检索结果-内蒙古大学图书馆

中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第1期26卷 29-35页

作者：雷悦野庆松卫金岐李文娜莫镇涛张青峰高书颖遵义医学院珠海校区生物化学与分子生物学教研室广东珠海519041 中山大学附属第五医院消化内科广东珠海519000 遵义医学院珠海校区

目的:探讨ezrin增强子敲除对食管癌Eca-109细胞ezrin基因表达、细胞增殖和迁移的影响。方法:将靶向ezrin增强子上、下游的CRISPR/Cas9重组质粒共转染食管癌Eca-109细胞,经嘌呤霉素筛选,获得敲除ezrin增强子的细胞株Eca-C2。用qPCR和West... 详细信息

目的:探讨ezrin增强子敲除对食管癌Eca-109细胞ezrin基因表达、细胞增殖和迁移的影响。方法:将靶向ezrin增强子上、下游的CRISPR/Cas9重组质粒共转染食管癌Eca-109细胞,经嘌呤霉素筛选,获得敲除ezrin增强子的细胞株Eca-C2。用qPCR和Western blotting分别检测敲除ezrin增强子的Eca-C2细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达,用蛋白芯片技术检测MAPK通路相关蛋白的表达,用WST-1法和细胞划痕愈合实验分别检测ezrin增强子敲除对Eca-C2细胞增殖和迁移能力的影响。结果:成功构建稳定敲除ezrin增强子的食管癌细胞株Eca-C2;与对照细胞相比,ezrin增强子敲除细胞ezrin mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(均P<0.05)。Eca-C2细胞中17种被检测的MAPK通路相关蛋白中有9种(AKT、CREB、GSK3b、MKK6、m TOR、P38、P53、P70S6K和RSK1)表达下调,ezrin增强子敲除后细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制(均P<0.05)。结论:在人食管癌Eca-109细胞中,敲除ezrin增强子可明显抑制细胞的增殖和迁移。

关键词： ezrin增强子基因敲除食管癌 Eca-109细胞增殖迁移

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柚子皮精油提取及其驱蚊效果研究

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天然产物研究与开发 2017年第5期29卷 867-872页

作者：杨愈丰柳敦耀向红英吕延成王菊芳遵义医学院珠海校区生物化学与分子生物学教研室珠海519041 华南理工大学生物科学与工程学院广州510640 珠海市中药基础与应用研究重点实验室珠海519041

本文通过响应面法研究了柚子皮精油的提取工艺,并初步考察了所提取精油的驱蚊效果。柚子皮精油提取采用微波辅助蒸馏法,在采用单因素实验考察蒸馏时间、料液比和NaCl质量分数对精油提取率的影响之后,通过响应面法进行提取工艺优化,以获... 详细信息

本文通过响应面法研究了柚子皮精油的提取工艺,并初步考察了所提取精油的驱蚊效果。柚子皮精油提取采用微波辅助蒸馏法,在采用单因素实验考察蒸馏时间、料液比和NaCl质量分数对精油提取率的影响之后,通过响应面法进行提取工艺优化,以获得最佳提取方案;然后采用趋避法验证柚子皮精油的驱蚊活性。结果表明,最佳柚子皮精油提取方案如下:蒸馏时间100 min,料液比0.3∶2(g/m L),NaCl的质量分数1%,采用该方案柚子皮精油提取率达1.65%。通过初步驱蚊实验发现柚子皮精油具有较好的驱蚊活性,和市售六神花露水效果相当,驱蚊效应具有进一步深入研究的价值。

关键词：柚子皮精油蒸馏法响应面法驱蚊活性

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桃仁、红花对UUO大鼠肾组织ILK、E-cad、FN和α-SMA表达的影响

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遵义医学院学报 2017年第2期40卷 134-138页

作者：李小波彭榜亚杨江权陈阳遵义医学院珠海校区诊断学教研室广东珠海519000 遵义医学院生物化学和分子生物学教研室贵州遵义563099 遵义医学院珠海校区药学教研室广东珠海519000

目的探讨桃仁、红花及其药对对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织ILK、FN、α-SMA及E-cadherin表达的影响。方法健康SD大鼠随机分为5组,每组6只,除正常组外,其余大鼠行单侧输尿管梗阻手术。正常组、模型组给予2 m L蒸馏水灌喂,桃仁组、红... 详细信息

