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人宫颈癌Hela细胞穿透肽的噬菌体展示技术筛选

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微循环学杂志 2009年第4期 99-100页

作者：刘芸刘爱华吴向玲江力玮姚琦邓鹏姜勇南方医科大学基础医学院病理生理学教研室和省部共建重大疾病转录组与蛋白质组学教育部重点实验室南方医院呼吸内科

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实时荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌骨转移相关基因表达的研究

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广东药学院学报 2008年第2期24卷 178-181页

作者：翟晓晓刘腾飞姚开泰南方医科大学肿瘤研究所/教育部和广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白质组学重点实验室广东省分子肿瘤病理学重点实验室广东广州510515

目的研究CXCR4、CTGF、MMP-1、IL-11、MST1R、ETV-1 6种基因在鼻咽癌细胞5-8F与骨共培养前后的表达情况,分析这些基因在鼻咽癌骨转移中的作用。方法采用基于SYBR GREENⅠ法的实时荧光定量RT-PCR检测5-8F细胞与骨共培养前后骨转移相关基... 详细信息

目的研究CXCR4、CTGF、MMP-1、IL-11、MST1R、ETV-1 6种基因在鼻咽癌细胞5-8F与骨共培养前后的表达情况,分析这些基因在鼻咽癌骨转移中的作用。方法采用基于SYBR GREENⅠ法的实时荧光定量RT-PCR检测5-8F细胞与骨共培养前后骨转移相关基因的表达情况。结果5-8F细胞与骨共培养后CXCR4、CTGF、MST1R、ETV-1的表达水平较共培养前差异有显著性(P<0.05),均表达上调;MMP-1、IL-11则差异无显著性。结论实时荧光定量RT-PCR能够敏感、特异地检测出鼻咽癌细胞在与骨组织共培养前后的mRNA的表达变化,方法准确可靠,操作方便;CXCR4、CTGF、MST1R、ETV-1有可能成为判断鼻咽癌骨转移的潜在标志物。

关键词：实时荧光定量RT-PCR 骨转移相关基因鼻咽癌

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EBV全基因组基因芯片构建与初步验证

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湖南师范大学学报（医学版） 2007年第4期4卷 1-4,8页

作者：方唯意刘真李欣刘求真刘腾飞姚开泰南方医科大学基础医学院肿瘤研究所教育部和广东省共建人类重大疾病转录组和蛋白质组学重点实验室广东省分子病理学重点实验室 510515

目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EB病毒(EBV)已知和预计的编码基因作为cDNA探针,用于研制EBV微阵列。利用能高产EBV病毒颗粒... 详细信息

目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EB病毒(EBV)已知和预计的编码基因作为cDNA探针,用于研制EBV微阵列。利用能高产EBV病毒颗粒的B95-8细胞作为检测对象,观测基因芯片检测的效果,已确定是否将来用于临床检测。方法:87个EBV基因探针通过一对设计于载体多克隆两端的引物进行PCR扩增。产物纯化后,探针被打印在Corning玻片上。通过与Cy3标记的B95-8细胞cDNA进行杂交反应,检测B95-8细胞内EBV基因表达。RT-PCR验证检测。结果:利用构建的EBV芯片,成功地在B95-8细胞中检测到了几乎所有的EBV潜伏基因的表达,随后RT-PCR验证了该结果。结论:我们成功地构建了EBV微阵列,且设计的EBV探针检测是有效的。但EBV微阵列是否可以用于鼻咽癌标本的检测还有待进一步证实。

关键词： NPC B95-8细胞,EBV微阵列,RT-PCR

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早期胚胎各器官CXCR4和CD44表达的观察

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中国组织化学与细胞化学杂志 2008年第2期17卷 212-217页

作者：江庆萍方唯意王开昕王爽姚开泰南方医科大学基础医学院肿瘤研究所教育部和广东省共建人类重大疾病转录组和蛋白质组学重点实验室广东省分子病理学重点实验室广州510515 深圳市南山区人民医院病理科深圳518100 南方医科大学病理学教研室广州510515

目的通过观察早期胚胎中CXCR4和CD44在全身各脏器的表达,了解不同器官干细胞的表面标志物特性。方法免疫组化SP法检测输卵管妊娠5例完整早期胚胎组织中CXCR4和CD44的表达情况。结果CXCR4大部分器官都见有表达,尤其在骨细胞和神经细胞中... 详细信息

