检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2009年第2期25卷 207-214页

作者：李南王非胥文春王虹罗小民朱维良尹一兵张雪梅重庆医科大学医学检验系临床生物化学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016 中国科学院上海药物研究所上海201203

对肺炎链球菌双组份系统中的组氨酸激酶YycG进行同源模建,并分析其与底物ADP的相互作用,为寻找特异性的激酶抑制剂提供了理论依据。采用同源模建的方法构建YycG蛋白的三维结构,并用ProCheck、Profile_3D软件对此结构模型的合理性进行验... 详细信息

对肺炎链球菌双组份系统中的组氨酸激酶YycG进行同源模建,并分析其与底物ADP的相互作用,为寻找特异性的激酶抑制剂提供了理论依据。采用同源模建的方法构建YycG蛋白的三维结构,并用ProCheck、Profile_3D软件对此结构模型的合理性进行验证;用Autodock4.0软件将结构模型与ADP进行自动对接,分析二者之间的相互作用。序列比对结果显示肺炎链球菌YycG蛋白与Thermotoga maritima X-ray晶体结构序列的同一性达33%;YycG模建后的结构与模板能很好的叠合;在活性口袋处的保守的氨基酸残基Asn145、Asn149、Lys152以及口袋内部的疏水残基在结合、水解底物ADP的过程中发挥重要作用。组氨酸激酶YycG的模建合理,该结构模型可作为设计抗菌药的研究起点。

关键词：肺炎链球菌双组份系统组氨酸激酶同源模建分子对接

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siRNA沉默AnnexinⅡ基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的影响

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第三军医大学学报 2009年第3期31卷 223-226页

作者：郭变琴陈婷梅文阳安重庆医科大学医学检验系临床血液教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016

目的探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默AnnexinⅡ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学特性的影响。方法体外化学合成AnnexinⅡ序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),脂质体介导转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用荧光显微镜... 详细信息

目的探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默AnnexinⅡ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学特性的影响。方法体外化学合成AnnexinⅡ序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),脂质体介导转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用荧光显微镜观察转染效率。收集siRNA干扰的细胞,RT-PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学法分别检测AnnexinⅡmRNA和蛋白的抑制水平,并采用MTT法、流式细胞术测定细胞增殖能力和细胞周期的变化,Millicell小室测定细胞侵袭、迁移能力的变化。结果AnnexinⅡ-siRNA能有效抑制AnnexinⅡmRNA和蛋白的表达(P<0.05);经siRNA干扰后的细胞,细胞增殖能力显著减低(P<0.05);G0/G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少(P<0.05);细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05)。结论采用siRNA干扰AnnexinⅡmRNA和蛋白表达后,能有效逆转乳腺癌细胞的某些恶性生物学特点,表明AnnexinⅡ与乳腺癌的发生、发展及转移有一定的关系。

关键词： RNA干扰乳腺癌 AnnexinⅡ基因细胞增殖细胞周期侵袭转移

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CTP-OD-HA融合蛋白的原核表达及其活性鉴定

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中国生物制品学杂志 2009年第2期22卷 115-119页

作者：刘钉宾黄世峰曾建明袁颖陶昆温健萍曹唯希黄宗干冯文莉重庆医科大学医学检验系临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学临床医学系重庆400016 Canadian Blood Services Canada 重庆医科大学临床学院血液科重庆400016

目的构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位。方法分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a... 详细信息

目的构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位。方法分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a(+)质粒,构建重组原核表达质粒pCTP-OD-HA,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的蛋白回收和FITC标记后,将FITC-CTP-OD-HA融合蛋白作用于K562细胞,观察其转导活性及细胞定位。结果重组原核表达质粒pCTP-OD-HA经酶切及测序鉴定,证明构建正确。37℃,1 mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的35%,纯化后纯度达95%以上。FITC-CTP-OD-HA融合蛋白在K562细胞中具有高转导活性和显著的胞浆定位特性。结论已成功构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,并高效表达了目的蛋白,为进一步研究其在CML信号转导通路中的作用,阐明CML的发病机制及探讨蛋白肽在CML中的治疗策略奠定了基础。

关键词：胞浆转导肽寡聚化区域血凝素慢性粒细胞白血病原核表达转导活性胞浆定位

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钟基因Per2对白血病K562细胞增殖、分化、凋亡的影响及其机制研究

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第三军医大学学报 2009年第4期31卷 301-306页

作者：孙成铭黄世峰罗红伟刘钉宾田文君朱喜丹冯文莉涂植光温健萍黄宗干重庆医科大学医学检验系临床血液学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆市重点实验室 Canadian Blood Services Hamilton 重庆医科大学附属第一医院血液科重庆400016

