检索结果-内蒙古大学图书馆

遵义医学院学报 2014年第2期37卷 165-169页

作者：张青峰张芳婷申慧芳高书颖遵义医学院珠海校区生物化学与分子生物学教研室广东珠海519041 北京大学深圳医院中心实验室广东深圳518036

目的构建携带人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在HeLa细胞中的表达。方法采用Gateway技术使克隆载体pENTR221-hTERT与慢病毒表达载体pLenti6.3/V5-DEST进行重组反应,构建重组慢病毒载体pLenti6.3/V5-hTERT;将重组... 详细信息

目的构建携带人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在HeLa细胞中的表达。方法采用Gateway技术使克隆载体pENTR221-hTERT与慢病毒表达载体pLenti6.3/V5-DEST进行重组反应,构建重组慢病毒载体pLenti6.3/V5-hTERT;将重组慢病毒载体与病毒包装质粒混合物pLP1、pLP2和pLP/VSVG共转染人胚肾293FT细胞,制备重组慢病毒颗粒;将重组慢病毒感染HeLa细胞,利用杀稻瘟菌素筛选阳性细胞克隆,PCR法检测外源hTERT基因在阳性细胞中的染色体整合状况,RT-PCR检测重组慢病毒感染对细胞hTERT基因mRNA表达的影响。结果经鉴定,重组慢病毒载体pLenti6.3/V5-hTERT携带hTERT基因,hTERT基因包装至病毒颗粒。重组慢病毒感染HeLa细胞后,得到具有杀稻瘟菌素抗性的细胞克隆,其染色体DNA整合有外源hTERT基因,细胞内hTERT基因mRNA的表达水平高于未感染慢病毒的对照细胞。结论成功构建了携带hTERT基因的重组慢病毒载体,能够提高HeLa细胞hTERT基因mRNA的表达量。

关键词：人端粒酶逆转录酶基因重组慢病毒共转染

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改良消减杂交技术用以筛选差异表达非编码小RNA的应用初探

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生物技术通报 2013年第2期29卷 146-150页

作者：王燕彭莉萍陈锦珍刘星罗镇明周天会遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室珠海519041 遵义医学院第五附属医院普外科珠海519041

旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA的方法。以乳腺癌细胞株MCF7和非癌乳腺上皮细胞HBL100为材料,用RNA分离试剂盒分离获得长度为18-100 nt的RNA片段,3'端添加poly(A)尾后利用smart技术进行反转录,在反... 详细信息

旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA的方法。以乳腺癌细胞株MCF7和非癌乳腺上皮细胞HBL100为材料,用RNA分离试剂盒分离获得长度为18-100 nt的RNA片段,3'端添加poly(A)尾后利用smart技术进行反转录,在反转录体系中加入生物素标记的dATP,得到单链cDNA;结合生物素-磁珠分离技术将cDNA与待测RNA进行消减杂交并以U6为内参验证消减结果 ;最后利用巢式PCR扩增杂交产物,PCR产物插入T载体后,挑取阳性克隆进行测序。结果显示,总RNA按不同大小片段分离富集后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,于100 nt以下显示较亮条带;以U6为内参检测杂交效率,杂交后U6于33个循环时可见少量扩增条带;杂交产物经巢式PCR和电泳表明在100 nt范围内有明显条带,得到差异表达的非编码小RNA。经过改良的消减杂交方法可以快速、有效的检测不同标本中差异表达的非编码小RNA。

关键词：非编码小RNA 消减杂交乳腺癌细胞

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细胞内碱性蛋白显示实验方法的改进

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课程教育研究（新教师教学） 2014年第24期 30-30页

作者：刘星冯昆张青峰姬可平王燕遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海 519041

利用经典实验方法显示碱性蛋白实验结果与理论上存在较大的偏差，通过对碱性固绿的浓度、PH值，抽提和染色时间的调整，对实验方法进行了改进，获得了较为理想的实验结果。该方法可应用于实验教学中，有利于加深学生对碱性蛋白分布情况... 详细信息

