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重庆医科大学学报 2010年第11期35卷 1700-1701页

作者：冯清林姜蓉雷波彭小华黄良库重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:比较Mayer苏木精和Harris苏木精染液在免疫组织化学复染中的效果,提高免疫组织化学染色质量。方法:采用相同的染色方法分别将两种苏木精染液用于心肌、大脑等多种石蜡切片的SP、SABC免疫组化复染,对比两种染液染色结果。结果:Maye... 详细信息

目的:比较Mayer苏木精和Harris苏木精染液在免疫组织化学复染中的效果,提高免疫组织化学染色质量。方法:采用相同的染色方法分别将两种苏木精染液用于心肌、大脑等多种石蜡切片的SP、SABC免疫组化复染,对比两种染液染色结果。结果:Mayer苏木精复染后的切片细胞核呈深蓝色,细胞浆及周围环境却没有附着色,核质对比清晰。结论:Mayer苏木精染液在免疫组化复染中效果明显优于Harris苏木精。

关键词： Mayer苏木精 Harris苏木精免疫组织化学复染

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人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1319-1324页

作者：刘艺李静刘晓岩姜蓉王建伟魏强赵亮陈地龙重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形... 详细信息

目的探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态及数量,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期的分布,Real-time PCR检测细胞中β-catenin基因mRNA水平,免疫细胞化学法检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的定位及表达,Western blot检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平。结果人参皂苷单体Rh2(S)对KG1α细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Rh2(S)作用48 h后,可见KG1α细胞分散生长,数量明显减少;可见数量不等,程度不同的凋亡细胞;G0/G1期细胞比例明显上升(P<0.05),G2+M和S期细胞比例明显下降(P<0.05);细胞中β-catenin基因mRNA水平明显降低(P<0.01)。β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论人参皂苷单体Rh2(S亚型)对KG1α细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能抑制Wnt/β-catenin/TCF4/CyclinD1信号通路,使细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡。

关键词：人参皂苷单体Rh2(S亚型) KG1a细胞细胞增殖细胞凋亡 β-catenin TCF4 CyclinD1

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当归多糖拮抗致衰剂对大鼠胸腺结构与功能的保护作用

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解剖学报 2016年第2期47卷 254-260页

作者：姜蓉张梦思贾道勇张岩岩夏婕妤邹婷叶剑文王璐王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨当归多糖(ASP)拮抗致衰剂对大鼠胸腺结构与功能的保护作用及相关机制。方法 SD大鼠随机分为4组,每组10只。衰老模型组,每天1次皮下注射D-半乳糖(120mg/kg),共42d;ASP衰老模型组,每天1次注射D-半乳糖剂量与时间同衰老模型组,第1... 详细信息

目的探讨当归多糖(ASP)拮抗致衰剂对大鼠胸腺结构与功能的保护作用及相关机制。方法 SD大鼠随机分为4组,每组10只。衰老模型组,每天1次皮下注射D-半乳糖(120mg/kg),共42d;ASP衰老模型组,每天1次注射D-半乳糖剂量与时间同衰老模型组,第15天起腹腔注射ASP(100 mg/kg),至第42天;正常对照组,每天皮下注射等量生理盐水42d;ASP对照组,注射等量生理盐水14d,第15天起腹腔注射ASP 28d(同ASP衰老模型组)。药物注射完成后第2天,取各组胸腺,测定胸腺指数,观察胸腺组织形态学,检测胸腺细胞衰老;制备各组胸腺细胞,体外培养细胞检测其增殖、细胞周期分布,测定细胞因子分泌量、细胞产生活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 D-半乳糖复制的衰老模型大鼠胸腺结构与功能损伤明显。与衰老模型组大鼠比较,ASP衰老模型组大鼠胸腺指数升高,胸腺皮质与髓质面积比例增加,胸腺细胞的增殖能力提高,处于G1期胸腺细胞比例减少,G2及S期细胞比例增加,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)阳性胸腺细胞百分率下降,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素(IL)-2、IL-6的分泌能力明显提高,SOD活性明显提升,ROS含量下降。结论当归多糖对致衰剂D-半乳糖所致的胸腺损伤有明确的拮抗作用,其机制可能与抑制氧化损伤有关。

关键词：当归多糖衰老模型胸腺酶联免疫吸附测定大鼠

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小鼠子宫内膜基质细胞分离培养及鉴定

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重庆医学 2011年第34期40卷 3472-3473,F0003页

