检索结果-内蒙古大学图书馆

分析化学 2010年第12期38卷 1793-1796页

作者：丁敏王箭张晓清邓文平重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室

利用胆汁酸在氧化型辅酶I(NAD+)共存下被3α-类固醇脱氢酶(3α-HSD)催化脱氢,同时NAD+被还原为还原型辅酶I(NADH)可增强三联吡啶钌(Ru(bpy)32+)的电化学发光(ECL)信号,实现电化学发光法间接检测胆汁酸。检测池中含2.5mmol/LRu(bpy)23+,8... 详细信息

利用胆汁酸在氧化型辅酶I(NAD+)共存下被3α-类固醇脱氢酶(3α-HSD)催化脱氢,同时NAD+被还原为还原型辅酶I(NADH)可增强三联吡啶钌(Ru(bpy)32+)的电化学发光(ECL)信号,实现电化学发光法间接检测胆汁酸。检测池中含2.5mmol/LRu(bpy)23+,833U/L3α-HSD,70nmol/LNAD+,50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH8.0)。ECL强度与胆汁酸的浓度在1.0～100fmol/L范围内呈良好的线性关系,线性方程y=0.7707x+12.04(r=0.9975);检出限为0.02fmol/L;平均回收率为97.5%。本方法与临床采用的酶循环放大法有较好的相关性。

关键词：胆汁酸电化学发光酶血清

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藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响

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中国中药杂志 2008年第13期33卷 1612-1617页

作者：吕纯芳罗春丽冀慧莹赵培重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的:应用基因表达谱芯片研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响。方法:MTT法测定藏花素对T24细胞的生长抑制率,选出藏花素最佳作用时间和浓度,运用高通量的基因表达谱芯片检测藏花素作用T24细胞前后基因表达谱的... 详细信息

目的:应用基因表达谱芯片研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响。方法:MTT法测定藏花素对T24细胞的生长抑制率,选出藏花素最佳作用时间和浓度,运用高通量的基因表达谱芯片检测藏花素作用T24细胞前后基因表达谱的变化,筛选差异表达基因。RT-PCR和免疫细胞化学验证上调基因p21^(WAF1)和下调基因cyclinD1。结果:MTT实验结果显示3 mmol·L^(-1)藏花素作用T24细胞48 h的抑制率与对照组相比有显著意义(P<0.05)。基因芯片检测发现3 mmol·L^(-1)藏花素作用T24细胞48 h引起该细胞系基因表达谱广泛地改变,其中表达差异2倍以上的基因共836个,这些差异表达基因的功能涉及多个方面,最为明显的是与细胞生长调节相关的细胞周期调节基因、细胞凋亡调控基因、DNA复制相关基因等类型。RT-PCR检测其中的细胞周期调节相关基因p21^(WAF1)和cyclinD1,结果与基因芯片相符。同时免疫细胞化学结果从蛋白表达水平上佐证p21^(WAF1)和cyclinD1变化与芯片结果一致。结论:藏花素可以诱导T24细胞基因表达谱广泛的改变,并可能通过调控细胞周期相关基因的表达来抑制T24细胞的增殖。

关键词：藏花素膀胱移行细胞癌基因表达谱芯片

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大黄素对裸鼠体内K562细胞移植瘤的抑制作用及其与调控Caspase-3和Caspase-9表达的关系

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中草药 2010年第5期41卷 751-756页

作者：王春光刘北忠金丹婷王翀朱丹吴燕钟梁重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨大黄素对K562细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与Caspase-3和Caspase-9表达变化的关系。方法建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,随机分为大黄素低、中、高剂量(25、50、100mg/kg)3个实验组,以及模型组和羟基脲(120mg/kg)阳性对照... 详细信息

目的探讨大黄素对K562细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与Caspase-3和Caspase-9表达变化的关系。方法建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,随机分为大黄素低、中、高剂量(25、50、100mg/kg)3个实验组,以及模型组和羟基脲(120mg/kg)阳性对照组,每组5只,ip连续给药12d,测量各组裸鼠肿瘤体积,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色光镜和透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡情况,应用RT-PCR检测肿瘤组织中caspase-3和caspase-9mRNA表达水平。Western blotting法检测肿瘤组织中proCaspase-3和proCaspase-9蛋白的表达。结果大黄素低、中、高剂量组肿瘤相对体积(RTV)分别为5.23±0.24、4.38±0.17、3.57±0.31;与模型组(10.45±0.47)相比,大黄素处理组肿瘤体积明显缩小,具有统计学意义(P<0.01)。光镜和电镜结果表明大黄素能够诱导K562细胞发生明显的凋亡。RT-PCR结果表明不同剂量的大黄素能够引起caspase-3和caspase-9mRNA的表达上调且有剂量依赖性。与模型组相比,大黄素处理组的proCaspase-3和proCaspase-9蛋白均出现明显的下调。结论大黄素能够明显抑制人K562细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与激活Caspase-3和Caspase-9信号转导通路有关。