目的通过观察早期胚胎中CXCR4和CD44在全身各脏器的表达,了解不同器官干细胞的表面标志物特性。方法免疫组化SP法检测输卵管妊娠5例完整早期胚胎组织中CXCR4和CD44的表达情况。结果CXCR4大部分器官都见有表达,尤其在骨细胞和神经细胞中为强阳性表达。CD44主要表达于间叶组织中,如舌肌和胃肠的深肌层,以及各器官的纤维组织中,但不表达于骨、神经组织和髓外造血组织。另外,在少数上皮组织中也见有表达,如胸腺上皮细胞强表达和肺粘膜弱表达。在部分组织中CD44和CXCR4的表达模式相反。结论通过免疫组化法观察的CXCR4和CD44早期胚胎发育中特殊的表达为研究干细胞特性提供了良好直观的依据和线索。

关键词：胚胎干细胞 CXCR4 CD44

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生长分化因子5基因原核表达质粒构建和表达及其体内成软骨的诱导活性

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第50期13卷 9842-9845页

作者：卢康荣王万山薛侠朴仲贤朴英杰南方医科大学教育部和广东省共建"重大疾病的转录组与蛋白质组学重点实验室" 广东省广州市510515 南方医科大学比较医学研究所广东省广州市510515 陕西省妇幼保健院陕西省西安市710001 汕头大学医学院中心实验室广东省汕头市515041

背景:生长分化因子5在软骨、四肢和关节的发育、形成中起着重要作用,是目前最常应用的研究早期关节发育的标志分子。克隆人生长分化因子5基因可为软骨、关节缺损的修复奠定研究基础。目的:利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人生长分化因... 详细信息

背景:生长分化因子5在软骨、四肢和关节的发育、形成中起着重要作用,是目前最常应用的研究早期关节发育的标志分子。克隆人生长分化因子5基因可为软骨、关节缺损的修复奠定研究基础。目的:利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人生长分化因子5成熟肽,探讨重组蛋白的体内诱导活性。设计、时间及地点:基因水平观察实验,于2006-01/06在南方医科大学分析测试中心完成。材料:人流产胚胎膝关节区软骨组织取自解放军广州军区总医院妇产科,标本获取征得家属同意。10只KM小鼠购自南方医科大学实验动物中心,雌雄各半,体质量18～22g,6～8周龄。方法:通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人胚胎软骨组织克隆生长分化因子5完整成熟肽基因,将所得基因片段插入pET22b(+)载体构建重组原核表达载体pET22b(+)-GDF5,重组质粒转化大肠杆菌BL-21进行IPTG诱导表达。凝胶介质镍离子螯合法纯化目的蛋白,植入小鼠后肢股部肌袋内常规苏木精-伊红染色进行生物学活性鉴定。主要观察指标:琼脂糖凝胶电泳观察目的基因表达条带,测序观察目的基因序列,SDS-PAGE电泳观察目的蛋白表达条带,组织学观察生长分化因子5诱导活性。结果:RT-PCR产物长约350bp,阳性克隆质粒经双酶切可切出约350bp的片段,测序表明与Genbank中的序列完全一致。SDS-PAGE电泳显示重组子转化菌在相对分子质量14100位置处出现特异外源蛋白表达带,和成熟肽相对分子质量13600接近。纯化后体内植入实验组织切片显示,大量的间充质干细胞聚集和增生,并分化成为成软骨细胞,分泌软骨基质并埋入其中变为软骨细胞。结论:通过RT-PCR法从人胚胎软骨组织中成功克隆出人生长分化因子5完整成熟肽基因,可在大肠杆菌中得到高效表达,经纯化后在动物体内具有成软骨诱导活性。

关键词：生长分化因子5 克隆表达活性

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X线照射对宫颈癌HeLa细胞醛缩酶A表达和定位的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2010年第5期30卷 617-620页

作者：何敏毅孙学刚文戈赵亮南方医科大学珠江医院器官移植科广东广州510515 南方医科大学中医药学院中医症候实验室广东广州510515 南方医科大学南方医院影像中心广东广州510515 南方医科大学教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的:观察宫颈癌HeLa细胞转染醛缩酶A(aldolase A,ALDOA)后,在X线作用下ALDOA在细胞内定位的改变,以及其对细胞存活率的影响。方法:克隆出ALDOA全长编码序列,构建真核表达质粒pECFP-C1-ALDOA,实验组通过脂质体介导将pECFP-C1-ALDOA转染H... 详细信息