目的探讨桃仁、红花及其药对对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织ILK、FN、α-SMA及E-cadherin表达的影响。方法健康SD大鼠随机分为5组,每组6只,除正常组外,其余大鼠行单侧输尿管梗阻手术。正常组、模型组给予2 m L蒸馏水灌喂,桃仁组、红花组、桃仁+红花组分别给予6 g/(kg·d)的灌喂量。连续灌喂14 d后处死大鼠,取出手术侧肾脏,HE染色观察肾脏病理变化,q PCR和western blot检测肾组织中整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、α-平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)基因和蛋白表达。结果肾脏组织形态学观察显示,与正常组相比,模型组大鼠梗阻侧肾脏,肾间质表现出明显肿胀,纤维化程度重;模型组的E-cad表达降低,ILK、FN及α-SMA的表达升高(P<0.05);与模型组相比,各治疗组的肾脏病理改变减轻,E-cad表达升高(P<0.05),ILK、FN及α-SMA的表达降低(P<0.05);且以桃仁+红花组的效果更佳。结论桃仁、红花及其药对可通过升高E-cadherin和降低ILK、FN及α-SMA的表达来减缓肾间质纤维化,以桃仁-红花药对的效果更好。

关键词：桃仁红花单侧输尿管梗阻整合素连接激酶

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蜂毒明肽对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病模型的体内外作用研究

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遵义医学院学报 2017年第4期40卷 364-368,373页

作者：林茂田炳欣王敏吕延成胡云王春梅遵义医学院珠海校区生理学教研室广东珠海519041 珠海市重点实验室暨中药基础及应用研究实验室广东珠海519041 遵义医学院珠海校区药学教研室广东珠海519041 遵义医学院珠海校区生物化学与分子生物学教研室广东珠海519041 遵义医学院珠海校区化学教研室广东珠海519041

目的初步探讨蜂毒明肽对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病(AD)模型的体内外干预作用。方法侧脑室注射Aβ_(25-35)构建AD小鼠模型。连续5 d腹腔注射0.2 mg/kg蜂毒明肽。小鼠跳台测试认知功能,免疫组化检测海马CA1区Aβ_(1-42)表达。10μmol... 详细信息

目的初步探讨蜂毒明肽对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病(AD)模型的体内外干预作用。方法侧脑室注射Aβ_(25-35)构建AD小鼠模型。连续5 d腹腔注射0.2 mg/kg蜂毒明肽。小鼠跳台测试认知功能,免疫组化检测海马CA1区Aβ_(1-42)表达。10μmol/L Aβ_(25-35)诱导海马神经元构建细胞损伤模型。100 nmol/L蜂毒明肽干预24 h后,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342染色检测细胞凋亡率,全细胞膜片钳技术检测海马神经元小电导钙激活性钾通道介导的中间后超极化电流(I_(mAHP))。结果动物实验显示,与模型组比较,蜂毒明肽组小鼠学习成绩错误次数减少,潜伏期延长、记忆成绩错误次数减少,Aβ_(1-42)表达减低(P<0.05)。细胞实验显示,蜂毒明肽组较模型组海马神经元存活率增加,凋亡率下降,I_(mAHP)减小(P<0.05)。结论蜂毒明肽对Aβ_(25-35)诱导的AD模型具有保护作用,其机制可能与减少Aβ表达,降低I_(mAHP)有关。

关键词：蜂毒明肽 β淀粉样蛋白阿尔茨海默病海马神经元小鼠

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结肠癌转移相关潜在微小RNA(miRNA)的分离与鉴定（英文）

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遵义医学院学报 2015年第5期38卷 479-487页

作者：王燕张金莉彭莉萍张晟春遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041 遵义医学院第五附属医院检验科广东珠海519041

目的构建在两种结肠癌细胞株SW480和SW620中微小RNA的差异表达文库,分离与结肠癌转移具有潜在相关性的微小RNA。方法以具有不同转移潜能的结肠癌细胞株SW480和SW620为材料,应用改良抑制性消减杂交联合反向斑点杂交技术,分离在两种细胞... 详细信息

目的构建在两种结肠癌细胞株SW480和SW620中微小RNA的差异表达文库,分离与结肠癌转移具有潜在相关性的微小RNA。方法以具有不同转移潜能的结肠癌细胞株SW480和SW620为材料,应用改良抑制性消减杂交联合反向斑点杂交技术,分离在两种细胞中差异表达的微小RNA,利用生物软件BLAST及MIREAP将分离到的微小RNA序列进行分析比对。结果鉴定出在SW480和SW620之间表达有明显差异的24种微小RNA,其中4种为新发现的微小RNA,并提交至Gen Bank数据库。这些微小RNA中经文献查询已知部分参与了结肠癌的发生发展过程,部分在基因转录、细胞周期循环、信号传导和细胞凋亡过程具有一定的功能。结论经过改良的抑制消减杂交技术可以高效地分离不同标本间差异表达的微小RNA;本研究得出的结果可为结肠癌细胞转移的分子生物学机制研究提供新的方向。

