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高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应

中华医学杂志 2006年第17期86卷 1191-1195页

作者：刘靖华李志杰唐靖刘亚伟赵雷邓鹏姜勇南方医科大学省部共建"重大疾病的转录组与蛋白质组学实验室"和广东省功能蛋白质组学重点实验室广州510515

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响及其对脂多糖（LPS）诱导细胞因子白细胞介素6（IL-6）表达的作用。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白（15ng／ml）诱导HUVEC 11种... 详细信息

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响及其对脂多糖（LPS）诱导细胞因子白细胞介素6（IL-6）表达的作用。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白（15ng／ml）诱导HUVEC 11种细胞因子／趋化因子的水平变化；检测不同浓度HMGB1（0～75ng／ml）刺激后不同时间点（0、1、3、6、12和24h）HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1（15ng／ml）与LPS（10ng／ml）共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果 HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、干扰素γ（IFN-γ）、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平明显升高（均P〈0．01），分别是对照（未加刺激）的5．7、4．2、27．8、12．8和5．4倍；HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌，在刺激后3～6h，IL-6水平开始增加，在6h时IL-6由对照的32ps／ml±21pg／ml增加到75pg／ml±22pg／ml（P〈0．01），12h（453pg／ml±78pg／ml）～24h（901pg／ml±184pg／ml）持续升高（P〈0．01）；随着HMGB1浓度的增加，IL-6的水平也明显增加，当HMGB1浓度为3、15、75ng／ml时，IL-6分别是155ps／ml±33pg／ml、901pg／ml±184pg／ml、1508pg／ml±378pg／ml，与基础值32pg／ml±21pg／ml相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。分别用LPS（10ng／ml）和HMGB1（15ng／ml）单独刺激HUVEC时，IL-6的含量从基础的32pg／ml±22pg／ml分别增加至289pg／ml±42pg／ml和901pg／ml±184pg／ml（均P〈0．0l）；如果用二者共同刺激HUVEC，IL-6的生成量大大增加（2361pg／ml±299pg／ml），二者存在协同作用（F=69．405，P〈0．01）。结论 HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子；HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系，并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6，在脓毒症的发生和发展中起重要作用。

关键词：脓毒症细胞因子人高迁移率族蛋白1

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采用蛋白质组学技术筛选大肠癌转移相关蛋白

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生物化学与生物物理进展 2006年第5期33卷 485-491页

作者：赵亮刘莉王爽李祖国丁彦青南方医科大学病理学教研室教育部和广东省共建重大疾病转录组学与功能蛋白质组学重点实验室广东省分子肿瘤病理重点实验室广州510515

采用对同一亲本来源、不同转移潜能细胞株SW480和SW620的蛋白质表达谱进行双向凝胶电泳和质谱技术分析,并在蛋白质和mRNA水平进行验证,成功鉴定了10个大肠癌转移相关蛋白,其中SW620细胞株表达上调的蛋白质有磷酸甘油酸变位酶1,磷脂酰乙... 详细信息

采用对同一亲本来源、不同转移潜能细胞株SW480和SW620的蛋白质表达谱进行双向凝胶电泳和质谱技术分析,并在蛋白质和mRNA水平进行验证,成功鉴定了10个大肠癌转移相关蛋白,其中SW620细胞株表达上调的蛋白质有磷酸甘油酸变位酶1,磷脂酰乙醇胺结合蛋白和高迁移率族蛋白B-1,而热休克蛋白27,膜联蛋白Ⅰ,甲硫腺苷磷酸化酶,切丝蛋白1和表皮型脂肪酸结合蛋白在SW620中表达下调.大多数差异蛋白质功能涉及肿瘤细胞生长、运动、粘附、凋亡等过程,研究结果为阐明大肠癌转移机制及寻找预测大肠癌转移的潜在标志物提供了理论依据.

关键词：大肠癌转移蛋白质组双向凝胶电泳

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应用改良的免疫胶体金包埋方法检测p38蛋白激酶在Raw细胞中的定位

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中国临床解剖学杂志 2007年第5期25卷 560-563页

作者：张琳张璐朴英杰南方医科大学组织学与胚胎学教研室南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室广州510515

目的:采用两种包埋方法Lowicryl K4M低温包埋和改良Spurr包埋,观察p38在Raw264.7细胞中的免疫电镜定位,摸索出一种操作简单、适用于南方潮湿多雨天气的免疫电镜包埋方法。方法:分别采用低温包埋剂Lowicryl K4M和改良Spurr树脂包埋两种方... 详细信息

