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中国细胞生物学学报 2014年第7期36卷 976-982页

作者：周一青何俊琳陈雪梅王应雄刘学庆丁裕斌重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学教研室重庆400016

为研究甲基化CpG结合域蛋白2(methyl-CpG binding domain protein 2,MBD2)在围植入期小鼠子宫内膜的表达规律,通过采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)、Western blot和免疫组化技术检测未孕小鼠(d0)和不同孕天小鼠子宫MBD2的表达情况。qPCR结果显示,d0至d7的小鼠子宫内膜组织均有MBD2 mRNA表达,在d5至d7高表达。MBD2蛋白在子宫内膜的表达规律与qPCR结果相符。MBD2蛋白在孕d1到d4中度表达于腔上皮、腺上皮和基质细胞,在d5至d7基质细胞表达增强,主要表达于蜕膜区。假孕小鼠子宫内膜中,MBD2在腔上皮、腺上皮和基质细胞中中度表达,d5至d7基质细胞表达明显减弱。动物模型中,宫角注射MBD2基因反义寡聚脱氧核苷酸,可抑制MBD2的表达,降低人工诱导蜕膜化反应和蜕膜化标志物PRL的表达。MBD2在早孕小鼠子宫内膜的表达模式提示其可能参与了蜕膜化过程。

关键词：甲基化CpG结合域蛋白2 小鼠蜕膜化

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孕早期苯并(a)芘暴露对小鼠胚胎着床的影响

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重庆医科大学学报 2016年第7期41卷 675-679页

作者：沈茶何俊琳刘学庆丁裕斌高茹菲王应雄陈雪梅重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学教研室重庆400016

目的:探讨孕早期Ba P暴露对胚胎着床的影响,为进一步完善Ba P对雌性生殖功能的影响提供实验依据。方法:将60只孕鼠随机分为对照组和Ba P组,每组30只,每组再随机分成3小组,每组10只。从妊娠第1天对照组用玉米油、Ba P组用0.2 mg/(kg·... 详细信息

目的:探讨孕早期Ba P暴露对胚胎着床的影响,为进一步完善Ba P对雌性生殖功能的影响提供实验依据。方法:将60只孕鼠随机分为对照组和Ba P组,每组30只,每组再随机分成3小组,每组10只。从妊娠第1天对照组用玉米油、Ba P组用0.2 mg/(kg·d)剂量Ba P进行灌胃染毒,至妊娠的第4天(D4)、第5天(D5)、第6天(D6)处死并取材。计数小鼠胚胎着床点数目,ELISA方法检测小鼠血浆中雌激素和孕激素水平,荧光定量PCR、Western blot及免疫组织化学方法检测小鼠子宫内膜中雌激素受体-α(estrogen receptor-α,ERα)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)水平。结果:比较对照组与Ba P组的胚胎着床数,Ba P组的着床点数在妊娠D5和D6均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Ba P组血浆雌激素水平和孕激素水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),不同染毒时间的雌激素水平与孕激素水平不同,由高到低依次为妊娠D6、D5、D4,各时间点的差异均有统计学意义(P<0.05);ERα的m RNA水平在Ba P组的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),不同染毒时间ERα的m RNA水平不同,妊娠D6的表达高于妊娠D4和D5,差异有统计学意义(P<0.05),PR的m RNA水平在Ba P组的表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot和免疫组化结果也表明苯并(a)芘暴露组小鼠子宫中ERα表达量升高,PR表达量下降。Western blot和免疫组化结果也表明Ba P组小鼠子宫中ERα表达量升高,PR表达量下降。结论:Ba P可能通过影响孕鼠雌孕激素水平及PR的表达模式,最终导致胚胎着床点数的下降。

关键词：苯并(a)芘雌孕激素胚胎着床小鼠

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PI3k/Akt信号通路及MMP-2、MMP-9在正常妊娠及自然流产绒毛组织中的表达

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重庆医科大学学报 2014年第11期39卷 1511-1515页

作者：刘丽媛何俊琳刘学庆丁裕斌王应雄陈雪梅重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学教研室重庆400016

