细胞集落数低于阴性对照组(P<0.05);低、中剂量组BMP-2 mRNA表达水平高于阴性对照组(P<0.05),高剂量组BMP-2 mRNA低于阴性对照组(P<0.05);各剂量组Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达水平均高于阴性对照组(P<0.05)。结论不同剂量菟丝子含药血清均可促进肢芽细胞的增殖和Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达;高剂量菟丝子含药血清可下调BMP-2 mRNA的表达水平,抑制肢芽细胞的分化。

关键词：菟丝子含药血清肢芽细胞骨形成蛋白2 Ⅱ型胶原

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腺病毒介导的IL-24增强紫杉醇对A549肺腺癌细胞生长的抑制作用

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第11期30卷 1150-1153,1158页

作者：徐明菊李敏敏杨吉成郭锦锦孙万邦遵义医学院珠海校区贵州省免疫学研究生教育创新基地广东珠海519041 苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的探讨腺病毒介导的白细胞介素24(Ad-IL-24)联合紫杉醇对体外培养的人肺腺癌A549细胞生长的影响。方法用Ad-IL-24、紫杉醇、Ad-IL-24联合紫杉醇处理A549细胞,以CCK-8法测定细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。结果 A... 详细信息

目的探讨腺病毒介导的白细胞介素24(Ad-IL-24)联合紫杉醇对体外培养的人肺腺癌A549细胞生长的影响。方法用Ad-IL-24、紫杉醇、Ad-IL-24联合紫杉醇处理A549细胞,以CCK-8法测定细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。结果 Ad-IL-24可明显抑制人肺腺癌A549细胞生长并诱导细胞凋亡,与紫杉醇联合处理后,其抑制肺癌细胞生长及诱导细胞凋亡作用明显优于单用紫杉醇组及Ad-IL-24组,并引起G2/M期阻滞。结论 Ad-IL-24感染肺癌A549细胞可增强紫杉醇对肿瘤细胞生长的抑制作用。

关键词：重组腺病毒白细胞介素24 紫杉醇肺癌细胞细胞生长

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结肠癌SW480细胞冻存与复苏方法的改进

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肿瘤药学 2014年第2期4卷 117-120页

作者：彭莉萍王燕姬可平张金莉遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

目的探索一种程序简洁、易于操作的细胞株冻存与复苏的方法。方法采用常规方法体外培养肠癌细胞株SW480,胰酶消化后,收集细胞悬液,A组细胞采用传统冻存与复苏方法,B组采用改良的冻存与复苏方法,分别于2周、3个月、6个月后立即复苏冻存... 详细信息

目的探索一种程序简洁、易于操作的细胞株冻存与复苏的方法。方法采用常规方法体外培养肠癌细胞株SW480,胰酶消化后,收集细胞悬液,A组细胞采用传统冻存与复苏方法,B组采用改良的冻存与复苏方法,分别于2周、3个月、6个月后立即复苏冻存细胞进行培养,观察细胞的存活情况,并于1周内不同时间点用MTT法检测细胞增殖情况并进行比较。结果采用改良方法冻存与复苏的SW480细胞存活率及生长曲线与传统方法比较无显著差异,细胞贴壁率、形态学特点及增殖能力无明显变化。结论改良的细胞冻存体系以及快速复苏法是细胞株冻存与复苏的一种可行方法,且更加方便快捷。

关键词： SW480 冻存复苏 SW480

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Ad-IL-24联合DDP对A549细胞体外生长的影响

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中国现代医药杂志 2014年第7期16卷 1-4页

作者：郭锦锦王少慧孙万邦杨吉成盛伟华缪竞诚遵义医学院珠海校区贵州省免疫学研究生教育创新基地广东珠海519041 苏州大学细胞与分子生物学教研室

目的探讨白细胞介素24基因腺病毒载体(Ad-IL-24)联合顺铂体外对人肺腺癌的抑制效应及诱导人肺腺癌的细胞凋亡机制。方法用Ad-IL-24、DDP、Ad-IL-24联合DDP分别体外作用于A549细胞12h、24h、48h,采用CCK8法及流式细胞术(FCM)分别检测细... 详细信息

目的探讨白细胞介素24基因腺病毒载体(Ad-IL-24)联合顺铂体外对人肺腺癌的抑制效应及诱导人肺腺癌的细胞凋亡机制。方法用Ad-IL-24、DDP、Ad-IL-24联合DDP分别体外作用于A549细胞12h、24h、48h,采用CCK8法及流式细胞术(FCM)分别检测细胞增殖抑制率和细胞凋亡率。结果 Ad-IL-24作用于A549细胞48h后细胞增殖抑制率为27.7%,Ad-IL-24联合DDP作用于A549细胞48h后细胞增殖抑制率为45.2%;Ad-IL-24作用于A549细胞48h细胞凋亡率为22.9%,联合用药后细胞凋亡率为35.9%。结论 Ad-IL-24对A549细胞具有生长抑制作用,能引起A549细胞凋亡,联合DDP用药后效果更佳,Ad-IL-24具有化疗增敏效应。