目的:采用两种包埋方法Lowicryl K4M低温包埋和改良Spurr包埋,观察p38在Raw264.7细胞中的免疫电镜定位,摸索出一种操作简单、适用于南方潮湿多雨天气的免疫电镜包埋方法。方法:分别采用低温包埋剂Lowicryl K4M和改良Spurr树脂包埋两种方法,经包埋后染色,观察p38蛋白激酶在Raw264.7中的超微结构分布。结果:改良Spurr树脂包埋后结果显示,未受刺激的及EGF刺激的Raw264.7中,p38在胞浆和胞核中金颗粒弥散在细胞的各个部分,受到LPS刺激后,细胞核区的金颗粒明显增多,而胞浆区域的金颗粒显著减少,观察到的Raw细胞超微结构清晰、免疫胶体金定位准确,与低温包埋剂Lowicryl K4M包埋结果完全一致。结论:相对于Lowicryl K4M,Spurr树脂价格低廉,粘度低、抗湿性能好、切割性能佳、操作简单,是一种适用于南方潮湿多雨天气的免疫电镜包埋剂,可以替代低温包埋剂Lowicryl K4M。

关键词：树脂免疫胶体金电镜 p38蛋白激酶转位

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多巴胺受体在可卡因诱导的转录因子CREB活化中的作用(英文)

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南方医科大学学报 2006年第6期26卷 715-718页

作者：刘怒云张琳王小宁张璐南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所广东广州510515 南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室广东广州510515

目的研究多巴胺受体在可卡因诱导的转录因子CREB磷酸化活化中的调控作用。方法采用D1和D3多巴胺受体抑制剂,应用Westernblotting检测D1与D3多巴胺受体在可卡因诱导的cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化活化中的作用及D1和D3多巴胺受体抑... 详细信息

目的研究多巴胺受体在可卡因诱导的转录因子CREB磷酸化活化中的调控作用。方法采用D1和D3多巴胺受体抑制剂,应用Westernblotting检测D1与D3多巴胺受体在可卡因诱导的cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化活化中的作用及D1和D3多巴胺受体抑制剂本身对CREB磷酸化活化的影响,进一步应用Westernblotting检测细胞外信号调节激酶(ERK)在CREB磷酸化活化中的作用。结果D1多巴胺受体抑制剂阻止可卡因诱导的CREB磷酸化活化,而D3多巴胺受体抑制剂促进可卡因诱导的CREB磷酸化活化,D1和D3多巴胺受体抑制剂本身不能诱导CREB磷酸化活化。MEK的特异性抑制剂SL327可以抑制可卡因诱导的CREB磷酸化活化。结论D1和D3多巴胺受体对CREB的磷酸化活化起反式调控作用,并且这种反式调控作用依赖于ERK信号通路。

关键词：可卡因多巴胺受体 cAMP反应元件结合蛋白细胞外信号调节激酶基因表达

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环氧化酶2基因异常表达与大肠癌转移的关系

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南方医科大学学报 2006年第10期26卷 1408-1411页

作者：李祖国刘腾飞谢卫兵周军余力丁彦青南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室省部共建教育部重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的研究环氧化酶2在人大肠癌细胞系及大肠癌组织中的异常表达与意义。方法培养不同转移能力的人大肠癌细胞系SW480和SW620细胞,收集50例大肠癌石蜡组织,50例淋巴结转移性大肠癌石蜡组织;分别用免疫组织化学、Real-timePCR的方法研究环... 详细信息

目的研究环氧化酶2在人大肠癌细胞系及大肠癌组织中的异常表达与意义。方法培养不同转移能力的人大肠癌细胞系SW480和SW620细胞,收集50例大肠癌石蜡组织,50例淋巴结转移性大肠癌石蜡组织;分别用免疫组织化学、Real-timePCR的方法研究环氧化酶2在不同转移能力人大肠癌细胞系及原发人大肠癌组织和大肠淋巴结转移组织中的表达。结果环氧化酶2蛋白在SW480和SW620细胞株中均阳性表达;环氧化酶2mRNA在SW620比SW480细胞中表达增高,表达量的平均倍比关系为2.268。环氧化酶2蛋白在淋巴结转移癌组的异常表达高于原发大肠癌石蜡组织,相关性具有统计学意义(P<0.05)。结论环氧化酶2异常表达可能与大肠癌淋巴结转移相关。

关键词：环氧化酶2 大肠癌转移

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p38信号通路对SETD4在细胞中的表达和定位的影响

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中国病理生理杂志 2012年第5期28卷 878-883页

