检索结果-内蒙古大学图书馆

小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药

解剖学报 2006年第1期37卷 57-61页

作者：高福莲刘书漫吴景兰张钦宪郑州大学基础医学院组织学胚胎学教研室河南省分子医学重点学科开放实验室郑州450052

目的研究小分子干扰RNA(siRNA)逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901/VCR mdr1介导的多药耐药效应。方法根据mdr1cDNA已知序列,设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA(mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达,免疫组织化学检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果siRNA转染SGC7901/VCR细胞48 h后,mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降,细胞内阿霉素积累量增加,对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79.59%及59.98%。结论siRNA可逆转SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药。

关键词：小分子干扰RNA mdr1基因 SGC7901/VCR细胞多药耐药逆转录聚合酶链反应噻唑蓝法人

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RegⅠ在胃泌素促胃癌细胞体外增殖通路中的作用

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解剖学报 2012年第1期43卷 63-67页

作者：程珊丁一张钦宪郑州大学基础医学院组织学胚胎学教研室河南省分子医学重点学科开放实验室郑州450052 新乡医学院基础医学院组织学胚胎学教研室河南新乡453003

目的探讨再生蛋白I(RegⅠ)在胃泌素刺激胃癌细胞增殖通路中的作用。方法根据RegⅠcDNA已知序列,在线设计3个小干扰RNA,并经基因库同源性比较,构建其RegⅠ-shRNA表达载体(pSUPER-EGFP-REG/1、pSUPER-EGFP-REG/2和pSUPER-EGFP-REG/3),利... 详细信息

目的探讨再生蛋白I(RegⅠ)在胃泌素刺激胃癌细胞增殖通路中的作用。方法根据RegⅠcDNA已知序列,在线设计3个小干扰RNA,并经基因库同源性比较,构建其RegⅠ-shRNA表达载体(pSUPER-EGFP-REG/1、pSUPER-EGFP-REG/2和pSUPER-EGFP-REG/3),利用脂质体2000转染试剂分别转染胃癌细胞BGC823细胞株、SGC7901细胞株,同时设转染空质粒的实验对照组和无质粒转染的空白细胞组。后经G418筛选建立稳定转染细胞株。RT-PCR检测RegⅠ基因mRNA的转录水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胃泌素孵育对胃癌细胞增殖的效应。结果酶切及测序鉴定,插入片段正确,3个RegⅠ-shRNA表达载体构建成功;RT-PCR显示,pSUPER-EGFP-REG/1可有效抑制RegⅠmRNA在胃癌细胞BGC823、SGC7901的转录。Western boltting结果显示,BGC823和SGC7901细胞的RegⅠ蛋白表达率分别下调到空载体对照组的(45±4)%和(53±4)%;MTT结果显示,RegⅠ基因表达抑制胃癌细胞系的增殖效率均降低(P<0.05)。胃泌素孵育后,胃癌细胞BGC823、SGC7901的增殖效率均增加(P<0.05),而RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系增殖效率则无明显改变(P>0.05)。结论实验成功建立了RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系;RegⅠ基因可能对胃泌素促胃癌细胞的增殖有促进的作用。

关键词： Reg Ⅰ基因胃泌素胃癌细胞 RNA干扰反转录聚合酶链式反应免疫印迹法

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不同胃癌细胞系中B7-H1分子的表达水平及定位

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解剖学报 2008年第1期39卷 70-73页

作者：刘书漫孟青王盛典刘占举张钦宪郑州大学基础医学院组织学胚胎学教研室郑州450052 河南省分子医学重点学科开放实验室郑州450052 郑州大学第二附属医院消化内科免疫病理学实验室郑州450014 郑州大学基础医学院组织学胚胎学教研室郑州450052 河南省分子医学重点学科开放实验室郑州450052 中国科学院生物物理研究所大分子国家重点实验室感染与免疫中心北京100101 郑州大学第二附属医院消化内科免疫病理学实验室郑州450014 郑州大学基础医学院组织学胚胎学教研室郑州450052

目的通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SCC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系.方法上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免... 详细信息

目的通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SCC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系.方法上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免疫化学染色以及细胞免疫荧光染色技术与流式细胞术检测4种细胞系中B7-H1 mRNA与B7-H1蛋白的表达情况,并比较其在4种细胞系中的表达强度.结果 B7-H1 mRNA在4种细胞系中均有表达,表达强度按照GES-1、BGC-823、SGC-7901、SGC-7901/VCR的顺序递增;细胞免疫化学染色与免疫荧光染色表明,B7-H1蛋白主要表达在上述细胞的细胞膜和少量细胞浆中.结合流式细胞术检测进一步证实,B7-H1蛋白在4种细胞系中的表达结果与mRNA的表达一致.结论 B7-H1表达在胃上皮细胞上,可能通过抑制机体免疫反应,促进胃癌细胞生长及MDR基因表达.