目的:观察宫颈癌HeLa细胞转染醛缩酶A(aldolase A,ALDOA)后,在X线作用下ALDOA在细胞内定位的改变,以及其对细胞存活率的影响。方法:克隆出ALDOA全长编码序列,构建真核表达质粒pECFP-C1-ALDOA,实验组通过脂质体介导将pECFP-C1-ALDOA转染HeLa细胞,设载体pECFP-C1作为阴性对照,各组均给予X线照射,荧光显微镜观察照射前后HeLa细胞中pECFP-C1-ALDOA和pECFP-C1表达及定位的变化,用XTT法检测细胞存活率的改变。结果:双酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;荧光显微镜下观察HeLa细胞内pECFP-C1-ALDOA主要分布于胞浆,pECFP-C1为全细胞均匀分布;经X线照射24h后胞浆中的pECFP-C1-ALDOA逐渐转至胞核,而pECFP-C1在细胞内的定位则不发生明显改变;经XTT法检测,发现X线照射后,转染pECFP-C1-ALDOA质粒的细胞存活率明显高于转染pECFP-C1的对照组细胞。结论:抑制ALDOA的表达,可使X线更易诱导宫颈癌细胞的死亡,因此其可能作为宫颈癌放射治疗的新靶点。

关键词：醛缩酶A X线 HeLa细胞

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大承气汤可能通过TLR4通路影响内毒素血证小鼠肺与大肠TNF-α的表达

大承气汤可能通过TLR4通路影响内毒素血证小鼠肺与大肠TNF-α的表...

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第二十一届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨国家级中西医结合消化系统疾病新进展学习班

作者：孙学刚冯沃成李杰范钦王启瑞刘亚伟唐靖吕志平南方医科大学中医药学院分子生物学实验室南方医科大学省部共建重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室

目的:研究大承气汤(DCQT)对内毒素血证小鼠肺、肠关键信号分子的作用,探讨肺与大肠相表里的关系。方法:应用LPS 10mg/kg腹腔注射BALB/C小鼠制作内毒素血证模型,应用倒置显微镜观察肺、肠组织HE染色切片的病理学变化,应用liquichip芯片... 详细信息

目的:研究大承气汤(DCQT)对内毒素血证小鼠肺、肠关键信号分子的作用,探讨肺与大肠相表里的关系。方法:应用LPS 10mg/kg腹腔注射BALB/C小鼠制作内毒素血证模型,应用倒置显微镜观察肺、肠组织HE染色切片的病理学变化,应用liquichip芯片检测肺、肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,应用RT-PCR和western blot研究toll样受体4(TLR4)的转录与表达,分析TNF-α和TLR4在肺、肠组织的相关性。结果:DCQT减轻肺组织出血、水肿、炎性细胞浸润以及肠壁充血、中性粒细胞浸润;LPS增高TNF-α表达(肺:P<0.01,肠:P<0.01,次序下同),DCQT降低肺、肠TNF-α表达水平(P<0.01,P<0.01),但仍高于DCQT对照组(P<0.01, P<0.01);LPS组增高了TLR4表达(P<0.01,P<0.01),DCQT干预使TLR4表达水平降低(P<0.05, P<0.05);LPS组增高了TLR4转录水平(P<0.01,P<0.01),DQCT降低了LPS引起的TLR4转录水平(P<0.05,P<0.05),但与DCQT对照组相比TLR4表达仍显著增高(P<0.01,P<0.01)。经相关分析,肺、肠组织TNF-α表达,TLR4转录和表达之间存在正相关关系(P<0.01,P<0.01, P<0.01)。结论:DCQT减轻内毒素血证引起的肺、肠组织炎症,可能与DCQT降低TLR4转录、表达,降低TNF-α表达有关,肺、肠组织TLR4转录、表达及TNF-α表达水平存在相关性,提示肺、肠存在表里关系。

关键词：大承气汤肺与大肠相表里 toll样受体4 肿瘤坏死因子-α

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施万细胞复合人发角蛋白模拟微重力条件培养构建组织工程化神经

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热带医学杂志 2008年第8期8卷 755-757,764页

作者：王万山王格卢康荣顾为望朴英杰南方医科大学比较医学研究所广州510515 南方医科大学南方医科大学教育部和广东省共建"重大疾病的转录组与蛋白质组学重点实验室" 广州510515

目的利用旋转式细胞培养系统模拟微重力条件体外构建人发角蛋白组织工程化神经。方法从乳鼠坐骨神经分离培养施万细胞,将传代施万细胞与人发角蛋白(HHK)在旋转式细胞培养系统内联合培养,分别在倒置显微镜和扫描电镜下观察施万细胞与HHK... 详细信息