作者：王庆跃李丹魏莎莉张丽重庆医科大学干细胞与组织工程研究室 400016

目的寻求一种简便有效的早孕小鼠子宫内膜基质细胞的培养方法。方法采用胰蛋白酶消化与机械振荡相结合分离小鼠子宫内膜基质细胞,接种后通过光镜观察其形态学特征,并采用免疫细胞化学进行细胞鉴定。结果接种24h后大部分细胞已贴壁,培养3... 详细信息

目的寻求一种简便有效的早孕小鼠子宫内膜基质细胞的培养方法。方法采用胰蛋白酶消化与机械振荡相结合分离小鼠子宫内膜基质细胞,接种后通过光镜观察其形态学特征,并采用免疫细胞化学进行细胞鉴定。结果接种24h后大部分细胞已贴壁,培养3d后细胞排列紧密、形态为长梭形。经过免疫细胞化学鉴定,成功获得了小鼠子宫内膜基质细胞。结论胰蛋白酶消化与机械振荡相结合可成功分离并原代培养小鼠子宫内膜基质细胞。

关键词：子宫内膜间质细胞胰蛋白酶振动小鼠

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人参皂苷Rg1对大鼠胸腺结构与功能的影响

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解剖学报 2015年第3期46卷 367-372页

作者：张力恒冉瑞图孙嘉政张晶邵月贾道勇张岩岩张梦思王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨人参皂苷Rg1对大鼠胸腺组织结构与功能的影响及相关机制。方法 SD大鼠随机分为2组,每组10只。Rg1注射组,腹腔注射Rg1 20mg/kg,qd×28d;对照组,等时注射等量生理盐水。药物注射完成后第2天,取胸腺称重测定胸腺指数,石蜡切片... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1对大鼠胸腺组织结构与功能的影响及相关机制。方法 SD大鼠随机分为2组,每组10只。Rg1注射组,腹腔注射Rg1 20mg/kg,qd×28d;对照组,等时注射等量生理盐水。药物注射完成后第2天,取胸腺称重测定胸腺指数,石蜡切片与HE染色观察胸腺组织结构;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测胸腺细胞衰老,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测胸腺细胞对刀豆蛋白A(Con A)刺激的增殖能力,ELISA检测胸腺细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素(IL)-2与IL-6的能力,流式细胞术检测胸腺细胞周期、细胞凋亡率与活性氧(ROS)含量,酶学检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量与还原性谷胱甘肽(GSH)与氧化性谷胱甘肽(GSSH)的比值,Western blotting检测细胞衰老相关蛋白P21、P53、Rb表达。结果与对照组相比,注射Rg1能提升大鼠胸腺指数,增加胸腺皮质面积比例,提高胸腺细胞增殖能力和S期比例,降低G1期与G2/M期细胞比例,减少胸腺细胞凋亡和SA-β-Gal阳性细胞百分率,促进胸腺细胞分泌GM-CSF,TNF-α、IL-2、IL-6,提升胸腺细胞SOD活性和GSH/GSSG比例,降低ROS、MDA含量,下调P53、P21、RB蛋白表达。结论人参皂苷Rg1对大鼠胸腺结构与功能有明确的保护作用,其机制可能与抑制氧化损伤和下调p53/p21/Rb信号通路有关。

关键词：人参皂苷Rg1 胸腺免疫印迹法大鼠

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小鼠海马结构氧化/抗氧化相关因子和神经营养因子表达的增龄性变化

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中国组织化学与细胞化学杂志 2015年第6期23卷 517-522页

作者：袁莉晋贞超刘品月吴宏郑敏重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的通过观察小鼠年龄增长过程中海马氧化/抗氧化相关因子谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)和脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平的变化,探讨海马内抗氧化损伤能力及神经营... 详细信息

目的通过观察小鼠年龄增长过程中海马氧化/抗氧化相关因子谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)和脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平的变化,探讨海马内抗氧化损伤能力及神经营养因子水平的变化与海马老化的关系。方法通过β-半乳糖苷酶染色观测青年组(2-3月)、中年组(6-8月)、老年组(18-20月)雄性C57小鼠海马细胞衰老程度。比色法、硫代巴比妥酸法、酶联免疫吸附试验分别检测GSH、GSH-PX、MDA、BDNF、GDNF在各组小鼠海马内的水平。结果研究显示随着年龄增长,海马组织衰老程度逐渐增加,而抗氧化的GSH含量减少、GSH-PX活性降低;氧化损伤产物MDA含量增加;海马组织神经营养因子BDNF、GDNF水平降低。结论本研究结果提示,海马结构的老化可能与海马抗氧化能力下降、氧化损伤程度增加和BDNF、GDNF等神经营养因子水平的降低有关。