作者：叶萍蔡军伟付晓霞崔航刘亚伟陈小欢罗海华李煜生刘芸姜勇刘靖华重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东广州510515

目的:观察SETD4(SET domain containing 4)蛋白在不同细胞中的表达和定位情况,以及亚砷酸钠(NaAsO2)刺激对细胞SETD4表达和定位的影响,探讨NaAsO2诱导SETD4的改变是否依赖于p38信号通路.方法:用Western blotting检测SETD4在不同细胞中... 详细信息

目的:观察SETD4(SET domain containing 4)蛋白在不同细胞中的表达和定位情况,以及亚砷酸钠(NaAsO2)刺激对细胞SETD4表达和定位的影响,探讨NaAsO2诱导SETD4的改变是否依赖于p38信号通路.方法:用Western blotting检测SETD4在不同细胞中蛋白的表达情况,用细胞免疫荧光技术检测SETD4在细胞中的定位;用NaAsO2刺激p38+/+和p38-/-细胞,分别收集细胞总蛋白检测SETD4蛋白的表达变化,同时观察SETD4的定位和移位改变.结果:SETD4蛋白无论在鼠源还是人源的细胞中均有表达;细胞免疫荧光结果显示SETD4在整个细胞中分布,以胞质较多;p38+/+和p38-/-细胞受NaAsO2刺激后其SETD4蛋白的表达趋势一致,即均在6 h时有明显减少;p38+/+细胞受NaAsO2刺激后SETD4蛋白从胞质向胞核移位,而p38-/-细胞SETD4的移位现象不明显.结论:SETD4蛋白在不同种属及组织来源的细胞中均有表达,表现为全细胞分布,以胞质为主;NaAsO2刺激可影响细胞SETD4蛋白的表达水平及定位,NaAsO2诱导的SETD4移位改变有赖于p38 MAPK介导的信号通路.

关键词： SET家族蛋白 SETD4蛋白亚砷酸钠 p38 MAPK通路

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热休克蛋白27在大肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

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南方医科大学学报 2008年第1期28卷 41-44页

作者：赵亮李祖国丁彦青南方医科大学病理学教研室教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东省分子肿瘤病理重点实验室广东广州510515

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27mRNA和蛋白的表达... 详细信息

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27mRNA和蛋白的表达情况。结果在大肠癌组织中,热休克蛋白27的表达率与年龄、性别、淋巴结转移、临床分期无相关性(χ2test,P>0.05),但其过表达和大肠癌淋巴结转移显著负相关(Fisher'sexacttest,P=0.035)。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测结果显示Hsp27基因和蛋白在高淋巴结转移潜能的SW620细胞中呈低表达,在低淋巴结转移潜能的SW480细胞中呈高表达。结论Hsp27和大肠癌肿瘤细胞的转移行为可能为负相关,可能在阻止其转移中发挥重要作用。

关键词：大肠癌热休克蛋白27 淋巴结转移

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小鼠原代呼吸道上皮细胞分离培养的新方法

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生理学报 2011年第6期63卷 581-585页

作者：王达李煜生南方医科大学第一临床医学院广州510515 南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室和教育部重大疾病的转录组和蛋白质组学重点实验室广州510515

现有的呼吸道上皮细胞系大多来源于肿瘤组织或成系时与肿瘤细胞融合,其生物学行为与正常呼吸道上皮细胞差异较大。为更准确反映呼吸道疾病条件下该类细胞的生物学效应,本文对小鼠呼吸道上皮细胞分离的新技术和培养方法进行了探索。利用... 详细信息

现有的呼吸道上皮细胞系大多来源于肿瘤组织或成系时与肿瘤细胞融合,其生物学行为与正常呼吸道上皮细胞差异较大。为更准确反映呼吸道疾病条件下该类细胞的生物学效应,本文对小鼠呼吸道上皮细胞分离的新技术和培养方法进行了探索。利用链霉蛋白酶消化法分离获得小鼠呼吸道上皮细胞,利用特殊的完全培养基和I型胶原包被的培养皿进行原代培养。镜下可观察到呼吸道上皮细胞的纤毛节律性的定向摆动,证明本法所获得的细胞较完整地保留了其原有生理功能。本实验所建立的分离技术和培养方法简单、稳定、有效、可靠,为研究呼吸道疾病的细胞模型创造了条件。同时,此法可为其它实验动物呼吸道上皮细胞的培养提供借鉴。

关键词：呼吸道上皮细胞小鼠分离培养

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结直肠癌转移动物模型血清中几种蛋白变化的观察

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中华病理学杂志 2007年第1期36卷 48-52页

作者：李祖国赵亮刘莉丁彦青南方医科大学病理学教研室教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东省分子病理重点实验室广州510515