目的研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏染色... 详细信息

目的研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏染色观察细胞形态,台盼蓝拒染法和MTT法检测K562细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡,电镜观察细胞凋亡,RT-PCR及Western blot方法检测该细胞株中增殖、凋亡相关基因p53、cyclin B1和c-myc等的表达。结果筛选到稳定表达Per基因的稳定表达细胞株K562/Per2细胞,与空载体转染组及未处理对照组细胞相比,K562/Per2细胞体积缩小,但是分化不明显;台盼蓝拒染法和MTT实验发现Per2抑制细胞生长与增殖能力;流式细胞仪检测周期结果K562/Per2细胞中G2期细胞增多[转染组(36.1±5.5)%,空载组(12.5±2.9)%,未处理对照组(9.7±2.3)%,P<0.05],凋亡检测显示转染组细胞凋亡明显增加[14.8%P<0.05];电镜结果显示染色质浓集、断裂,核固缩和凋亡小体;RT-PCR及Western blot显示Per2明显上调p53基因的mRNA和蛋白表达,而抑制cyclin B1、c-myc基因mR-NA和蛋白的表达。结论钟基因Per2能抑制K562细胞的生长和增殖,并诱导其发生凋亡,但对分化无明显作用。其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控并阻止细胞周期进程来实现的。

关键词：钟基因增殖凋亡细胞周期节律调节

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组氨酸激酶(YycG)在筛选肺炎链球菌抑制剂中的应用

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中国生物工程杂志 2009年第3期29卷 25-29页

作者：李南王非牛司强王虹李有强尹楠林张雪梅朱维良尹一兵胥文春重庆医科大学医学检验系临床生物化学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 中国科学院上海药物研究所上海201203

为了获得具有体外活性的肺炎链球菌组氨酸激酶YycG并利用其筛选寻找新的抑制剂。原核表达组氨酸激酶YycG的激酶功能域,经SDS-PAGE,Western blot鉴定及镍层析柱纯化后,采用激酶试剂盒检测其激酶活性;利用对其激酶活性的抑制作用从105种... 详细信息

为了获得具有体外活性的肺炎链球菌组氨酸激酶YycG并利用其筛选寻找新的抑制剂。原核表达组氨酸激酶YycG的激酶功能域,经SDS-PAGE,Western blot鉴定及镍层析柱纯化后,采用激酶试剂盒检测其激酶活性;利用对其激酶活性的抑制作用从105种候选化合物中筛选有效的抑制剂,并通过实验验证抑制剂的抗菌作用。原核表达得到约35kDa的目的蛋白激酶域片段YycG′,其纯度达95%,并具有体外水解ATP的激酶活性;利用其活性筛选得到数种不同抑制效果的小分子化合物,且体外验证具有较好的抑菌效果。通过肺炎链球菌组氨酸激酶YycG活性筛选找到的小分子抑制剂可为进一步研发与该菌相关的药物或消毒剂提供基础。

关键词：组氨酸激酶蛋白纯化酶活性体外筛选

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高效液相色谱-串联质谱法测定妊娠肝内胆汁淤积患者血清牛磺结合型胆汁酸

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重庆医科大学学报 2009年第6期34卷 732-734页

作者：邓文平王文娟邵勇邓丹丁敏重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆医科大学公共卫生学院卫生统计教研室重庆400016

目的:研究妊娠肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)患者血清中牛磺结合型胆汁酸的变化。方法:收集ICP及ICP伴糖尿病、ICP伴病毒性肝炎患者和正常孕妇血清,经固相萃取,采用高效液相色谱-串联质谱(Highperfor-manc... 详细信息

目的:研究妊娠肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)患者血清中牛磺结合型胆汁酸的变化。方法:收集ICP及ICP伴糖尿病、ICP伴病毒性肝炎患者和正常孕妇血清,经固相萃取,采用高效液相色谱-串联质谱(Highperfor-mance liquid chromatography-tendem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)法测定牛磺结合型胆汁酸的含量。结果:ICP及ICP伴糖尿病、ICP伴病毒性肝炎患者血清中牛磺胆酸(Taurocholicacid,TCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)、牛磺脱氧胆酸(Taurodeoxycholic acid,TDCA)分别比正常孕妇有10倍、5倍和3倍以上的显著性增高(P<0.01)。ICP及ICP伴糖尿病、ICP伴病毒性肝炎三组间TCA和TCDCA的差异均有显著性(P<0.05)。结论:ICP患者有特征的血清牛磺结合型胆汁酸变化。

关键词：胆汁酸血清妊娠肝内胆汁淤积症高效液相色谱串联质谱

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HYAL2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

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第四军医大学学报 2009年第23期30卷 2808-2811页

作者：周敏周琦李少林唐良萏赵迎泽重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016 重庆市肿瘤研究所重庆400016 重庆医科大学放射医学教研室重庆400016 重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术抑制人卵巢癌SKOV3细胞株HYAL2基因的表达,探讨siRNA-HYAL2对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:将靶向HYAL2的siRNA及对照分别转染人卵巢癌SKOV3细胞株,RT-PCR测定HYAL2基因mRNA表达情况,MTT法检测S... 详细信息