关键词：衰老氧化损伤神经营养

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ATF4基因在小鼠胚胎围着床期子宫内膜的表达

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基础医学与临床 2012年第11期32卷 1293-1297页

作者：柴路维姜蓉何小茜黄燕杨戎重庆医科大学干细胞与组织工程研究室生理教研室重庆400016

目的探讨转录激活因子4(ATF4)在小鼠胚胎围着床期子宫内膜中的表达规律及在胚胎植入过程中的作用。方法妊娠0～7 d小鼠子宫内膜,用RT-PCR、免疫组织化学法和Western blot分别检测小鼠内膜ATF4 mRNA及蛋白的表达;用子宫角内注射ATF4抗体... 详细信息

目的探讨转录激活因子4(ATF4)在小鼠胚胎围着床期子宫内膜中的表达规律及在胚胎植入过程中的作用。方法妊娠0～7 d小鼠子宫内膜,用RT-PCR、免疫组织化学法和Western blot分别检测小鼠内膜ATF4 mRNA及蛋白的表达;用子宫角内注射ATF4抗体进行干预。结果 1)妊娠各组小鼠子宫内膜ATF4 mRNA的表达量均显著高于未孕组d0(P<0.05),且随妊娠天数的增加其表达量逐渐增高,到d4达到峰值,之后逐渐下降;2)ATF4蛋白主要在基质细胞胞质表达,其表达规律与mRNA表达规律基本一致。3)子宫角ATF4抗体注射后与对照组相比着床数明显减少。结论 ATF4在小鼠妊娠早期可能参与子宫内膜蜕膜化过程,有利于着床。

关键词： ATF4 着床子宫内膜蜕膜化

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当归多糖与阿糖胞苷联合注射对人白血病模型小鼠脾脏结构与功能的影响

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中药药理与临床 2014年第4期30卷 62-66页

作者：张梦思徐春燕朱家红贾道勇刘俊张岩岩姜蓉王璐王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:探讨当归多糖(ASP)与阿糖胞苷(Ara-C)联合注射对移植性人白血病模型小鼠脾脏结构与功能的影响及其相关机制。方法:每只小鼠尾静脉移植2×107个K562细胞建立移植性人白血病NOD/SCID小鼠模型,模型建立后随机分为模型组和当归多... 详细信息

目的:探讨当归多糖(ASP)与阿糖胞苷(Ara-C)联合注射对移植性人白血病模型小鼠脾脏结构与功能的影响及其相关机制。方法:每只小鼠尾静脉移植2×107个K562细胞建立移植性人白血病NOD/SCID小鼠模型,模型建立后随机分为模型组和当归多糖组、阿糖胞苷组、当归多糖+阿糖胞苷组。从移植K562细胞第31d开始腹腔分别注射当归多糖(200 mg/kg、阿糖胞苷(2.5mg/kg)和当归多糖(200 mg/kg)+阿糖胞苷(2.5 mg/kg),共14d,模型组注射等时等量的生理盐水。药物注射完成第2d,取眼球血检测外周血白细胞总数与分类计数,取股骨测定每只股骨有核细胞(BMMCs)数,取脾脏测定脾指数并将新鲜小块脾制作成10μm冷冻切片,HE和TUNEL染色观察脾脏病理形态学与细胞凋亡情况。取0.04 g脾脏制备10%的组织匀浆,提取各组上清液并检测抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD),氧化产物谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的蛋白浓度与炎症因子IL-1β、IL-6水平。结果:与模型组比较,无论是当归多糖、阿糖胞苷单独注射或当归多糖和阿糖胞苷联合用药均能有效降低外周血白细胞总数,降低中性粒细胞百分率,提高淋巴细胞百分率;降低股骨BMMCs数;减少脾指数;白血病细胞对脾浸润减少且凋亡率增加;脾脏抗氧化能力下降得以抑制,表现为GSH-Px与SOD活性升高,氧化产物GSH与MDA降低;炎症因子IL-1β、IL-6水平降低,且联合用药组效果更为明显。结论:当归多糖与阿糖胞苷能减少白血病细胞在脾脏内聚集,促进白血病细胞衰老凋亡,降低白血病细胞对脾结构与功能损伤,减轻脾脏炎症反应,提高脾组织抗氧化能力。