关键词：微小RNA 结直肠癌转移抑制性消减杂交反向斑点杂交技术

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菟丝子含药血清对大鼠肢芽细胞、骨形成蛋白2及Ⅱ型胶原表达的影响

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山东大学学报（医学版） 2014年第7期52卷 37-40页

作者：刘星李啸红王燕邹聪聪遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041 遵义医学院珠海校区人体解剖与组织胚胎学教研室广东珠海519041

目的探讨菟丝子含药血清对SD大鼠胚胎肢芽细胞增殖与分化、细胞中骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备高、中、低剂量(40、20、10 g/kg)菟丝子含药血清和正常血清。取E15后肢芽... 详细信息

目的探讨菟丝子含药血清对SD大鼠胚胎肢芽细胞增殖与分化、细胞中骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备高、中、低剂量(40、20、10 g/kg)菟丝子含药血清和正常血清。取E15后肢芽制成细胞悬液,接种到细胞培养板中,分别加入高、中、低剂量菟丝子含药血清和正常血清,作为高、中、低剂量组和阴性对照组。体外培养72 h,MTT法检测肢芽细胞的增殖,阿利新蓝染色检测肢芽细胞的分化,RT-PCR法检测肢芽细胞中BMP-2、Ⅱ型胶原mRNA的表达,Western blotting检测Ⅱ型胶原蛋白的表达。结果低、中剂量组细胞增殖较快,吸光度值高于阴性对照组(P<0.05);中剂量组软骨细胞集落数多于阴性对照组(P<0.05),高剂量组软骨细胞集落数低于阴性对照组(P<0.05);低、中剂量组BMP-2 mRNA表达水平高于阴性对照组(P<0.05),高剂量组BMP-2 mRNA低于阴性对照组(P<0.05);各剂量组Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达水平均高于阴性对照组(P<0.05)。结论不同剂量菟丝子含药血清均可促进肢芽细胞的增殖和Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达;高剂量菟丝子含药血清可下调BMP-2 mRNA的表达水平,抑制肢芽细胞的分化。

关键词：菟丝子含药血清肢芽细胞骨形成蛋白2 Ⅱ型胶原

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结肠癌SW480细胞冻存与复苏方法的改进

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肿瘤药学 2014年第2期4卷 117-120页

作者：彭莉萍王燕姬可平张金莉遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室广东珠海519041

目的探索一种程序简洁、易于操作的细胞株冻存与复苏的方法。方法采用常规方法体外培养肠癌细胞株SW480,胰酶消化后,收集细胞悬液,A组细胞采用传统冻存与复苏方法,B组采用改良的冻存与复苏方法,分别于2周、3个月、6个月后立即复苏冻存... 详细信息

目的探索一种程序简洁、易于操作的细胞株冻存与复苏的方法。方法采用常规方法体外培养肠癌细胞株SW480,胰酶消化后,收集细胞悬液,A组细胞采用传统冻存与复苏方法,B组采用改良的冻存与复苏方法,分别于2周、3个月、6个月后立即复苏冻存细胞进行培养,观察细胞的存活情况,并于1周内不同时间点用MTT法检测细胞增殖情况并进行比较。结果采用改良方法冻存与复苏的SW480细胞存活率及生长曲线与传统方法比较无显著差异,细胞贴壁率、形态学特点及增殖能力无明显变化。结论改良的细胞冻存体系以及快速复苏法是细胞株冻存与复苏的一种可行方法,且更加方便快捷。

关键词： SW480 冻存复苏 SW480

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几种肿瘤细胞中ezrin基因增强子区转录调控特性的研究

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中国细胞生物学学报 2014年第5期36卷 610-616页

作者：张青峰卫金岐张芳婷邵敏申慧芳高书颖遵义医学院珠海校区生物化学与分子生物学教研室珠海519041 中山大学附属第五医院消化内科珠海519000 北京大学深圳医院中心实验室深圳518036

该文采用Western blot技术检测人食管癌EC109细胞、鼻咽癌CNE2细胞和宫颈癌HeLa细胞中Ezrin蛋白的表达;采用DNA片段定向克隆技术构建一系列携带ezrin基因增强子区–1541/–706序列的报告基因表达载体,将载体瞬时转染EC109、CNE2和HeLa细... 详细信息

