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解剖学报 2008年第5期39卷 699-702页

作者：陈辉金辉杜春艳顾鹏宇王纯耀张钦宪高翔郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州大学实验动物中心郑州450052 南京大学模式动物研究所南京210061

目的构建胃壁细胞定位表达SV40T的真核表达载体并制备转基因小鼠动物模型,为研究胃癌发病机制提供动物模型。方法从构建的胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV中酶切回收3.8kb的基因片段H+-K+ATPaseβpromoter/SV40T,通过显微注射... 详细信息

目的构建胃壁细胞定位表达SV40T的真核表达载体并制备转基因小鼠动物模型,为研究胃癌发病机制提供动物模型。方法从构建的胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV中酶切回收3.8kb的基因片段H+-K+ATPaseβpromoter/SV40T,通过显微注射的方法制备转基因小鼠,PCR和Southern blotting检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,RT-PCR检测基因的表达情况。结果将422枚注射过的受精卵移植给16只假孕雌鼠,共生出77只仔鼠,移植成功率为18.2%。在出生的77只仔鼠中,2#、4#、8#、16#、24#、51#、57#、61#、68#、73#经PCR检测为阳性首建鼠。除68#不育外,其他9个品系首建鼠共生出99只F1代鼠。8#品系23只F1代尚未发现阳性鼠,另8个品系F1代经PCR和Southern blotting检测发现31只阳性鼠,阳性率为40.8%(31/76)。RT-PCR检测F1代阳性鼠均仅在胃组织中有SV40T基因的表达,而在心、肝、肾、肺、食道、肠、骨骼肌等组织中均不表达。不育首建鼠处死解剖发现胃组织有肿瘤存在。结论建立了胃壁细胞定位表达SV40T基因的转基因小鼠动物模型。

关键词： SV40T抗原 Southern blotting 定位表达转基因小鼠

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SV40T抗原真核表达载体的构建及表达

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郑州大学学报（医学版） 2008年第2期43卷 231-234页

作者：陈辉马慧洁张艳乐晓萍张钦宪郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450001

目的:构建SV40T抗原的特异性真核表达载体,并导入胃癌细胞株SGC7901进行表达鉴定。方法:扩增小鼠H+/K+ATPase β亚基启动子,与pMT18-T载体相连,并将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)/HK;从含有SV40T基因的pLITAg质粒... 详细信息

目的:构建SV40T抗原的特异性真核表达载体,并导入胃癌细胞株SGC7901进行表达鉴定。方法:扩增小鼠H+/K+ATPase β亚基启动子,与pMT18-T载体相连,并将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)/HK;从含有SV40T基因的pLITAg质粒酶切回收SV40T基因,与pcDNA3.1(-)/HK相连,构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV,同时构建非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV,进行酶切及测序鉴定。用脂质体转染的方法将构建的载体导入胃癌细胞株SGC7901,PCR扩增基因组DNA,RT-PCR检测SV40T mRNA的表达。结果:限制性内切酶分析与测序结果显示,真核表达载体pcDNA3.1/HKSK构建成功;转染该载体的SGC7901细胞可检测到SV40T基因DNA的存在,且有SV40T mRNA的表达。结论:特异性表达SV40T基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV构建成功。

关键词： SV40T抗原胃癌真核载体

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河南分离株阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因序列分析

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郑州大学学报（医学版） 2008年第6期43卷 1117-1119页

作者：程晓丽温雯静刘晓东赵国强曾昭书郑红连建华薛长贵郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院寄生虫学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院解剖学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院法医学教研室郑州450001

目的:对河南分离株阴道毛滴虫铁氧还蛋白(Fd)基因突变进行检测分析。方法:采用改良法提取阴道毛滴虫全基因组DNA,应用特异性引物对Fd基因进行扩增,随机选取河南省内5个地区来源的10个虫株的Fd基因扩增片段直接进行双向测序,应用Chromas... 详细信息

