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重庆医科大学学报 2011年第4期36卷 419-422页

作者：彭彬陈茂山蒲莹王亚平川北医学院组织学与胚胎学教研室南充637007 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:探讨人参皂苷Rg1延缓D-半乳糖所致大鼠脑衰老后的学习记忆能力、SOD活性、MDA含量及衰老相关基因P16INK4a、P21Waf1 mRNA及蛋白的表达水平。方法:将15只3月龄SD大鼠随机分为对照组、脑衰老组[120 mg/(kg.d)D-半乳糖颈背部皮下注射6... 详细信息

目的:探讨人参皂苷Rg1延缓D-半乳糖所致大鼠脑衰老后的学习记忆能力、SOD活性、MDA含量及衰老相关基因P16INK4a、P21Waf1 mRNA及蛋白的表达水平。方法:将15只3月龄SD大鼠随机分为对照组、脑衰老组[120 mg/(kg.d)D-半乳糖颈背部皮下注射6周]、Rg1抗脑衰老组[同衰老模型组处理,并于第3周起腹腔注射人参皂苷Rg1 20 mg/(kg.d)共注射4周]。Morris水迷宫评估各组大鼠的空间学习记忆能力;比色法测定脑皮质内的SOD活性及MDA含量;实时荧光定量RT-PCR检测海马组织内P16INK4a、P21Cip1/Waf1 mRNA的表达水平;Western blot检测衰老相关基因P16INK4a、P21Cip1/Waf1蛋白的表达。结果:与脑衰老组相比,Rg1抗脑衰老组大鼠学习记忆能力显著提高,脑组织内SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,P16INK4a、P21 Cip1/Waf1mRNA及蛋白的表达水平也显著降低。结论:Rg1具有延缓D-半乳糖大鼠脑衰老的作用。其机制可能与增强脑组织的抗氧化能力,下调脑组织内P16INK4a、P21Waf1 mRNA及蛋白的表达水平有关。

关键词：大鼠人参皂苷Rg1 脑衰老 D-半乳糖

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人参皂苷Rg1调控神经干细胞衰老作用及机制探讨

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中国细胞生物学学报 2011年第10期33卷 1116-1122页

作者：彭彬王朝丽冯丽王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016 川北医学院组织学与胚胎学教研室南充637007

用三丁基过氧化氢(t-BHP)构建神经干细胞(NSC)体外衰老模型,探讨人参皂苷Rgl延缓NSC衰老的作用及机制,为寻找延缓NSC衰老新途径提供理论和实验依据。将从新生SD大鼠海马组织中分离纯化的第三代NSC随机分为五组。对照组:在NSC完全培养基... 详细信息

用三丁基过氧化氢(t-BHP)构建神经干细胞(NSC)体外衰老模型,探讨人参皂苷Rgl延缓NSC衰老的作用及机制,为寻找延缓NSC衰老新途径提供理论和实验依据。将从新生SD大鼠海马组织中分离纯化的第三代NSC随机分为五组。对照组:在NSC完全培养基中培养2 h;衰老模型组:在对照组基础上加入终浓度为100μmol/L的t-BHP培养2 h;Rg1组:在对照组基础上加入终浓度为10μg/mL的Rg1培养2 h;Rg1抗衰老组:在衰老造模同时加入终浓度为10μg/mL的Rg1培养2h;Rg1治疗衰老组:终浓度为100μmol/L的t-BHP培养2h后再加入终浓度为10μg/mL的Rg1继续培养2 h。MTT法、神经球计数、分化细胞计数以及衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性神经球计数分析Rg1调控NSC衰老的生物学作用,RT-PCR检测衰老相关基因p16^(1NK4a)、p21^(Cipl/Wafl)mRNA的表达。结果显示,与衰老组比较,Rg1抗衰老组和治疗衰老组NSC的增殖能力和多向分化能力显著增强;衰老特异性SA-β-Gal染色阳性神经球百分比显著降低,p16^(INK4a)、p21^(Cipl/Wafl)mRNA的表达显著下降。提示Rg1具有延缓t-BHP诱导NSC衰老的作用,其机制可能与下调p16^(INK4a)、p21^(Cipl/Wafl)的表达有关。

关键词：人参皂苷Rg1 神经干细胞衰老调控机理

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小鼠造血干细胞衰老体内模型构建及相关生物学研究

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重庆医科大学学报 2011年第4期36卷 385-388页