关键词： B7-H1 多药耐药逆转录-聚合酶链反应胃癌细胞系

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食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化检测

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中华肿瘤杂志 2005年第9期27卷 541-543页

作者：张功员马春晓刘秋亮乐晓平丁一张钦宪河南省分子医学重点学科开放实验室郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052 平顶山市第一人民医院郑州大学第一附属医院

目的检测食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化状态,探讨与食管癌发生、发展的关系.方法 32例食管癌患者术前均未接受放疗、化疗等其他治疗,手术切除后30 min内,在癌组织及正常食管黏膜组织各取约1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小的... 详细信息

目的检测食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化状态,探讨与食管癌发生、发展的关系.方法 32例食管癌患者术前均未接受放疗、化疗等其他治疗,手术切除后30 min内,在癌组织及正常食管黏膜组织各取约1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小的组织块标本,立即储存于-80℃冰箱中,冻存备提DNA.采用甲基化特异PCR法(MSP法)检测食管癌及正常食管黏膜组织中错配修复基因hMSH2启动子区甲基化的表达.结果 32例食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率为34.4% (11/32),正常食管黏膜组织未发现甲基化,两组甲基化阳性率相比较,差异有统计学意义(P﹤0.01).高龄患者(≥70岁)癌组织中启动子区hMSH2甲基化发生率(85.7%)明显高于较低龄患者(﹤70岁,20.0%;P<0.05).病理组织学Ⅲ～Ⅳ级食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率(70.0%)明显高于Ⅰ～Ⅱ级(18.2%,P<0.05).结论食管癌组织中,hMSH2基因启动子区甲基化与年龄和病理组织学分级可能有关.

关键词：食管肿瘤 hMSH2基因启动子甲基化基因启动子区甲基化食管癌组织 hMSH2 检测病理组织学黏膜组织

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ZAC基因在奥曲肽抑制胃癌细胞体外增殖通路的作用

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解剖学报 2013年第4期44卷 492-497页

作者：代稳丁一张钦宪郑州大学基础医学院组织学胚胎学教研室河南省分子医学重点学科开放实验室郑州450052 解放军第一五三中心医院检验科郑州450042

目的探讨ZAC基因在生长抑素类似物奥曲肽(OCT)抑制胃癌细胞增殖通路的作用。方法分别以不同浓度OCT处理胃癌细胞BGC823和SGC7901不同时间,MTT法筛选其增殖抑制的有效条件。OCT处理胃癌细胞(有效浓度/不同时间,有效时间/不同浓度),Wester... 详细信息

目的探讨ZAC基因在生长抑素类似物奥曲肽(OCT)抑制胃癌细胞增殖通路的作用。方法分别以不同浓度OCT处理胃癌细胞BGC823和SGC7901不同时间,MTT法筛选其增殖抑制的有效条件。OCT处理胃癌细胞(有效浓度/不同时间,有效时间/不同浓度),Western blotting检测OCT对胃癌细胞ZAC基因的效应。设计3条ZAC基因RNA干扰片段,分别插入pSUPER-EGFP-I载体,构建3个ZAC-shRNA表达载体(pSUPER-EGFP-ZAC/1、pSUPER-EGFP-ZAC/2和pSUPER-EGFP-ZAC/3)。经酶切和序列分析鉴定后,分别转染胃癌细胞BGC823和SGC7901。经G418筛选,RT-PCR鉴定,建立ZAC基因敲低(knock-down)的胃癌细胞系。以有效条件OCT孵育胃癌细胞(对照组)和ZAC基因敲低胃癌细胞(实验组),MTT法检测OCT对胃癌细胞的生长抑制效应。结果OCT抑制胃癌细胞增殖的有效条件为10nmol/L孵育24h;OCT以时间和浓度依赖的方式诱导胃癌细胞ZAC基因表达。酶切及序列分析鉴定表明ZAC-shRNA表达载体构建成功。转染shRNA-ZAC/2的胃癌细胞,其ZAC mRNA水平明显降低(P<0.05),为ZAC基因敲低胃癌细胞。ZAC基因敲低胃癌细胞的增殖明显高于对应的BGC823细胞和SGC7901细胞(P<0.05)。OCT孵育后,BGC823细胞和SGC7901细胞的增殖明显降低(P<0.05)。然而,ZAC基因敲低胃癌细胞的增殖无明显改变(P>0.05)。结论 OCT以时间和浓度依赖的方式诱导胃癌细胞ZAC基因表达;ZAC基因在OCT抑制胃癌细胞增殖通路中具有重要作用。

关键词：奥曲肽 ZAC 胃癌细胞增殖 RNA干扰免疫印迹法

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核干细胞因子特异性短发夹状RNA对HL-60细胞分化抗原和生物学性质的影响

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第三军医大学学报 2006年第11期28卷 1191-1194页

作者：岳保红朱晓燕张功员孙玲赵小强王清霞刘帅张秋堂张钦宪郑州大学第一附属医院检验科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052 郑州大学第一附属医院血液科郑州450052

目的研究核干细胞因子(nuc leostem in,NS)特异性短发夹状RNA(shRNA)阻断NS基因表达对HL-60白血病细胞分化抗原及生物学性质的影响,探讨NS的生物学功能和与急性白血病的关系以及用于基因治疗的可能性。方法特异性转染试剂和合成的NS短... 详细信息