目的:对河南分离株阴道毛滴虫铁氧还蛋白(Fd)基因突变进行检测分析。方法:采用改良法提取阴道毛滴虫全基因组DNA,应用特异性引物对Fd基因进行扩增,随机选取河南省内5个地区来源的10个虫株的Fd基因扩增片段直接进行双向测序,应用Chromas和Clustalx软件对测序结果进行分析,将测序所得Fd基因核苷酸序列与GenBank中的Fd基因(M33717)进行比对,对所得Fd基因的同源性进行分析。结果:河南省内5个地区来源的Fd基因的核苷酸序列无差异,与Fd基因(M33717)对比,在第200位发生碱基插入,插入碱基为ctg,与Fd基因M33717的同源性为99%。结论:经NIHGenBank基因命名委员会认定,本研究中Fd基因为新型基因,收录编号为EU652852。

关键词：阴道毛滴虫 DNA测序铁氧环蛋白

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同时沉默Livin基因和MTA1基因的siRNA载体的构建

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郑州大学学报（医学版） 2008年第2期43卷 202-205页

作者：杨松华赵国强郑红李月白赵继敏冯龙董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450001

目的:构建同时沉默Livin基因和MTA1基因的小干扰RNA(siRNA)载体。方法:设计Livin和MTA1的siRNA靶序列,合成它们互补的寡核苷酸链,分别退火后重组入pRNAT-U6.2载体,得到pRNAT-U6.2-Livin和pR-NAT-U6.2-MTA1。AccⅡ和XhoⅠ酶切pRNAT-U6.2-MTA1,回收475bp的MTA1siRNA单元,然后与XhoⅠ和PmeⅠ酶切线形化的pRNAT-U6.2-Livin重组,得到pRNAT-U6.2-Livin-MTA1,后者用脂质体包被转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR法分别检测转染细胞Livin和MTA1基因mRNA的表达情况。结果:针对Livin基因和MTA1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段分别克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析插入片段正确。PCR扩增证实MTA1siRNA单元重组入pRNAT-U6.2-Livin。RT-PCR检测显示,转染pRNAT-U6.2-Livin-MTA1的EC9706细胞Livin基因和MTA1基因mRNA表达水平皆明显降低。结论:同时沉默Livin基因和MTA1基因表达的siRNA载体构建成功。

关键词： RNA干扰 Livin MTA1 载体构建

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血小板膜糖蛋白Ibα基因VNTR多态性与冠心病相关性的研究

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中国现代医学杂志 2008年第1期18卷 90-92页

作者：赵洛沙张静华郑红毋淑珍杨文薛国华杨帆王培郑州大学第一附属医院心内科河南郑州450052 郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室河南郑州450052

目的探讨我国河南汉族人群血小板GPIbα基因巨糖肽区串联重复序列(VNTR)多态性与冠心病的关系。方法选择404例确诊冠心病的患者和500例无心脏病史的健康体检者作对照,应用PCR方法进行VNTR多态性检测。结果扩增产物电泳显示,在中国河南... 详细信息

目的探讨我国河南汉族人群血小板GPIbα基因巨糖肽区串联重复序列(VNTR)多态性与冠心病的关系。方法选择404例确诊冠心病的患者和500例无心脏病史的健康体检者作对照,应用PCR方法进行VNTR多态性检测。结果扩增产物电泳显示,在中国河南汉族人群中,发现VNTR的6种基因型:AC、BC、BD、CC、CD、DD。本研究未发现VNTR各基因型及等位基因与冠心病的发生间存在明显相关性。P值均大于0.05。与其他基因型相比,在CD基因型中,Gensini冠状动脉评分≥40组与评分<40组间的差异具有显著性,P<0.05,OR=2.3(95%可信区间1.2～4.4)。结论血小板膜GPIbα基因巨糖肽区VNTR的CD基因型与冠心病的严重程度有关。

关键词：血小板膜糖蛋白类冠心病基因

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近交系小鼠6个短串联重复序列位点遗传多态性分析

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郑州大学学报（医学版） 2008年第6期43卷 1139-1141页

作者：宋国英杨卫红王纯耀陈华艳刘华张广政杨静郑州大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院法医学教研室郑州450001 河南省实验动物中心郑州450052 郑州大学基础医学院机能实验室郑州450001

目的:分析5品系近交系小鼠6个短串联重复序列(STR)位点的遗传多态性。方法:选择位于3号、6号、7号染色体上的6个STR位点,采用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染方法对5品系近交系小鼠(BALB/C、豫医无毛小鼠、C57、DBA/2、FVB/NJ)... 详细信息