目的:检测磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinotidol 3-kinase/protein kinase B,PI3k/Akt)信号通路及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在早孕期正常妊娠和自然流产绒毛组织中的表达情况,并探讨其表达与自然流产的关系。方法:采用real-time PCR、免疫组织化学方法和Western blot技术检测20例早孕期自然流产绒毛组织与20例正常人工流产绒毛组织中PI3k、Akt、p-Akt、张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、MMP-2、MMP-9等表达情况。结果:荧光定量PCR结果显示,PI3k(P=0.000)、Akt(P=0.005)、MMP-9(P=0.000)的m RNA水平在自然流产组(SPO组)明显低于正常人工流产组(NOR组),PTEN的m RNA水平在SPO组则高于NOR组(P=0.000)。免疫组化结果显示PI3k(P=0.006)、Akt(P=0.000)、p-Akt(P=0.000)、MMP-9(P=0.000)在SPO组表达明显低于NOR组,PTEN的表达则呈现相反的趋势(P=0.000),MMP-2在SPO组与NOR组没有明显变化(P=0.092)。Western blot结果与免疫组化结果一致,PI3k(P=0.047)、Akt(P=0.011)、p-Akt(P=0.001)、MMP-2(P=0.893)、MMP-9(P=0.005)。结论:PI3k/Akt信号通路参与了早孕期自然流产的发生,可能通过影响MMP-9的表达而影响其侵袭功能。本研究对于揭示自然流产发生的分子机制具有重要意义,为临床上预防与治疗早期流产的发生提供了新的方向。

关键词：自然流产磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9

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SLP-2调控人子宫内膜基质细胞细胞系T-HESC的增殖和分化

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重庆医科大学学报 2017年第8期42卷 936-941页

作者：冯倩刘学庆张雪兰曦耿艳清陈雪梅高茹菲何俊琳王应雄丁裕斌重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学实验室重庆400016

目的:研究stomatin样蛋白2(stomatin-like protein 2,SLP-2)对人子宫内膜基质细胞系T-HESC的增殖和分化的调控作用。方法:培养子宫内膜基质细胞系T-HESC,体外诱导蜕膜化,RT-q PCR、Western blot和免疫荧光方法检测SLP-2在体外诱导蜕膜... 详细信息

目的:研究stomatin样蛋白2(stomatin-like protein 2,SLP-2)对人子宫内膜基质细胞系T-HESC的增殖和分化的调控作用。方法:培养子宫内膜基质细胞系T-HESC,体外诱导蜕膜化,RT-q PCR、Western blot和免疫荧光方法检测SLP-2在体外诱导蜕膜化模型中的表达变化以及蜕膜化标志分子催乳素(prolactin,PRL)、胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin like growth factor binding protein 1,IGFBP1)和Desmin的表达。转染特异性SLP-2干扰小RNA(si RNA),敲低SLP-2的表达,分析敲低SLP-2表达对基质细胞增殖和分化(蜕膜化)的影响。结果:体外诱导蜕膜化条件下,诱导蜕膜化标志物IGFBP1和PRL的表达明显增加;Desmin显著表达于在体外诱导蜕膜化的细胞中;SLP-2表达明显升高。在蜕膜化细胞中转染SLP-2 si RNA敲低SLP-2表达,蜕膜化行为受到显著抑制;细胞增殖标志分子CCND3表达明显下降,细胞增殖降低。结论:SLP-2的表达可影响人子宫内膜基质细胞细胞系T-HESC的增殖和分化。

关键词： Stomatin样蛋白2 胚胎植入蜕膜化子宫内膜基质细胞

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氟化钠诱导氧化应激促进大鼠子宫组织炎症反应及其作用机制

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第三军医大学学报 2015年第17期37卷 1744-1749页

作者：廖星贵李艳丽邱义稳周永江耿艳清刘学庆陈雪梅王应雄何俊琳重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学研究室重庆400016

目的通过对氟化钠染毒大鼠的炎症反应相关因子及关键信号通路分子的检测,探讨其对大鼠子宫组织细胞氧化损伤的作用机制。方法将30只雌性SD成年大鼠分为3组(10只/组),分别给予蒸馏水(对照组)、100 mg/L氟化钠溶液(100 mg/L氟化钠处理组)... 详细信息

目的通过对氟化钠染毒大鼠的炎症反应相关因子及关键信号通路分子的检测,探讨其对大鼠子宫组织细胞氧化损伤的作用机制。方法将30只雌性SD成年大鼠分为3组(10只/组),分别给予蒸馏水(对照组)、100 mg/L氟化钠溶液(100 mg/L氟化钠处理组)、200 mg/L氟化钠溶液(200 mg/L氟化钠处理组)饮用,持续染毒180 d,建立氟化钠染毒动物模型。采用Western blot、免疫组织化学法检测子宫组织炎症相关因子Cox-2、ICAM-1、TNF-α、IL-1β表达;采用ELISA对氧化应激相关分子ROS、MDA、SOD、CAT、GSH进行检测;采用Western blot测定P38、ERK、JNK、PI3K活性物质的表达。结果 2个氟化钠处理组大鼠子宫组织炎症相关因子Cox-2、ICAM-1、TNF-α、IL-1β表达量明显高于对照组(P<0.05);2个氟化钠处理组ROS、SOD、CAT、GSH明显高于对照组,而MDA明显低于对照组(P<0.05);与对照组相比,2个氟化钠处理组P38、JNK蛋白磷酸化效率增加(P<0.05),而且ERK、PI3K总蛋白及磷酸化蛋白表达水平均有增加。结论氟化钠可诱导大鼠子宫组织的氧化应激,促进炎症反应发生,MAPK(ERK、JNK、P38)和PI3K信号通路可能参与其中。

