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中国病原生物学杂志 2025年第4期20卷 544-548,F0004页

作者：熊海婷周必英遵义医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州遵义563000

巨噬细胞是重要的固有免疫细胞和抗原提呈细胞,在机体感染与免疫中发挥着重要的作用。巨噬细胞具有可塑性和异质性,微环境的改变可使巨噬细胞发生极化,主要分为经典活化型(M1型)和替代活化型(M2型)巨噬细胞,M1型巨噬细胞可促进机体炎症... 详细信息

巨噬细胞是重要的固有免疫细胞和抗原提呈细胞,在机体感染与免疫中发挥着重要的作用。巨噬细胞具有可塑性和异质性,微环境的改变可使巨噬细胞发生极化,主要分为经典活化型(M1型)和替代活化型(M2型)巨噬细胞,M1型巨噬细胞可促进机体炎症反应,在炎症早期发挥抗感染作用;M2型巨噬细胞可抑制炎症反应,在炎症后期与组织修复相关。本文就寄生虫感染中调控宿主巨噬细胞极化相关信号通路的研究进展进行综述。

关键词：寄生虫巨噬细胞极化信号通路综述

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埃及伊蚊黄蛋白c基因的克隆、表达及其体外抗凝血作用

引用

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第2期40卷 153-158,167页

作者：张霞颜凤牟小会林紫敏聂映程金芝商正玲吴家红贵州医科大学寄生虫学教研室贵安550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵安550025 遵义医科大学第三附属医院(遵义市第一人民医院)检验科遵义563099 贵州医科大学免疫学教研室贵安550025

目的克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c(Aael-yellow-c)基因,并探讨rAael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因,纯化后的片段与pEASY-E1载体连接,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序... 详细信息

目的克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c(Aael-yellow-c)基因,并探讨rAael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因,纯化后的片段与pEASY-E1载体连接,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序鉴定。0.1 mol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导蛋白表达后,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。比浊法观察不同浓度rAael-yellow-c蛋白对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集活性影响。手工法检测不同浓度rAael-yellow-c蛋白对人血浆凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶时间(TT)的影响。采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析,组间差异比较采用t检验。结果Aael-yellow-c基因CDS区为1287 bp,含27个氨基酸组成的信号肽,成熟肽序列长1200 bp,编码399个氨基酸。RT-PCR扩增获得Aael-yellow-c基因片段,大小约为1200 bp。菌液PCR、双酶切和测序鉴定显示,pEASYE1-Aael-yellow-c质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白以包涵体形式表达;镍柱亲和层析纯化重组蛋白后获得单一条带。Western blotting结果显示,该蛋白可被His-tag抗体和抗rAael-yellow-c蛋白的兔血清多克隆抗体识别。血小板聚集抑制实验结果显示,2083.30、416.66、83.33、16.67和3.33 nmol/L rAael-yellow-c蛋白可抑制由ADP诱导的血小板聚集,差异具有统计学意义(t=7.09、10.39、5.39、10.54和8.93,P<0.01),其中3.33 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集抑制作用最强,抑制率为(59.27±11.90)%;0.67、0.13和0.02 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集作用无影响(t=2.10、1.33和0.00,P>0.05)。内外源凝血实验结果显示,与阴性对照组相比,0.12、1.20和12.00μmol/L rAael-yellow-c分别作用于人血浆时,PT分别为13.63~14.10、13.32~14.38和13.55~16.01 s,差异无统计学意义(t=1.33、0.63和1.00,P>0.05);APTT分别为32.76~38.46、31.94~41.78和33.34~39.29 s,差异无统计学意义(t=0.47、0.06和0.24,P>0.05);TT分别为19.12~21.20、19.7~23.12和21.85~25.30 s,差异无统计学意义(t=0.47、0.24和1.60,P>0.05)。结论获得的r Aael-yellow-c蛋白主要通过抑制ADP诱导的血小板聚集作用帮助蚊虫吸血。

关键词：埃及伊蚊 yellow-c基因血小板聚集抗凝血

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