目的:分析5品系近交系小鼠6个短串联重复序列(STR)位点的遗传多态性。方法:选择位于3号、6号、7号染色体上的6个STR位点,采用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染方法对5品系近交系小鼠(BALB/C、豫医无毛小鼠、C57、DBA/2、FVB/NJ)各5只进行遗传多态性分析。结果:不同品系近交系小鼠在6个位点(D3Mit15、D3Mit85、D3Mit21、D6Mit81、D7Mit164、D7Nds1)上均出现一清晰条带,不同品系小鼠之间有4个位点(D3Mit15、D3Mit21、D6Mit81、D7Nds1)表现为多态性,2个位点(D3Mit85、D7Mit164)表现为单态性。结论:筛选出4个近交系小鼠STR多态性位点。

关键词：短串联重复序列遗传监测近交系小鼠

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儿童哮喘与诱导型一氧化氮合酶基因5′调控区(CCTTT)n缺失关系研究

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中国实用儿科杂志 2008年第4期23卷 260-262页

作者：靳秀红王群思沈照波李晓文郑州市儿童医院呼吸科河南郑州450053 郑州大学基础医学院医学遗传学教研室河南郑州450052

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因与哮喘的关系。方法2005年1月至9月,在郑州市儿童医院应用聚合酶链反应(PCR)扩增其短串联重复序列,对扩增产物进行聚丙烯酰胺变性凝胶电泳检测,银染显色并分析结果。结果(1)iNOS基因5′调控区(CCTT... 详细信息

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因与哮喘的关系。方法2005年1月至9月,在郑州市儿童医院应用聚合酶链反应(PCR)扩增其短串联重复序列,对扩增产物进行聚丙烯酰胺变性凝胶电泳检测,银染显色并分析结果。结果(1)iNOS基因5′调控区(CCTTT)n短串联重复序列PCR检测结果:该序列在77例哮喘患儿有63例缺失,在102例正常对照组中有25例缺失,差异有统计学意义。(2)iNOS基因该序列缺失与哮喘患儿病情的严重程度有关。(3)iNOS基因该序列缺失与哮喘患儿年龄无关。结论儿童支气管哮喘患者存在iNOS基因5′调控区(CCTTT)n短串联重复序列缺失,与正常儿童差异有统计学意义。iNOS基因5′调控区(CCTTT)n短串联重复序列与儿童支气管哮喘和病情严重程度有关。

关键词：诱导型一氧化氮合酶哮喘短串联重复序列

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小檗胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

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郑州大学学报（医学版） 2008年第6期43卷 1154-1156页

作者：申琦赵攀付春景黄幼田张艳艳李继成郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450001 北京大学医学部病理生理学教研室北京100083 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450001 郑州大学药学院郑州450001

目的:探讨小檗胺(BBM)对K562细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法:K562细胞分为5组,前4组为实验组,分别加入终浓度为0.8、8.0、40.0、80.0 mg/L的BBM,对照组加入等量RPMI 1640,分别作用不同时间后,采用MTT法检测BBM对K562细胞增殖... 详细信息

目的:探讨小檗胺(BBM)对K562细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法:K562细胞分为5组,前4组为实验组,分别加入终浓度为0.8、8.0、40.0、80.0 mg/L的BBM,对照组加入等量RPMI 1640,分别作用不同时间后,采用MTT法检测BBM对K562细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测各组Caspase-3蛋白和Survivin蛋白的表达。结果:BBM能呈时间剂量依赖性地抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡;免疫细胞化学结果显示BBM作用24 h后K562细胞Caspase-3蛋白表达升高,Survivin蛋白表达降低(P均<0.05)。结论:BBM能抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与Caspase-3蛋白的表达增高及Survivin蛋白的表达降低有关。

关键词：白血病 K562细胞小檗胺 Survivin Caspase-3

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河南汉族人群7个Y染色体短串联重复序列基因座的遗传多态性

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郑州大学学报（医学版） 2008年第6期43卷 1149-1153页

作者：李杨孙莉黄文君郑明陈辉李晓文郑州大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室郑州450001 郑州大学第一附属医院检验科郑州450052 郑州大学教育技术中心郑州450001