作者：蔡世忠周玥姜蓉杨斌王亚平重庆医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:构建小鼠造血干细胞(Homatopoietic stemcell,HSCs)衰老体内模型,并探讨其生物学特点,为延缓HSCs衰老的研究提供平台。方法:免疫磁性分选法分离、纯化雄性鼠的Sca-1+HSCs,流式细胞术鉴定分选纯度,免疫荧光检测Sca-1表达。将1×... 详细信息

目的:构建小鼠造血干细胞(Homatopoietic stemcell,HSCs)衰老体内模型,并探讨其生物学特点,为延缓HSCs衰老的研究提供平台。方法:免疫磁性分选法分离、纯化雄性鼠的Sca-1+HSCs,流式细胞术鉴定分选纯度,免疫荧光检测Sca-1表达。将1×104个雄性供体鼠Sca-1+HSCs经尾静脉移植给9Gy60Coγ射线全身辐射的雌性受体鼠。PCR检测移植后受体鼠造血细胞Y染色体性别决定(Sex-determining region of Ychromosome,Sry)基因,混合造血祖细胞集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析HSCs衰老的生物学特点;计数受体鼠脾集落形成单位(CFU-S)、测定脾脏和胸腺指数,检测受体鼠外周血指标(WBC、RBC、PLT、HCT),评价供体鼠Sca-1+HSCs在受体鼠内衰老和造血功能重建情况。结果:免疫磁性分选法得到的Sca-1+HSCs纯度达87.2%以上。雌性受体鼠的造血细胞均能检测出342 bp的Sry基因。供体鼠Sca-1+HSCs连续2次移植后,形成CFU-Mix集落数量和形成集落的细胞数明显减少;HSCs出现G1期阻滞,G0+G1期细胞比例增高,S期比例下降;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率明显增高;脾脏与胸腺指数明显降低;CFU-S形成能力下降;外周血各项指标均有下降。结论:雄性供体Sca-1+HSCs移植能有效重建受体鼠造血功能,连续尾静脉移植2次能初步建立HSCs复制性衰老的体内模型。

关键词：造血干细胞衰老体内模型连续移植生物学研究

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人参多糖对K562细胞基因表达谱的影响

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中草药 2011年第5期42卷 940-943页

作者：李建平何轩姜蓉李静左国伟雷翠蓉王亚平王建伟陈地龙重庆医科大学组织胚胎教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的利用基因表达谱芯片研究人参多糖对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法人参多糖处理K562细胞48 h后,分别提取给药组和对照组K562细胞总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用2种不同的荧光染料Cy3和Cy5进行线... 详细信息

目的利用基因表达谱芯片研究人参多糖对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法人参多糖处理K562细胞48 h后,分别提取给药组和对照组K562细胞总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用2种不同的荧光染料Cy3和Cy5进行线性扩增标记,与Illumina全基因组表达谱基因芯片杂交,采用生物信息学方法分析人参多糖处理后K562细胞基因表达谱的改变。结果共发现差异基因306个,其中上调基因220个,下调基因86个,并对其进行生物学功能分类。结论诱导肿瘤细胞分化是多基因作用的综合结果,筛选的基因对研究肿瘤发生、发展与逆转分化,以及寻找潜在的抗肿瘤药物作用靶点可能有意义。

关键词：人参多糖 K562细胞基因表达谱基因芯片抗肿瘤

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转录因子Oct4、Nanog及相关调控网络与多能干细胞特性的维持

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解剖科学进展 2011年第1期17卷 74-78页

作者：蔡世忠李芳菲王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学生理学教研室重庆400016

多能干细胞具有自我更新能力和高度增殖、多向分化的潜能。其特征的维持受到多种调控因子通过多条调控途径所形成网络的精密调节。Oct4、Nanog是调控网络中的核心因子,通过与靶基因调控区的结合选择性地抑制分化基因的表达或者激活多能... 详细信息

多能干细胞具有自我更新能力和高度增殖、多向分化的潜能。其特征的维持受到多种调控因子通过多条调控途径所形成网络的精密调节。Oct4、Nanog是调控网络中的核心因子,通过与靶基因调控区的结合选择性地抑制分化基因的表达或者激活多能性基因的表达而达到调控目的,此调控过程有时间和空间上的特异性。Oct4等也是细胞重编程不可或缺的转录因子。通过多种方法的研究各个击破网络结点上的关键因子,调控网络的调控机制自然会日渐明朗。

关键词：调控网络 Nanog Oct4 转录因子细胞特性自我更新能力分化基因多能干细胞

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大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养及成骨成脂诱导

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咸宁学院学报（医学版） 2011年第3期25卷 185-188页