关键词：当归多糖阿糖胞苷 K562细胞株人白血病小鼠模型脾脏

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大鼠大脑白质、皮质毛细血管的体视学定量研究

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解剖学报 2010年第3期41卷 446-451页

作者：邵伟华李琛陈林张伟唐勇重庆医科大学组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程学研究室重庆400016

目的观察大鼠大脑白质、皮质内毛细血管总长度、总体积、总表面积和平均直径。方法选5只7月龄Long-Evans大鼠。运用免疫组织化学技术及相应的体视学方法 ,计算白质、皮质内毛细血管的长度密度、体积密度﹑表面积密度和毛细血管的总长度... 详细信息

目的观察大鼠大脑白质、皮质内毛细血管总长度、总体积、总表面积和平均直径。方法选5只7月龄Long-Evans大鼠。运用免疫组织化学技术及相应的体视学方法 ,计算白质、皮质内毛细血管的长度密度、体积密度﹑表面积密度和毛细血管的总长度、总体积﹑总表面积、平均直径。结果大鼠白质由于组织处理引起的白质体积皱缩率为0.51±0.09。白质毛细血管的总长度、总体积、总表面积、平均直径依次为(30.9±6.2)m、(0.8±0.09)mm3、(5.3±0.74)cm2、(5.5±1.1)μm。皮质由于组织处理引起的体积皱缩率为0.57±0.08。皮质毛细血管的总长度、总体积、总表面积、平均直径的近似值依次为(364.8±68.0)m、(7.0±1.6)mm3、(51.6±11.7)cm2、(4.5±0.40)μm。结论本研究方法为以后同类型的研究提供了较为理想的方法学借鉴。本研究结果为将来的研究提供了大鼠大脑白质和皮质毛细血管参数的基本数值。

关键词：皮质白质毛细血管免疫组织化学体视学大鼠

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骨髓基质细胞衰老对造血细胞氧化应激的影响

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解剖学报 2015年第6期46卷 757-763页

作者：宋小英景鹏伟熊丽溶贾道勇王亚平王璐重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室组织学胚胎学教研室重庆400016

目的探讨骨髓基质细胞衰老对骨髓造血细胞氧化应激的影响。方法取6-8周雄性健康C57小鼠,全骨髓贴壁法培养骨髓基质细胞（BMSCs）,建立衰老骨髓基质细胞体外模型。实验分为常规对照组和衰老组。对照组：常规培养基培养48h;衰老组：常规... 详细信息

目的探讨骨髓基质细胞衰老对骨髓造血细胞氧化应激的影响。方法取6-8周雄性健康C57小鼠,全骨髓贴壁法培养骨髓基质细胞（BMSCs）,建立衰老骨髓基质细胞体外模型。实验分为常规对照组和衰老组。对照组：常规培养基培养48h;衰老组：常规培养基内加入30g/L D-半乳糖,作用48h。衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测衰老骨髓基质细胞百分率;流式细胞术分析骨髓基细胞周期。骨髓单个核细胞（BMNCs）与骨髓基细胞共培养,锥虫蓝计数BMNCs活细胞数;流式细胞术检测骨髓基细胞周期;髓系多向性造血祖细胞（CFU-Mix）半固体培养集落计数;DCFH-DA荧光染色流式检测BMNCs和骨髓基细胞的活性氧簇（ROS）水平;激光扫描共焦显微术半定量检测骨髓基细胞连接蛋白43（Cx43）表达。结果 D-半乳糖体外诱导骨髓基细胞衰老,骨髓基细胞SA-β-Gal染色阳性率显著上升,细胞周期G1期阻滞。BMNCs与衰老组骨髓基细胞共培养48h,锥虫蓝计数BMNCs活细胞数量下降;细胞周期阻滞;CFU-Mix集落形成数量较对照组显著下降。衰老组骨髓基细胞胞内ROS含量增加,Cx43表达明显下调;与衰老骨髓基细胞共培养的BMNCs胞内ROS含量较与常规对照骨髓基细胞共培养的BMNCs胞内ROS含量上升。结论衰老骨髓基质细胞抑制骨髓造血细胞增殖分化,其机制可能与衰老骨髓基质细胞氧化应激增强,缓解造血细胞氧化应激能力下降有关。

关键词：衰老骨髓基质细胞造血细胞氧化应激流式细胞术小鼠

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