关键词：氟化钠氧化应激 P38 JNK信号通路子宫炎症反应

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苯并(a)芘通过干扰Wnt7a影响小鼠胚胎着床

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重庆医科大学学报 2017年第8期42卷 942-947页

作者：李雪妍沈茶刘学庆丁裕斌何俊琳高茹菲王应雄陈雪梅重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学研究室重庆400016

目的:苯并(a)芘(benzo(a)pyrene,Ba P)被证实是对生殖有不良影响的雌激素类似物,研究发现苯并(a)芘影响胚胎着床,本研究检测Ba P对早孕小鼠子宫中Wnt信号通路的影响,以探讨其干扰胚胎着床的机制。方法:将成年雌雄昆明鼠进行交配,次日见... 详细信息

目的:苯并(a)芘(benzo(a)pyrene,Ba P)被证实是对生殖有不良影响的雌激素类似物,研究发现苯并(a)芘影响胚胎着床,本研究检测Ba P对早孕小鼠子宫中Wnt信号通路的影响,以探讨其干扰胚胎着床的机制。方法:将成年雌雄昆明鼠进行交配,次日见阴栓记为妊娠第1天(D1)。将孕鼠随机分为玉米油对照组(n=45)和Ba P处理组(n=45),玉米油对照组从妊娠第1天开始给予玉米油灌胃,Ba P处理组则给予0.2 mg/(kg·d)的Ba P进行灌胃,直至妊娠的第4、5、6天(D4、D5、D6)分别处死,收取子宫材料,计数着床点数目,采用荧光定量PCR,免疫组化法,Western blot分别检测所收集子宫内膜材料中Wnt信号通路相关基因表达情况。结果:苯并(a)芘染毒后,引起胚胎着床数下降,差异具有统计学意义(P=0.000);荧光定量PCR显示Wnt7a m RNA水平在Ba P组较对照组表达下降,差异具有统计学意义(P=0.000);而β-catenin m RNA在Ba P组水平升高,差异具有统计学意义(P=0.002、P=0.003、P=0.011);Western blot和免疫组化也均显示Ba P染毒后Wnt7a的表达下降,β-catenin的表达有所上升。结论:苯并(a)芘可能通过干扰Wnt7a、β-catenin的表达影响小鼠胚胎着床。

关键词：苯并(a)芘小鼠胚胎着床 Wnt7a

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SF-1诱导小鼠子宫内膜基质细胞增殖及其机制的研究

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中国细胞生物学学报 2016年第11期38卷 1317-1324页

作者：牟春凤刘学庆何俊琳陈雪梅高茹菲王应雄丁裕斌重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学教研室重庆400016

该研究分离并鉴定了原代小鼠子宫内膜基质细胞(mouse endometrial stromal cell,m ESC)。过表达类固醇生成因子-1(steroidogenic factor-1,SF-1)可显著诱导该细胞的增殖能力、促进增殖相关基因PCNA(proliferating cell nuclear antigen)及PH3(phospho-histone 3)的蛋白质水平表达增高以及激活PI3K-AKT-m TOR信号通路;PI3K信号通路抑制剂LY294002和m TOR信号通路抑制剂Rapamycin等可抑制mESC中SF-1过表达所引起p AKT S473、pm TOR S2448、pp70S6K T389、p S6 S235/236和p4E-BP1 T37/46的蛋白质水平的增高。该研究初步揭示了SF-1表达与mESC增殖的相关性。

关键词： SF-1 子宫内膜基质细胞 PI3K-AKT-mTOR信号通路细胞增殖

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重庆医科大学学报 2016年第3期41卷 223-227页

作者：汪玉姮穆欣艺苏燕谢翼王应雄何俊琳刘学庆陈雪梅高茹菲重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学研究室重庆400016

目的：探讨自噬相关蛋白Atg5及P62在邻苯二甲酸二乙基己酯（diethylhexyl phthalate,DEHP）引起新生鼠卵巢卵泡发育异常这一过程中的作用。方法：将健康6-8周龄清洁级成年雌性昆明鼠随机分为对照组（玉米油）和DEHP组,每组30只,均不做... 详细信息