目的研究核干细胞因子(nuc leostem in,NS)特异性短发夹状RNA(shRNA)阻断NS基因表达对HL-60白血病细胞分化抗原及生物学性质的影响,探讨NS的生物学功能和与急性白血病的关系以及用于基因治疗的可能性。方法特异性转染试剂和合成的NS短发夹状RNA(NS-shRNA)体外直接转染HL-60细胞,采用RT-PCR判断基因阻断效果,MTT法测定转染后细胞增殖能力,流式细胞仪(FCM)测定细胞分化抗原,形态学观察细胞形状和生长状态,血细胞分析仪测定细胞大小、粒度。结果合成的2条NS-shRNA均能明显阻断NS基因表达,抑制率分别为37.82%和71.88%;NS-shRNA能显著抑制HL-60细胞的增殖并存在时间和浓度依赖性,以48 h和10 nmol/L浓度最佳。转染后:分化抗原CD11b、CD33、CD14、CD64、HLA-DR增高,CD38降低,显示有向粒系继续成熟和向单核系重新分化趋势;细胞聚团性减弱,碎片增多,一部分细胞形态变成梭形和长尾形,染色后细胞核紧密,凹陷,髓过氧化物酶(MPO)和α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)活性增强;大小和粒度分析小体积细胞和核碎裂细胞增多。结论NS-shRNA通过阻断NS基因表达,对HL-60细胞有抑制增殖和促分化作用,改变了细胞的生物学性质,使细胞恶性程度有所减弱,并有可能诱发凋亡,在白血病的基因中具有潜在的临床价值。

关键词：核干细胞因子短发夹状RNA 分化抗原生物学性质增殖分化 HL-60细胞

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大颗粒淋巴细胞白血病细胞免疫学表型分析

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郑州大学学报（医学版） 2006年第5期41卷 929-930页

作者：岳保红高福莲孙玲王清霞张秋堂刘帅张钦宪郑州大学第一附属医院检验科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室郑州450052 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州大学分子细胞生物学研究中心

目的:分析大颗粒淋巴细胞白血病(LGLL)细胞的免疫学表型。方法:取3例LGLL患者的外周血和骨髓液涂片,采用流式细胞术对其免疫学表型进行分析,同时用瑞-姬混合染色和髓过氧化物酶(MPO)、过碘酸-雪夫反应(PAS)等细胞化学染色对其进行观察... 详细信息

目的:分析大颗粒淋巴细胞白血病(LGLL)细胞的免疫学表型。方法:取3例LGLL患者的外周血和骨髓液涂片,采用流式细胞术对其免疫学表型进行分析,同时用瑞-姬混合染色和髓过氧化物酶(MPO)、过碘酸-雪夫反应(PAS)等细胞化学染色对其进行观察。结果:3例白血病细胞形态均呈原始、幼稚淋巴细胞样,胞浆内有数量较多的或大或小的紫红色颗粒,MPO染色和PAS反应均为阴性。3例LGLL均表达CD56,其中1例还表达CD3,为T细胞型LGLL;另2例不表达CD3,为NK细胞型LGLL。T细胞型LGLL型患者白血病细胞同时表达B细胞抗原CD20。结论:通过免疫学表型分析可以区分T细胞和NK细胞型LGLL,LGLL细胞存在抗原表达紊乱的现象。

关键词：白血病大颗粒淋巴细胞 T细胞 NK细胞免疫学表型

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核干细胞因子基因沉默对HL-60细胞分化特征的影响

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郑州大学学报（医学版） 2007年第4期42卷 657-659页

作者：岳保红朱晓燕王清霞刘帅张功员张秋堂张慧张钦宪郑州大学第一附属医院检验科郑州大学医学检验系河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室郑州450052 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450001 郑州大学第一附属医院血液科郑州450052

目的:探讨核干细胞因子(NS)特异性短发夹RNA(shRNA)沉默NS基因对白血病细胞HL-60分化的影响。方法:用体外合成的NS-shRNA转染HL-60细胞,Western blot检测转染细胞NS蛋白,Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪(FCM)测定细胞... 详细信息

目的:探讨核干细胞因子(NS)特异性短发夹RNA(shRNA)沉默NS基因对白血病细胞HL-60分化的影响。方法:用体外合成的NS-shRNA转染HL-60细胞,Western blot检测转染细胞NS蛋白,Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪(FCM)测定细胞表面分化抗原变化,细胞髓过氧化物酶(MPO)和过碘酸-雪夫反应(PAS)测定细胞化学特征的变化。以转染无关shRNA序列的细胞作阴性对照,以未转染细胞作空白对照。结果:NS-shRNA转染的HL-60细胞NS蛋白较对照组降低;转染细胞细胞核和细胞质都出现了成熟和分化特征,分化抗原CD11b、CD33、CD14、CD64、HLA-DR增高,CD38降低,显示有向粒系继续成熟和向单核系重新分化的趋势;转染细胞内MPO活性增强,PAS反应增强。结论:阻断NS基因表达能促使HL-60细胞重分化。

关键词：核干细胞因子短发夹RNA 细胞分化 HL-60细胞

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