利用经典实验方法显示碱性蛋白实验结果与理论上存在较大的偏差，通过对碱性固绿的浓度、PH值，抽提和染色时间的调整，对实验方法进行了改进，获得了较为理想的实验结果。该方法可应用于实验教学中，有利于加深学生对碱性蛋白分布情况的理解。

关键词：碱性蛋白 PH值碱性固绿改进

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应用ITS序列对中药材红芪进行鉴定的有效性分析

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遵义医学院学报 2013年第4期36卷 323-326页

作者：魏妮娜王晓明牛宪立姬可平遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

目的应用ITS序列对中药材红芪进行鉴别,以验证DNA条形码技术从分子水平鉴定中草药的可行性。方法提取中药材红芪的总DNA,扩增其rDNA中ITS序列并测序,采用软件CodonCode Aligner对测序峰图进行校对拼接。以相似性搜索法,K-2P进行比对分... 详细信息

目的应用ITS序列对中药材红芪进行鉴别,以验证DNA条形码技术从分子水平鉴定中草药的可行性。方法提取中药材红芪的总DNA,扩增其rDNA中ITS序列并测序,采用软件CodonCode Aligner对测序峰图进行校对拼接。以相似性搜索法,K-2P进行比对分析及用MEGE5.1软件计算种间遗传距离,并构建NJ系统聚类树直观获得鉴定结果。结果中药材红芪与同属物种K-2P遗传距离在0.004,中药材红芪与黄芪的K-2P遗传距离为0.153;所构建的NJ系统发育树能将中药材红芪与其他相关物种进行有效区分。结论中药材红芪的ITS序列可作为其分子水平鉴定依据,验证了ITS条形码技术对中药材鉴定的有效性。

关键词：红芪 rDNA ITS序列鉴定

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多种教学方式在生物化学教学中的实践与收获

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中国医药指南 2012年第32期10卷 672-673页

作者：王燕钟世军邵敏遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

生物化学是一门重要的医学基础课程,与多种学科有密切关系,越来越成为生命学科的共同语言,在医学及生物类专业的学生培养中具有十分重要的地位。由于其内在知识结构系统性强、内容抽象、缺乏直观性,教学过程又受到其他基础学科的制约,... 详细信息

生物化学是一门重要的医学基础课程,与多种学科有密切关系,越来越成为生命学科的共同语言,在医学及生物类专业的学生培养中具有十分重要的地位。由于其内在知识结构系统性强、内容抽象、缺乏直观性,教学过程又受到其他基础学科的制约,严重影响了学生的学习兴趣和教学效果。同时,生物化学教学中普遍存在着教学时间有限性和知识增长无限性的矛盾。要解决好这一矛盾,保证知识、能力、素质的协调发展,关键是深化教学内容和教学方式的改革,充分利用有限的授课时间最大限度的提高教学效率和效果;我们在以往的生化课程教学中注重丰富多种教学方式的实践,激发了学生的学习兴趣、调动学生学习的积极主动性,获得了较为明显的教学效果。

关键词：生物化学教学改革

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琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立

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遵义医学院学报 2012年第4期35卷 276-278页

作者：王燕彭莉萍罗镇明遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染。方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染... 详细信息

目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染。方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染法及后染法的染色效果。结果实验结果显示上样缓冲液中含0.4%Goldview的预染样品法电泳检测核酸的效果最佳且能检测的核酸样品浓度在16.5ng或以上为最佳。结论核酸染料Goldview在核酸的琼脂糖凝胶电泳中使用的最佳方案为预染样品法,实验中推荐浓度达到普通实验要求,并且最易控制对周围环境的污染。

关键词：琼脂糖凝胶电泳核酸染料 Goldview

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动物性中药材地龙DNA条形码初步研究

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广东农业科学 2011年第17期38卷 114-116页

作者：吕国庆牛宪立姬可平遵义医学院珠海校区广东珠海519041 遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

利用通用引物对中药材地龙的COⅠ、16S rDNA片断进行PCR扩增、测序、分析,并构建系统进化树,将获得的中药材地龙COⅠ、16S rDNA片断序列提交到GenBank中的DNA Barcoding数据库进行分析。结果显示:(1)中药材地龙COⅠ片断的长度为682 bp,... 详细信息