关键词：大黄素 K562 移植瘤裸鼠细胞凋亡 Caspase-3 Caspase-9

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血清精氨酸代琥珀酸裂解酶的测定在肝病诊断中的意义

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中华肝脏病杂志 2007年第7期15卷 521-524页

作者：俸家富陈婷梅涂植光重庆医科大学医学检验系、教育部临床检验诊断学省部共建重点实验室 400016

目的探讨血清精氨酸代琥珀酸裂解酶（ASL）对肝病的诊断效能。方法测定291例肝病患者、247例非肝病患者和32名健康对照血清ASL和ALT、AST、GGT、LDH、ALP活性及TBil浓度；其中31例肝病患者进行了病理组织学检查。结果ROC曲线显示ASL对... 详细信息

目的探讨血清精氨酸代琥珀酸裂解酶（ASL）对肝病的诊断效能。方法测定291例肝病患者、247例非肝病患者和32名健康对照血清ASL和ALT、AST、GGT、LDH、ALP活性及TBil浓度；其中31例肝病患者进行了病理组织学检查。结果ROC曲线显示ASL对判断肝病的敏感度为100．0％，特异性为91．1％（分界值=8．0U／L）；ALT和AST的敏感度为97．60%和83．8％，特异性仅分别为24．7％和28．3％（分界值=40．0U／L）。ASL在不同肝病的变化情况是肝癌〉急性肝炎〉肝硬化〉慢性肝炎；ASL浓度[（86．9±26．5）u／L]与肝病理组织学炎症活动度计分（9．83±3．36）呈正相关（r=0．417，P=0．019）。结论ASL诊断肝病的敏感度、特异性优于AST和ALT，是肝病诊断的有用指标。

关键词：丙氨酸氨基转移酶天冬氨酸氨基转移酶精氨酸代琥珀酸裂解酶

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肺炎链球菌体内诱导基因的筛选及初步鉴定

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微生物学报 2006年第4期46卷 537-541页

作者：孟江萍尹一兵张雪梅黄远帅蓝锴重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

为筛选鉴定肺炎链球菌宿主体内诱导的基因，寻找潜在的抗生素作用靶点和疫苗候选者，应用体内表达技术，以肺炎链球菌荚膜合成的关键基因galU作为体内报告基因，利用其缺陷体不能合成荚膜多糖，从而不能在宿主体内存活的特点，筛选鉴定... 详细信息

为筛选鉴定肺炎链球菌宿主体内诱导的基因，寻找潜在的抗生素作用靶点和疫苗候选者，应用体内表达技术，以肺炎链球菌荚膜合成的关键基因galU作为体内报告基因，利用其缺陷体不能合成荚膜多糖，从而不能在宿主体内存活的特点，筛选鉴定肺炎链球菌体内诱导基因。首先，把肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段（200～500bp）克隆到含有体内、体外双重报告基因（galU—lacZ）的报告载体pEVP3-galU的BlgⅡ位点，将获得的质粒库转化肺炎链球菌galU缺陷菌株，得到肺炎链球菌体内启动子诱捕文库，将此文库去感染BALB／c小鼠，经过两轮体内筛选，在涂布有X-gal的TSA血清平板上得到了165个白色菌落，对插入的随机片段进行测序及生物信息学分析，共证实15个不同的体内诱导基因片段，8个为单独的ORF，7个为含有多个ORFs的操纵子结构，它们分别参与细菌在宿主体内的定植与粘附、能量代谢、物质转运、转录调节、DNA复制与重组、细胞壁合成等，另外还包括功能不明的假想蛋白。其中部分ORFs可能与细菌毒力相关，可以作为候选疫苗和药物的靶标。

关键词：肺炎链球菌体内诱导基因体内表达技术荚膜多糖

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川楝素提取物诱导K562细胞凋亡的实验研究

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中草药 2010年第3期41卷 426-431页

作者：刘小玲王进张伶易钢何於娟重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨川楝素提取物对人白血病K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法采用MTT法检测川楝素提取物对K562细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI双标记法... 详细信息