目的:调查7个Y染色体短串联重复序列(Y-STR)基因座及其单倍型在河南汉族人群中的遗传多态性。方法:采集102名河南汉族无关男性个体静脉血样,提取DNA,PCR扩增DYS19、DYS385、DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS390、A7.1、H4等7个Y-STR基因座,变性聚丙烯... 详细信息

目的:调查7个Y染色体短串联重复序列(Y-STR)基因座及其单倍型在河南汉族人群中的遗传多态性。方法:采集102名河南汉族无关男性个体静脉血样,提取DNA,PCR扩增DYS19、DYS385、DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS390、A7.1、H4等7个Y-STR基因座,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染检测,进行基因分型统计分析并计算等位基因频率GD值。结果:7个Y-STR基因座共检出99种单倍型,1种出现3次,1种出现2次,其余均出现1次。积累GD值为0.999 235。发现1个国内群体中的新等位基因。结论:7个Y-STR基因座具有较强的个体识别能力。

关键词： Y染色体短串联重复系列遗传多态性等位基因汉族河南省

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SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠的建立及生物学特性研究

SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠的建立及生物学特性研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：陈辉金辉张钦宪高翔郑红李晓文郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室南京大学模式动物研究所

本实验构建了胃壁细胞特异性真核表达载体 pcDNA3.1(一)/HKSV,从该载体酶切回收 3.8kb 的基因片段 H+-K+ATPase β promoter/SV40T,通过显微注射的方法构建转基因小鼠, PCR 和 southern 印迹检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,RT-PCR 检测基... 详细信息

本实验构建了胃壁细胞特异性真核表达载体 pcDNA3.1(一)/HKSV,从该载体酶切回收 3.8kb 的基因片段 H+-K+ATPase β promoter/SV40T,通过显微注射的方法构建转基因小鼠, PCR 和 southern 印迹检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,RT-PCR 检测基因 mRNA 的表达,免疫组化检测蛋白表达,HE 染色观测胃组织形态学改变,电镜观测胃粘膜壁细胞亚显微结构的变化,小鼠胃液酸度测定检测胃酸分泌状况。出生的77只 G0仔鼠 PCR 检测发现10只首建阳性鼠。除1只不育外,其他9只共生出99只 F1代鼠,其中1个品系 F1代 PCR 检测尚未发现阳性鼠,另8个品系 PCR 和 Southern 印迹检测均有阳性鼠产生,阳性率为40.8%。RT-PCR 检测 F1代阳性鼠均仅在胃组织中有 SV40T 基因 mRNA 的表达,而在心、肝、肾、肺、食道、肠、骨骼肌等组织中均无该基因的表达。免疫组化仅在转基因阳性鼠胃组织中检测到 SV40T 抗原的表达,阴性对照鼠胃组织和阳性鼠的其它组织均无该抗原表达。HE 染色显示转基因阳性鼠胃底腺拉长,成熟壁细胞数目减少,而其前体细胞数目增加。出生后35d、60d、120d 转基因阳性鼠相对于同龄未转基因鼠胃粘膜厚度明显增加,电镜观测转基因鼠的壁细胞相比于未转基因对照鼠壁细胞体积缩小,线粒体数目减少,胞内微管泡系统不发达甚至缺如。小鼠胃液酸度测定表明转基因鼠胃酸分泌显著降低,胃液酸度为7.1±0.4,与未转基因鼠胃液酸度 (2.06±0.5)相比具有显著性差异。转基因阳性鼠均表现为胃腺上皮增生,有些品系转基因鼠出现萎缩性胃炎,局部囊性扩张,腺体数量减少,坏死和炎性渗出等病理学改变。不育首建鼠处死解剖发现胃体出现蕈伞形肿瘤,腹腔中尚存在直径约8mm 的腹膜瘤。而该鼠食管、肝、脾、肾、心脏、胰腺、肺、十二指肠等组织未见明显病变。本实验建立的胃壁细胞定位表达 SV40T基因的转基因小鼠动物模型将为胃癌发病机理的研究、抗癌药物的筛选提供十分有用的实验动物模型。

关键词： SV40T 抗原 Southern 印迹转基因小鼠

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