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术抑制人卵巢癌SKOV3细胞株HYAL2基因的表达,探讨siRNA-HYAL2对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:将靶向HYAL2的siRNA及对照分别转染人卵巢癌SKOV3细胞株,RT-PCR测定HYAL2基因mRNA表达情况,MTT法检测SKOV3细胞增殖,FCM检测细胞周期变化,构建Transwell小室体外侵袭模型观察其对细胞侵袭能力的影响.结果:转染siRNA-HYAL248 h后HYAL2基因mRNA表达水平明显降低,细胞存活率下降(P<0.05),S期细胞百分比降低、G0/G1期细胞百分比升高(P<0.05);转染24 h后平均穿膜细胞数减少(P<0.05).结论:siRNA-HYAL2能特异性抑制HYAL2的mRNA表达水平,HYAL2基因沉默后,卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力降低,HYAL基因可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点.

关键词：卵巢肿瘤 RNA干扰透明质酸酶增殖侵袭

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真核蛋白质中G-patch结构域的结构和功能研究

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生命的化学 2008年第1期28卷 47-50页

作者：雷燕张彦重庆医科大学医学检验系临床生化教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

G-patch是广泛存在真核生物蛋白质中的保守结构域,含有六个高度保守的甘氨酸残基,推测它是一种RNA结合结构域,其功能与RNA代谢有关。

关键词： G—patch RNA结合结构域

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核磷蛋白A型突变体对髓性白血病细胞系增殖的影响

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临床检验杂志 2008年第1期26卷 20-23页

作者：骆展鹏何鹏张伶杨松钟晓明高玉洁重庆医科大学医学检验系临床血液教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016

目的研究核磷蛋白A型突变体基因转染对人髓性白血病细胞系体外增殖的影响。方法构建含核磷蛋白A型突变基因(NPM-mA)的真核表达质粒pEGFPC1-NPM-mA,选择NPM-mA阴性、抑癌基因p14ARF有无缺失的两株人髓性白血病细胞KG-1a和K562作为靶细胞,... 详细信息

目的研究核磷蛋白A型突变体基因转染对人髓性白血病细胞系体外增殖的影响。方法构建含核磷蛋白A型突变基因(NPM-mA)的真核表达质粒pEGFPC1-NPM-mA,选择NPM-mA阴性、抑癌基因p14ARF有无缺失的两株人髓性白血病细胞KG-1a和K562作为靶细胞,将pEGFPC1-NPM-mA重组质粒和pEGFPC1空质粒分别转染白血病细胞,以未转染组为对照。用RT-PCR和免疫组化来分析转染细胞目的基因mRNA和蛋白质的表达。采用台盼蓝拒染法计数活细胞,绘制转染前后生长曲线,观察细胞体外生长的改变。结果转染后的两种白血病细胞株表达NPM-mA mRNA,胞浆内NPM-mA蛋白阳性,符合NPM突变蛋白胞质移位的特点。细胞生长曲线显示,转染NPM-mA质粒的KG-1a细胞较空质粒转染和未转染组细胞生长速度明显加快,而转染NPM-mA质粒的K562细胞则较对照组细胞生长明显受抑制(P<0.05)。结论NPM-mA基因稳定转染可影响白血病细胞的增殖活性,在无ARF缺失时NPM-mA突变体可促进白血病细胞体外生长。

关键词：白血病核磷蛋白基因突变

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RNAi重组体抑制白血病K562细胞系中NPM1基因的表达

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第三军医大学学报 2008年第10期30卷 938-941页

作者：何鹏骆展鹏张伶杨松钟晓明高玉洁重庆医科大学医学检验系临床血液学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016

目的构建核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin1,NPM1)特异性的RNAi真核表达载体,观察对白血病K562细胞系NPM1表达的抑制作用。方法采用RT-PCR检测白血病细胞系(THP1和K562)和急性髓系白血病(AML)细胞NPM1mRNA水平。设计合成2条针对NPM1基因并... 详细信息

目的构建核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin1,NPM1)特异性的RNAi真核表达载体,观察对白血病K562细胞系NPM1表达的抑制作用。方法采用RT-PCR检测白血病细胞系(THP1和K562)和急性髓系白血病(AML)细胞NPM1mRNA水平。设计合成2条针对NPM1基因并具有小发夹结构的DNA序列,经退火形成互补双链,再克隆至载体pGenSil-1中构建含NPM1的RNAi重组体,经酶切及测序鉴定后通过脂质体转染K562细胞,同时设立pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组。采用RT-PCR检测各组转染细胞中NPM1的mRNA水平。结果白血病细胞系和AML细胞均高表达NPM1 mRNA。针对人NPM1基因的RNAi重组体构建成功,并能够稳定转染K562细胞,导致白血病细胞NPM1mR-NA相对表达量下降64%,而pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组未能下调NPM1表达。结论白血病细胞高表达NPM1基因,其mRNA表达水平能够被靶向NPM1的RNAi重组体特异性地下调。

关键词：核仁磷酸蛋白1 RNA干扰白血病 K562细胞

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