目的利用旋转式细胞培养系统模拟微重力条件体外构建人发角蛋白组织工程化神经。方法从乳鼠坐骨神经分离培养施万细胞,将传代施万细胞与人发角蛋白(HHK)在旋转式细胞培养系统内联合培养,分别在倒置显微镜和扫描电镜下观察施万细胞与HHK的相容性,评价体外构建效果。结果施万细胞分离培养成功,纯度达97%。联合培养后施万细胞在光镜下呈单层或多层贴附于HHK支架表面。扫描电镜下呈细长梭形,生长方向与HHK细丝长轴相一致,随着培养时间的延长其贴附程度加强,数量增加。结论在旋转式培养系统下施万细胞与HHK具有良好的粘附性和相容性,体外构建HHK组织工程化神经初步成功。

关键词：人发角蛋白组织工程三维培养施万细胞

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大承气汤对内毒素血证小鼠肺与大肠TLR4和TNF-α表达的影响

大承气汤对内毒素血证小鼠肺与大肠TLR4和TNF-α表达的影响

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中华中医药学会中医基础理论分会第三届学术年会

作者：孙学刚范钦王启瑞刘亚伟唐靖刁建新石彩霞吕志平南方医科大学中医药学院分子生物学实验室南方医科大学省部共建重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室

目的：研究大承气汤(DCQT)对内毒素血证小鼠肺、肠关键信号分子的作用，探讨肺与大肠相表里的关系。方法：应用LPS 10mg/kg 腹腔注射BALB/C小鼠制作内毒素血证模型，应用倒置显微镜观察肺、肠组织HE染色切片的病理学变化，应用liqui... 详细信息

目的：研究大承气汤(DCQT)对内毒素血证小鼠肺、肠关键信号分子的作用，探讨肺与大肠相表里的关系。方法：应用LPS 10mg/kg 腹腔注射BALB/C小鼠制作内毒素血证模型，应用倒置显微镜观察肺、肠组织HE染色切片的病理学变化，应用liquichip芯片检测肺、肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响，应用RT-PCR和western blot研究toll受体4(TLR4)的转录与表达，分析TNF-α和TLR4在肺、肠组织的相关性。结果：DCQT减轻肺组织出血、水肿、炎性细胞浸润以及肠壁充血、中性粒细胞浸润;LPS增高TNF-α仪表达(肺：P＜0.01，肠：P＜0.01，次序下同)，DCQT降低肺、肠FNF-α表达水平(P＜0.01，P＜0.01)，但仍高于DCQT对照组(P＜0.01，P＜0.01);LPS组增高了TLR4表达(P＜0.01，P＜0.01)，DCQT干预使TLR4表达水平降低(P＜0.05，P＜0.05);LPS组增高了了LR4转录水平(P＜0.01，P＜0.01)，DQCT降低了LPS引起的TIR4转录水平(P＜0.05，P＜0.05)，但与DCQ7对照组相比TLR4表达仍显著增高(P＜0.01，P＜0.01)。经相关分析，肺、肠组织TNF-α表达，TLR4转录和表达之间存在正相关关系(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)。结论：DCQT减轻内毒素血证引起的肺、肠组织炎症，可能与DCQ7.降低TLR4LR4转录、表达，降低TNF-α表达有关，肺、肠组织TLR4转录、表达及TNF-α表达水平存在相关性，提示肺、肠存在表里关系。

关键词：大承气汤内毒素血证 toll受体4 肿瘤坏死因子-α 肠关键信号分子

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噬菌体展示技术的理论基础及其在感染性疾病防治中的应用

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生物技术通讯 2009年第2期20卷 253-257页

作者：牛茂昌刘靖华李玉花姜勇东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 南方医科大学基础医学院重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室广东广州510515

噬菌体展示技术是一种高通量研究基因功能、蛋白质表达及其相互作用的有效方法,具有与生物芯片一样的大量快速检测、发现并鉴定功能基因及蛋白质-蛋白质相互作用的优点。我们着重介绍噬菌体展示技术的种类、原理,及其在感染性疾病防治... 详细信息

噬菌体展示技术是一种高通量研究基因功能、蛋白质表达及其相互作用的有效方法,具有与生物芯片一样的大量快速检测、发现并鉴定功能基因及蛋白质-蛋白质相互作用的优点。我们着重介绍噬菌体展示技术的种类、原理,及其在感染性疾病防治中的应用。

关键词：噬菌体展示感染性疾病微生物感染宿主

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