该文采用Western blot技术检测人食管癌EC109细胞、鼻咽癌CNE2细胞和宫颈癌HeLa细胞中Ezrin蛋白的表达;采用DNA片段定向克隆技术构建一系列携带ezrin基因增强子区–1541/–706序列的报告基因表达载体,将载体瞬时转染EC109、CNE2和HeLa细胞,检测荧光素酶活性;研究肿瘤细胞中ezrin基因增强子区的转录调控特性。实验结果显示,在被检测的三种肿瘤细胞中,Ezrin蛋白的表达水平没有明显不同。EC109细胞中,当ezrin基因–1541/–706片段正向位于无启动子的报告基因上游时,表现出类似启动子的转录激活作用;当这一片段反向连接时转录激活作用几乎消失。当–1541/–706片段正向位于ezrin启动子或SV40启动子上游时,显著增强荧光素酶表达;然而,当这一片段反向位于启动子上游以及正向或反向位于启动子控制的报告基因下游时,转录增强作用消失。ezrin基因–1541/–706片段在CNE2和HeLa细胞中的转录调控作用,与其在EC109细胞中的转录调控作用部分相似,但不完全相同。结果表明,ezrin基因增强子区具有转录激活和转录增强双重作用,这种作用具有DNA序列位置和方向依赖性以及细胞特异性。

关键词： ezrin基因增强子转录调控肿瘤细胞

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短发夹RNA表达载体对2型单纯疱疹病毒UL54基因的干扰效应

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中国临床研究 2014年第8期27卷 901-903,906,F0002页

作者：吕延成潘晓瑜樊俊黄畅遵义医学院珠海校区生物化学与分子生物学教研室广东省珠海市519041

目的研究短发夹核糖核酸(shRNA)表达载体对2型单纯疱疹病毒(HSV-2)UL54基因的干扰效应。方法针对HSV-2 UL54基因,构建5个靶向HSV-2 UL54基因的短发夹RNA重组表达载体(shRNA1081、shRNA1092、shRNA1276、shRNA1407、shRNA1508),同时设计不针对任何基因的序列为阴性对照组(阴性对照组)及不加任何重组表达载体的空白对照(空白对照组)。重组表达载体通过脂质体转染人胚胎肾细胞(HEK293)后接种HSV-2,48 h后利用荧光定量RT-PCR检测各组细胞UL54 mRNA的表达水平,终点滴定法测定HSV-2子代病毒滴度。结果荧光定量RT-PCR结果示,与空白对照组相比,shRNA1081、shRNA1407和shRNA1508能够降低HSV-2 UL54 mRNA的表达水平(P均<0.01);对UL54基因的抑制率在阴性对照组(加shRNA NC)、shRNA1081组、shRNA1407组、shRNA1508组分别为7%、69%、56%及55%,以shRNA1081组为最高。终点滴定法结果示,与空白对照组比较,shRNA 1081组、shRNA 1407组、shRNA 1508组病毒滴度不同程度下降(P均<0.01)。结论成功构建UL54 shRNA重组表达载体,shRNA1081、shRNA1407、shRNA1508能在体外细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL54基因表达,从而抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制。

关键词：短发夹核糖核酸核糖核酸干扰 2型单纯疱疹病毒 UL54基因

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携带hTERT基因的重组慢病毒载体的构建及鉴定

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遵义医学院学报 2014年第2期37卷 165-169页

作者：张青峰张芳婷申慧芳高书颖遵义医学院珠海校区生物化学与分子生物学教研室广东珠海519041 北京大学深圳医院中心实验室广东深圳518036

目的构建携带人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在HeLa细胞中的表达。方法采用Gateway技术使克隆载体pENTR221-hTERT与慢病毒表达载体pLenti6.3/V5-DEST进行重组反应,构建重组慢病毒载体pLenti6.3/V5-hTERT;将重组... 详细信息

目的构建携带人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在HeLa细胞中的表达。方法采用Gateway技术使克隆载体pENTR221-hTERT与慢病毒表达载体pLenti6.3/V5-DEST进行重组反应,构建重组慢病毒载体pLenti6.3/V5-hTERT;将重组慢病毒载体与病毒包装质粒混合物pLP1、pLP2和pLP/VSVG共转染人胚肾293FT细胞,制备重组慢病毒颗粒;将重组慢病毒感染HeLa细胞,利用杀稻瘟菌素筛选阳性细胞克隆,PCR法检测外源hTERT基因在阳性细胞中的染色体整合状况,RT-PCR检测重组慢病毒感染对细胞hTERT基因mRNA表达的影响。结果经鉴定,重组慢病毒载体pLenti6.3/V5-hTERT携带hTERT基因,hTERT基因包装至病毒颗粒。重组慢病毒感染HeLa细胞后,得到具有杀稻瘟菌素抗性的细胞克隆,其染色体DNA整合有外源hTERT基因,细胞内hTERT基因mRNA的表达水平高于未感染慢病毒的对照细胞。结论成功构建了携带hTERT基因的重组慢病毒载体,能够提高HeLa细胞hTERT基因mRNA的表达量。

关键词：人端粒酶逆转录酶基因重组慢病毒共转染

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