作者：陈晓云刘阳生汪维伟咸宁学院基础医学院组织学与胚胎学教研室湖北咸宁437100 咸宁市第一人民医院内科重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆市干细胞与组织工程研究室

目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离、纯化、扩增的方法及诱导BMSCs成骨成脂分化,提供理想的组织工程种子细胞。方法采用贴壁筛选法分离BMSCs,通过不断传代进行纯化和扩增培养,并绘制细胞生长曲线。诱导后检测油红O染色和矿... 详细信息

目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离、纯化、扩增的方法及诱导BMSCs成骨成脂分化,提供理想的组织工程种子细胞。方法采用贴壁筛选法分离BMSCs,通过不断传代进行纯化和扩增培养,并绘制细胞生长曲线。诱导后检测油红O染色和矿化结节。结果 BMSCs在体外分离培养扩增,细胞形态为长梭形,流式检测分析P3和P5细胞表面标记物CD44、CD90为阳性,CD45为阴性。细胞生长曲线呈S形。经成脂诱导培养,脂肪的特异性油红O染色为阳性;经成骨诱导培养,形成了矿化结节。结论本实验分离培养的细胞具有BMSCs的表面标记特征和诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞的潜能,为BMSCs在组织工程中的应用提供基础理论和实验依据。

关键词：骨髓间充质干细胞成骨诱导成脂诱导

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小鼠造血干细胞体外衰老模型的构建及其相关生物学

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解剖学报 2010年第5期41卷 686-692页

作者：周玥杨斌姚欣王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过... 详细信息

目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过氧化氢(t-BHP)100μmol/L诱导Sca-1+HSCs 6h,建立HSCs衰老体外模型。采用造血祖细胞集落培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察衰老HSCs的生物学特点。DNA印迹法(Southern blotting)与TRAP-PCR SYBR Green染色法检测HSCs端粒长度和端粒酶活性。RT-PCR法检测衰老相关基因p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达水平。结果免疫磁性分选法分离、纯化的Sca-1+HSCs纯度可达(87.33±1.25)%。100μmol/L的t-BHP作用Sca-1+HSCs 6h,其体外培养形成造血祖细胞集落能力,自我更新及多向分化潜能显著低于对照组,处于G1期细胞比例增加,SA-β-gal染色阳性细胞数增加。衰老Sca-1+HSCs的端粒缩短,端粒酶活性下降,p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达水平明显增高。结论用t-BHP能建立Sca-1+HSCs体外细胞衰老模型,提示p16Ink4a-Rb通路和p19Arf-Mdm2-p53-p21Cip1/Waf1通路在t-BHP诱导Sca-1+HSCs衰老过程中发挥重要作用。

关键词：造血干细胞衰老体外模型端粒端粒酶衰老相关β-半乳糖苷酶染色流式细胞术反转录-聚合酶链反应小鼠

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人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老及其相关机制

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中华医学杂志 2010年第48期90卷 3421-3425页

作者：周玥杨斌姜蓉姚欣王亚平组织学与胚胎学教研室重庆医科大学干细胞与组织工程研究室 400016

目的探讨人参皂苷Rg1调控造血干细胞（HSC）衰老的机制,为寻找延缓HSC衰老方法提供理论指导和实验依据.方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1＋HSC后分5组：对照组、衰老组、Rg1组、Rg1治疗衰老组、Rg1延缓衰老组.β-半乳糖苷酶（SA-... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1调控造血干细胞（HSC）衰老的机制,为寻找延缓HSC衰老方法提供理论指导和实验依据.方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1＋HSC后分5组：对照组、衰老组、Rg1组、Rg1治疗衰老组、Rg1延缓衰老组.β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）培养观察Rg1延缓Sca-1＋HSC衰老的生物学作用.反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测衰老相关基因p161NK4a、p19Arf、p53、p21Cipl/Wafl mRNA的表达.Western印迹检测p16INK4a、p21 Cipl/Wafl、细胞周期蛋白（cyclin）D1、cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4、CDK2蛋白表达.结果 Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1＋HSC的SA-β-Gal染色阳性率（30.1%±2.4%,21.5%±2.8%）低于衰老组（69.5%±5.0%）;G1期细胞比例（81.4%±1.2%,78.2%±1.4%）低于衰老组（87.5%±4.0%）;生成CFU-Mix数[（8.0±2.2）个/104Sca-1＋HSC、（9.2±1.8）个/104 Sca-1＋HSC]高于衰老组[（3.0±1.6）个/104Sca-1＋HSC];Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1＋HSC的p16INK4a、p19Arf、p53、p21 Cipl/Wafl mRNA及p16INKa、p21 Cipl/Wafl、cyclinD1蛋白表达均下调（均P＜0.01）,CDK4、CDK2、cyclinE蛋白表达均上调（均P＜0.01）.Rg1延缓衰老组各检测指标均较Rg1治疗组变化明显.结论 Rg1具有延缓及治疗Sca-1＋HSC衰老的作用,p16INK4a-Rb及p19Aarf-Mdm2-p53-p21Cipl/Wafl信号通路在其中可能发挥重要作用.