目的：探讨自噬相关蛋白Atg5及P62在邻苯二甲酸二乙基己酯（diethylhexyl phthalate,DEHP）引起新生鼠卵巢卵泡发育异常这一过程中的作用。方法：将健康6-8周龄清洁级成年雌性昆明鼠随机分为对照组（玉米油）和DEHP组,每组30只,均不做任何处理。成年雌鼠生产后的新生鼠分为对照组（玉米油）和DEHP组,采用腹腔注射方式,DEHP组按0.62 mg/kg浓度对新生鼠进行注射,对照组注射相同体积玉米油,从新生鼠出生第1天开始注射,每天1次,连续5 d,注射结束后收集新生鼠卵巢组织,HE染色观察卵巢各级卵泡的发育情况,q RT-PCR及Western blot检测卵泡发育标志分子GDF9及自噬相关蛋白Atg5、P62的表达情况。结果：与对照组比较,HE染色结果显示DEHP组原始卵泡数量明显减少（P=0.005）,而初级卵泡数量无明显改变（P=0.555）;q RT-PCR结果显示DEHP组新生鼠卵巢组织中卵泡发育标志分子GDF9 m RNA表达明显降低（P=0.034）,而自噬标志分子Atg5、P62 m RNA表达明显增加（P值分别为0.001、0.024）。Western blot结果显示DEHP组新生鼠卵巢中自噬相关蛋白Atg5及P62均明显增加,差异有统计学意义（P值分别为0.008、0.001）。结论：在DEHP暴露引起新生鼠卵巢卵泡发育异常这一过程中,自噬标记蛋白Atg5及P62可能发挥着重要作用。

关键词：邻苯二甲酸二乙基己酯自噬卵泡发育 Atg5 P62

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GRB7基因在早孕小鼠子宫内膜中的表达

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重庆医科大学学报 2013年第10期38卷 1149-1153页

作者：汤军李荣耿艳清周永江陈雪梅何俊琳刘学庆重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学研究室.重庆400016

目的:研究生长因子结合受体7(growth factor receptor bound 7,GRB7)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨其在胚胎着床过程中的作用。方法:分别应用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot方法检测未妊娠及妊娠早期d1～7小鼠子宫内膜... 详细信息

目的:研究生长因子结合受体7(growth factor receptor bound 7,GRB7)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨其在胚胎着床过程中的作用。方法:分别应用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot方法检测未妊娠及妊娠早期d1～7小鼠子宫内膜GRB7基因及蛋白的表达;孕3 d下午8点子宫角注射GRB7反义寡核苷酸,孕7 d观察胚泡着床数较正常组有无变化。结果:实时荧光定量PCR测得未妊娠(d0)和妊娠早期(d1～7)小鼠子宫内膜组织均有GRB7 mRNA表达,并在孕5 d达到峰值;免疫组化及Western blot分析显示GRB7蛋白在子宫内膜的表达规律与实时荧光定量PCR基本一致,孕1 d到孕4 d,GRB7蛋白主要表达部位为腔上皮、腺上皮,基质细胞少量表达,孕5 d、孕6 d,GRB7蛋白表达较之前增强,并且在基质细胞开始明显表达,孕5 d最强;孕6 d着床点GRB7蛋白高表达于初级蜕膜区,着床旁GRB7蛋白高表达于基质细胞;子宫角注射GRB7反义寡核苷酸后胚泡着床数较正常组明显减少。结论:GRB7在早孕小鼠子宫内膜中呈动态表达,提示它参与了胚胎着床的发育过程。

关键词：生长因子结合受体7 子宫内膜胚胎着床

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环状RNA在生殖和围产领域的研究进展

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重庆医科大学学报 2017年第8期42卷 976-980页

作者：张爽丁裕斌高茹菲重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学研究室重庆400016

环状RNA(circular RNAs,circ RNAs)是一类新发现的内源性非编码RNA,是RNA领域的研究热点。circ RNAs呈闭合环状结构,具有结构稳定、高度保守以及组织和发育阶段特异表达等特征。circ RNAs参与多种生物学功能,除了mi RNA海绵吸附功能,更... 详细信息

环状RNA(circular RNAs,circ RNAs)是一类新发现的内源性非编码RNA,是RNA领域的研究热点。circ RNAs呈闭合环状结构,具有结构稳定、高度保守以及组织和发育阶段特异表达等特征。circ RNAs参与多种生物学功能,除了mi RNA海绵吸附功能,更多新的功能正逐渐被发现,如调节基因转录和剪切以及翻译蛋白质等。目前已有大量研究表明,circ RNAs与疾病和发育等生理病理过程密切相关。本文重点对circ RNAs的生物学功能以及其在生殖、围产领域的研究进展进行综述。

关键词：环状RNA 生物学功能生殖围产期

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