利用通用引物对中药材地龙的COⅠ、16S rDNA片断进行PCR扩增、测序、分析,并构建系统进化树,将获得的中药材地龙COⅠ、16S rDNA片断序列提交到GenBank中的DNA Barcoding数据库进行分析。结果显示:(1)中药材地龙COⅠ片断的长度为682 bp,其中变异位点(SNP多态位点)有179个,多态位点约占片断总长的26%,碱基A+T的含量为58.8%、G+C的含量为41.2%。16S rDNA片断的长度为503 bp,其中变异位点有70个,多态位点约占片断总长的14%,碱基A+T的含量为62.4%、G+C的含量为37.6%;(2)获得COⅠ序列的登录号为HQ405769-HQ405776,16S rDNA序列的登录号为HQ405777-HQ405783;(3)中药材地龙DNA中COⅠ序列的基因多态性比16S rDNA序列更显著,适合做为中药材地龙的DNA条形码。

关键词：中药材地龙 DNA条形码线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ基因(COⅠ) 16SrRNA基因(16SrDNA)

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中药材地龙DNA提取方法的比较分析

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安徽农业科学 2011年第5期39卷 2629-2630页

作者：吕国庆姬可平牛宪立梅露露遵义医学院广东珠海519041 遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

以地龙为例,对中药材DNA的几种常用提取方法进行了比较分析,为中药的鉴定提供参考。

关键词：中药材地龙 DNA提取比较

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3种药用红树植物rDNA ITS序列初步研究

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广东农业科学 2011年第17期38卷 109-110,116页

作者：牛宪立吴群姬可平遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室广东珠海519041 武汉市第二中西医结合医院检验科湖北武汉201319

应用改良CTAB法分别提取生长于珠海和海南的3种药用红树植物秋茄、老鼠簕和桐花树的基因组DNA,以真核生物rDNA ITS区的通用引物分别对其rDNA ITS区进行nPCR扩增及测序,并对测序结果进行对位排列。结果表明,不同来源的药用红树植物的rDNA... 详细信息

应用改良CTAB法分别提取生长于珠海和海南的3种药用红树植物秋茄、老鼠簕和桐花树的基因组DNA,以真核生物rDNA ITS区的通用引物分别对其rDNA ITS区进行nPCR扩增及测序,并对测序结果进行对位排列。结果表明,不同来源的药用红树植物的rDNA ITS序列上存在扩增碱基差异,rDNA ITS测序结果可作为鉴定药用红树植物种质资源的分子标记之一。

关键词： rDNA 红树植物 nPCR 测序种质资源

来源：评论

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建立我国中药材DNA条形码数据库方法的探讨和前景展望

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新乡医学院学报 2010年第4期27卷 416-418页

作者：吕国庆姬可平牛宪立吴群梅露露遵义医学院珠海校区 2008级研究生广东珠海519041 遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

中药鉴定是中药学的核心。我国的中药材种类繁多,资源丰富,由于来源复杂,真伪难辨,传统的中药鉴定技术有各种不足。近些年出现的DNA条形码可以很好地应用于中药材的鉴定。建立一个中药材的DNA条形码数据库对我国中药材鉴定是非常有益的... 详细信息

中药鉴定是中药学的核心。我国的中药材种类繁多,资源丰富,由于来源复杂,真伪难辨,传统的中药鉴定技术有各种不足。近些年出现的DNA条形码可以很好地应用于中药材的鉴定。建立一个中药材的DNA条形码数据库对我国中药材鉴定是非常有益的,可以极大地提高中药材的鉴定水平,促进中药的现代化。DNA条形码在动物中采用线粒体基因已经确定,但是植物中还没有广泛认同的条形码标准片段。由于中药材绝大多数是植物,目前植物类中药材条形码的研究倾向于用一种或多种条形码联合应用。

关键词：中药鉴定 DNA条形码 DNA分子鉴定技术细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ 叶绿体基因

来源：评论

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