目的建立可视化结直肠癌转移模型,并应用血清蛋白质组学技术分析可视化结直肠癌转移模型血清蛋白质的变化。方法用 pEGFP-N1绿色荧光蛋白基因转染具有转移能力的 SW480细胞株,在裸鼠皮下接种成瘤后,再原位接种于裸鼠右半结肠,利用整体... 详细信息

目的建立可视化结直肠癌转移模型,并应用血清蛋白质组学技术分析可视化结直肠癌转移模型血清蛋白质的变化。方法用 pEGFP-N1绿色荧光蛋白基因转染具有转移能力的 SW480细胞株,在裸鼠皮下接种成瘤后,再原位接种于裸鼠右半结肠,利用整体荧光成像系统观察结直肠癌原位成瘤及发生转移的情况。同时采集裸鼠原位成瘤后不同转移阶段的血清,进行双向电泳联合时间飞行质谱分析差异蛋白质,观察结直肠癌转移模型裸鼠癌转移前后血清蛋白的变化。结果获得稳定表达绿色荧光蛋白的 SW480-EGFP 细胞株,裸鼠皮下接种成瘤率为100%,原位种植成瘤率为10/10,区域淋巴结转移为10/10,肝转移率为4/10,肺转移率为3/10。通过血清蛋白质组学技术成功鉴定了5个在癌转移发生后血清内显著升高的血清蛋白:结合珠蛋白α链,载脂蛋白 A4,载脂蛋白E,免疫球蛋白κ型 V 区 L 链和转铁蛋白。结论成功建立结直肠癌可视化转移模型,利用不同转移阶段鼠血清进行双向电泳图谱差异分析筛选出5个在癌转移发生后血清中显著升高的蛋白可能是与结直肠癌转移相关的蛋白。

关键词：结直肠肿瘤肿瘤转移模型动物血蛋白质类

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大承气汤对内毒素血症小鼠肺与大肠TLR4及TNF-α表达的影响

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中国中西医结合杂志 2011年第2期31卷 244-248页

作者：孙学刚范钦王启瑞刘亚伟唐靖刁建新石彩霞吕志平南方医科大学中医药学院分子生物学实验室广州510515 南方医科大学省部共建重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室广州510515

目的研究大承气汤(Dachengqi Decoction,DCQD)对内毒素血症小鼠肺、大肠关键信号分子的作用,探讨肺与大肠相表里的关系。方法应用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)10mg/kg腹腔注射BALB/C小鼠制作内毒素血症模型。32只小鼠随机分为4组,分... 详细信息

目的研究大承气汤(Dachengqi Decoction,DCQD)对内毒素血症小鼠肺、大肠关键信号分子的作用,探讨肺与大肠相表里的关系。方法应用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)10mg/kg腹腔注射BALB/C小鼠制作内毒素血症模型。32只小鼠随机分为4组,分别为对照组、DCQD组、模型组和LPS加DCQD组,每组8只。对照组给予生理盐水灌胃及腹腔注射;模型组给予生理盐水灌胃及LPS腹腔注射;DCQD组给予DCQD灌胃及生理盐水腹腔注射;LPS加DCQD给予DCQD灌胃及LPS腹腔注射。应用倒置显微镜观察肺、大肠组织HE染色切片的组织学变化;应用LiquiChip芯片检测肺、大肠组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;应用RT-PCR和Western blot研究toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)的基因转录与蛋白表达,分析TNF-α和TLR4在肺与大肠组织的相关性。结果与对照组比较,模型组肺与大肠TNF-α表达、TLR4蛋白表达及基因转录水平均增高(P<0.01);LPS加DCQD组肺与大肠TNF-α表达、TLR4蛋白表达及基因转录水平较模型组均降低(P<0.01,P<0.05),但较DCQD组仍显著增高(P<0.01,P<0.05)。经相关分析,肺与大肠组织在TNF-α表达水平(r=0.973,P<0.01)、TLR4蛋白表达水平(r=0.906,P<0.01)及基因转录水平(r=0.880,P<0.01)之间存在正相关关系。结论大承气汤减轻内毒素血症引起的肺与大肠组织炎症,可能与大承气汤降低TNF-α表达、TLR4蛋白表达及基因转录水平有关;肺与大肠组织在TNF-α表达水平、TLR4蛋白表达及基因转录水平之间存在正相关关系,提示肺与大肠存在表里关系。

关键词：大承气汤肺与大肠相表里 toll样受体4 肿瘤坏死因子-α

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