关键词：腺病毒白细胞介素24 顺铂肺腺癌基因治疗

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改良消减杂交技术用以筛选差异表达非编码小RNA的应用初探

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生物技术通报 2013年第2期29卷 146-150页

作者：王燕彭莉萍陈锦珍刘星罗镇明周天会遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室珠海519041 遵义医学院第五附属医院普外科珠海519041

旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA的方法。以乳腺癌细胞株MCF7和非癌乳腺上皮细胞HBL100为材料,用RNA分离试剂盒分离获得长度为18-100 nt的RNA片段,3'端添加poly(A)尾后利用smart技术进行反转录,在反... 详细信息

旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA的方法。以乳腺癌细胞株MCF7和非癌乳腺上皮细胞HBL100为材料,用RNA分离试剂盒分离获得长度为18-100 nt的RNA片段,3'端添加poly(A)尾后利用smart技术进行反转录,在反转录体系中加入生物素标记的dATP,得到单链cDNA;结合生物素-磁珠分离技术将cDNA与待测RNA进行消减杂交并以U6为内参验证消减结果 ;最后利用巢式PCR扩增杂交产物,PCR产物插入T载体后,挑取阳性克隆进行测序。结果显示,总RNA按不同大小片段分离富集后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,于100 nt以下显示较亮条带;以U6为内参检测杂交效率,杂交后U6于33个循环时可见少量扩增条带;杂交产物经巢式PCR和电泳表明在100 nt范围内有明显条带,得到差异表达的非编码小RNA。经过改良的消减杂交方法可以快速、有效的检测不同标本中差异表达的非编码小RNA。

关键词：非编码小RNA 消减杂交乳腺癌细胞

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细胞内碱性蛋白显示实验方法的改进

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课程教育研究（新教师教学） 2014年第24期 30-30页

作者：刘星冯昆张青峰姬可平王燕遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海 519041

利用经典实验方法显示碱性蛋白实验结果与理论上存在较大的偏差，通过对碱性固绿的浓度、PH值，抽提和染色时间的调整，对实验方法进行了改进，获得了较为理想的实验结果。该方法可应用于实验教学中，有利于加深学生对碱性蛋白分布情况... 详细信息

利用经典实验方法显示碱性蛋白实验结果与理论上存在较大的偏差，通过对碱性固绿的浓度、PH值，抽提和染色时间的调整，对实验方法进行了改进，获得了较为理想的实验结果。该方法可应用于实验教学中，有利于加深学生对碱性蛋白分布情况的理解。

关键词：碱性蛋白 PH值碱性固绿改进

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应用ITS序列对中药材红芪进行鉴定的有效性分析

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遵义医学院学报 2013年第4期36卷 323-326页

作者：魏妮娜王晓明牛宪立姬可平遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

目的应用ITS序列对中药材红芪进行鉴别,以验证DNA条形码技术从分子水平鉴定中草药的可行性。方法提取中药材红芪的总DNA,扩增其rDNA中ITS序列并测序,采用软件CodonCode Aligner对测序峰图进行校对拼接。以相似性搜索法,K-2P进行比对分... 详细信息

目的应用ITS序列对中药材红芪进行鉴别,以验证DNA条形码技术从分子水平鉴定中草药的可行性。方法提取中药材红芪的总DNA,扩增其rDNA中ITS序列并测序,采用软件CodonCode Aligner对测序峰图进行校对拼接。以相似性搜索法,K-2P进行比对分析及用MEGE5.1软件计算种间遗传距离,并构建NJ系统聚类树直观获得鉴定结果。结果中药材红芪与同属物种K-2P遗传距离在0.004,中药材红芪与黄芪的K-2P遗传距离为0.153;所构建的NJ系统发育树能将中药材红芪与其他相关物种进行有效区分。结论中药材红芪的ITS序列可作为其分子水平鉴定依据,验证了ITS条形码技术对中药材鉴定的有效性。

关键词：红芪 rDNA ITS序列鉴定

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琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立

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遵义医学院学报 2012年第4期35卷 276-278页

作者：王燕彭莉萍罗镇明遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染。方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染... 详细信息

目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染。方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染法及后染法的染色效果。结果实验结果显示上样缓冲液中含0.4%Goldview的预染样品法电泳检测核酸的效果最佳且能检测的核酸样品浓度在16.5ng或以上为最佳。结论核酸染料Goldview在核酸的琼脂糖凝胶电泳中使用的最佳方案为预染样品法,实验中推荐浓度达到普通实验要求,并且最易控制对周围环境的污染。

关键词：琼脂糖凝胶电泳核酸染料 Goldview

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