目的探讨川楝素提取物对人白血病K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法采用MTT法检测川楝素提取物对K562细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI双标记法检测细胞的早期凋亡变化;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化;比色法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9相对活性的改变;RT-PCR检测凋亡相关基因p21、bcr/abl、H-rasmRNA表达水平的改变。结果川楝素提取物显著抑制K562细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,作用72h的IC50值为20nmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;细胞周期和Annexin V/PI双标记检测表明川楝素提取物可诱导K562细胞凋亡,并呈剂量-时间依赖性;处理组细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNAladder;处理组细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性均显著增加;p21、H-ras mRNA表达上调,bcr/abl mRNA表达下调。结论川楝素提取物对K562细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与Caspase信号途径的活化有关。

关键词：川楝素提取物 K562细胞细胞凋亡

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联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

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中草药 2011年第9期42卷 1773-1778页

作者：田文霞张曦文王晓飞唐浩党微旗罗奕孔嵌蚺陈婷梅重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(NPs)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC-NPs)。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖... 详细信息

目的探讨联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(NPs)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC-NPs)。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖,刘氏染色法检测细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,Western blotting检测与细胞周期、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白分子的变化。结果 HC-NPs可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞形态变圆,诱导细胞发生G2/M期阻滞,使细胞凋亡率明显增加(P<0.01),抑制细胞的侵袭和迁移。HC-NPs可下调磷酸化-信号转导和转录激活因子(p-STAT3)以及下游分子Cyclin D1、Survivin、Bcl-2及MMP-9的表达,上调Bax的表达。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。

关键词：联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒人乳腺癌 MDA-MB-231 凋亡侵袭迁移

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高效液相色谱-串联质谱法同时测定血清中游离和结合型胆汁酸

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分析化学 2007年第10期35卷 1506-1508页

作者：丁敏叶炼王猛邵勇重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆医科大学附属第一医院妇产科

建立了高效液相色谱-串联质谱同时测定血清中游离和结合型胆汁酸的方法。血清样品经固相萃取后,在C18色谱柱上梯度洗脱,用负离子多反应监测模式检测。15种胆汁酸在0.10100.0μmol/L的浓度范围内与响应呈良好的线性,r为0.99900.9999;检... 详细信息

建立了高效液相色谱-串联质谱同时测定血清中游离和结合型胆汁酸的方法。血清样品经固相萃取后,在C18色谱柱上梯度洗脱,用负离子多反应监测模式检测。15种胆汁酸在0.10100.0μmol/L的浓度范围内与响应呈良好的线性,r为0.99900.9999;检出限为0.0010.006μmol/L;本方法的相对标准偏差日内不超过3.0%,日间不超过6.0%;平均回收率为86.0%110.0%,适合于临床检测血清胆汁酸。

关键词：胆汁酸血清高效液相色谱串联质谱

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肺炎链球菌ply基因缺陷菌株的构建及毒力变化的初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第11期30卷 993-997页

作者：李忱炜袁军王虹贺潇董杰崔瑾姜慧张雪梅胥文春何於娟重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室400016

目的构建肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,Sp）溶血素基因（pneumolysin,ply）缺陷菌株,并对其毒力作初步研究,为进一步探索宿主对溶血素的防御应答奠定基础.方法采用长臂同源多聚酶链反应（LFH-PCR）技术将ply基因替换为红霉... 详细信息

目的构建肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,Sp）溶血素基因（pneumolysin,ply）缺陷菌株,并对其毒力作初步研究,为进一步探索宿主对溶血素的防御应答奠定基础.方法采用长臂同源多聚酶链反应（LFH-PCR）技术将ply基因替换为红霉素耐药基因（erm）后同源重组于肺炎链球菌,在含红霉素的血平板上筛选出ply缺陷菌株.用PCR鉴定缺陷菌株,观察体外缺陷菌株生长情况,并在小鼠体内感染模型研究其毒力侵袭变化.结果 PCR结果显示ply基因完全被erm基因所替代,构建ply缺陷菌成功单个菌落培养基生长情况表明ply基因缺陷并未对细菌的体外生长造成影响但在小鼠鼻腔感染模型中,缺陷菌株入血时间（6 h）明显晚于野生菌株（2 h）,且各时间点的菌量均显著低于野生菌株,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）小鼠腹膜感染模型显示野生菌株半数致死时间为3 d,而缺陷菌株半数致死时间为18d,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论采用LFH-PCR技术作基因突变完全替代ply基因,方法简便快捷 ply的缺陷不影响细菌在体外的生长,但可显著降低细菌在宿主体内的毒力和侵袭.

关键词：肺炎链球菌溶血素长臂同源多聚酶链反应毒力

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带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证

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第二军医大学学报 2010年第5期31卷 468-471页

作者：吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活... 详细信息

目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。

关键词：维甲酸受体α 核定位信号谷氨酸氨连接酶蛋白质相互作用双杂交系统技术免疫共沉淀

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