关键词：人参皂苷造血干细胞细胞衰老抗衰老药(中药)

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大鼠大脑白质、皮质毛细血管的体视学定量研究

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解剖学报 2010年第3期41卷 446-451页

作者：邵伟华李琛陈林张伟唐勇重庆医科大学组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程学研究室重庆400016

目的观察大鼠大脑白质、皮质内毛细血管总长度、总体积、总表面积和平均直径。方法选5只7月龄Long-Evans大鼠。运用免疫组织化学技术及相应的体视学方法 ,计算白质、皮质内毛细血管的长度密度、体积密度﹑表面积密度和毛细血管的总长度... 详细信息

目的观察大鼠大脑白质、皮质内毛细血管总长度、总体积、总表面积和平均直径。方法选5只7月龄Long-Evans大鼠。运用免疫组织化学技术及相应的体视学方法 ,计算白质、皮质内毛细血管的长度密度、体积密度﹑表面积密度和毛细血管的总长度、总体积﹑总表面积、平均直径。结果大鼠白质由于组织处理引起的白质体积皱缩率为0.51±0.09。白质毛细血管的总长度、总体积、总表面积、平均直径依次为(30.9±6.2)m、(0.8±0.09)mm3、(5.3±0.74)cm2、(5.5±1.1)μm。皮质由于组织处理引起的体积皱缩率为0.57±0.08。皮质毛细血管的总长度、总体积、总表面积、平均直径的近似值依次为(364.8±68.0)m、(7.0±1.6)mm3、(51.6±11.7)cm2、(4.5±0.40)μm。结论本研究方法为以后同类型的研究提供了较为理想的方法学借鉴。本研究结果为将来的研究提供了大鼠大脑白质和皮质毛细血管参数的基本数值。

关键词：皮质白质毛细血管免疫组织化学体视学大鼠

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包皮成纤维细胞作为饲养层对人胚胎生殖细胞生长的影响

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解剖学报 2010年第6期41卷 876-879页

作者：黎晓莉王璐吴宏张雁关雪晶姜蓉重庆医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的以人包皮成纤维细胞为饲养层体外培养人胚胎生殖细胞,观察饲养层对其生长的影响,并对人胚胎生殖细胞进行鉴定。方法分离培养4～5岁小儿包皮成纤维细胞,取P3～P30代细胞用丝裂霉素灭活后铺板备用,酶联免疫吸附测定(ELISA)-双抗夹心... 详细信息

目的以人包皮成纤维细胞为饲养层体外培养人胚胎生殖细胞,观察饲养层对其生长的影响,并对人胚胎生殖细胞进行鉴定。方法分离培养4～5岁小儿包皮成纤维细胞,取P3～P30代细胞用丝裂霉素灭活后铺板备用,酶联免疫吸附测定(ELISA)-双抗夹心法检测其分泌物成纤维细胞生长因子(FGF)的含量;分离培养5～11周人胚胎原始生殖细胞,在不添加任何细胞因子的人包皮成纤维细胞饲养层上培养人胚胎生殖细胞;细胞化学法检测人胚胎生殖细胞碱性磷酸酶的活性,免疫细胞化学法检测其胚胎表面特异性抗原SSEA-1及SSEA-4的表达,RT-PCR法检测Oct-4的表达。结果包皮成纤维细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;P3～P30代包皮成纤维细胞上清液中FGF含量在(172.09±2.66)pg/L～(245.25±1.66)pg/L之间波动。分离培养的人胚胎生殖细胞在饲养层上可形成典型的胚胎生殖细胞集落,体外连续培养超过3代,其碱性磷酸酶活性呈强阳性,集落未分化标志检测显示SSEA-l、SSEA-4呈阳性,Oct-4表达阳性。结论用人包皮成纤维细胞作为饲养层能支持人胚胎生殖细胞的生长并维持未分化状态。

关键词：包皮成纤维细胞胚胎生殖细胞饲养层酶联免疫吸附测定-双抗夹心法免疫组织化学反转录-聚合酶链式反应人

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