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β2微球蛋白-接头蛋白2-人类白细胞抗原A24(β2m-linker 2-HLA A24)蛋白的生物信息学分析、真核表达与鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2020年第5期36卷 398-403页

作者：高雯琬陈思吟徐敏陶崑重庆医科大学基础医学院免疫教研室重庆400016

目的应用生物信息学方法对β2微球蛋白-接头蛋白2-人类白细胞抗原A24(β2m-linker 2-HLA A24)蛋白进行结构、功能预测分析,并对该蛋白进行真核表达与纯化。方法运用在线蛋白质分析软件ProtParam预测β2m-linker 2-HLA A24蛋白理化性质;... 详细信息

目的应用生物信息学方法对β2微球蛋白-接头蛋白2-人类白细胞抗原A24(β2m-linker 2-HLA A24)蛋白进行结构、功能预测分析,并对该蛋白进行真核表达与纯化。方法运用在线蛋白质分析软件ProtParam预测β2m-linker 2-HLA A24蛋白理化性质;磷酸化位点预测软件NetPhos和蛋白质二级结构预测软件SOPMA分析其磷酸化位点和二级结构;并利用蛋白质结构模型预测工具SWISS-MODEL建立三级结构模型。构建含组氨酸标签(His tag)的重组质粒pcDNA3.4/β2m-linker 2-HLA A24-His tag,在Expi293F细胞表达,经镍柱亲和层析获得β2m-linker 2-HLA A24蛋白;采用SDS-PAGE、Western blot、间接ELISA验证蛋白的纯度和性质。结果β2m-linker 2-HLA A24蛋白含有44个磷酸化位点,属于亲水性蛋白,二级结构以无规卷曲为主,并成功构建三级结构模型;成功构建pcDNA3.4/β2m-linker 2-HLA A24-His tag重组质粒,并在Expi293F细胞表达系统中获得可溶性表达。结论成功构建β2m-linker 2-HLA A24蛋白,生物信息学结果显示该蛋白具备与抗原肽结合并激活T细胞的功能。为后续联合使用该蛋白与抗原肽激活抗原特异性CD8^+T细胞实验奠定了基础。

关键词： β2微球蛋白-接头蛋白2-人类白细胞抗原A24(β2m-linker 2-HLA A24) 生物信息学真核表达

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大麻素受体1通过调控星形胶质细胞参与抑郁症发病机制的研究进展

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中国体视学与图像分析 2021年第4期26卷 370-381页

作者：黄杜娟罗艳敏唐静肖倩梁芯秦露唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学生理学教研室重庆400016 重庆医科大学放射医学教研室重庆400016 重庆医科大学病理学与病理生理学教研室重庆400016

抑郁症是常见的神经精神疾病之一,因其高患病率、复发率和自杀率而受到广泛关注。以往研究认为,星形胶质细胞在抑郁症病理生理过程中发挥重要功能,但星形胶质细胞参与抑郁症发病的具体机制尚不完全清楚。内源性大麻素系统与神经精神疾... 详细信息

抑郁症是常见的神经精神疾病之一,因其高患病率、复发率和自杀率而受到广泛关注。以往研究认为,星形胶质细胞在抑郁症病理生理过程中发挥重要功能,但星形胶质细胞参与抑郁症发病的具体机制尚不完全清楚。内源性大麻素系统与神经精神疾病密切相关,尤其是在焦虑和抑郁等情感障碍的治疗中发挥着重要作用。大麻素受体1(cannabinoid receptor type 1,CB1R)作为内源性大麻素系统中的重要组成部分,其在抑郁症中的作用受到广泛关注。研究发现,CB1R可表达于星形胶质细胞,其可能通过调节星形胶质细胞的功能活动来参与抑郁症的发生、发展。因此,本文旨在回顾内源性大麻素系统的组成、CB1R和星形胶质细胞在治疗抑郁症中的作用、CB1R参与调节星形胶质细胞功能的研究进展进行综述。

关键词：抑郁症大麻素受体1 星形胶质细胞

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基于生物信息学分析的肝癌核心基因的筛选及验证

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基因组学与应用生物学 2021年第2期40卷 867-877页

作者：李怡敏汪洋袁琳 Nur Fazleen Binti Idris 黄国旺涂增重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 西安市第一医院西安710000

本研究基于GEO数据库,选取由慢性乙型肝炎诱导的肝细胞癌芯片数据GSE121248为研究对象,利用GEO_(2)R软件分析数据,筛选出差异表达基因,利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG pathway富集分析。利用STRING数据库构建PPI网络,分析筛选核心基... 详细信息

本研究基于GEO数据库,选取由慢性乙型肝炎诱导的肝细胞癌芯片数据GSE121248为研究对象,利用GEO_(2)R软件分析数据,筛选出差异表达基因,利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG pathway富集分析。利用STRING数据库构建PPI网络,分析筛选核心基因。利用GEPIA对核心基因的表达进行验证,Kaplan Meier Plotter在线分析工具对核心基因与患者生存情况的相关性进行验证。通过上述方法筛选出309个DEGs,其中上调基因94个,下调基因215个。差异基因功能分析显示上调的DEGs主要参与细胞周期和卵母细胞减数分裂通路等途径,下调的DEGs则在补体和凝血级联、代谢途径以及咖啡因代谢途径富集。筛选出15个具有高度关联性的核心基因(BUB1,BUB1B,BIRC5,CCNB1,CCNB2,CDC20,CDK1,KIF-20A,MAD2L1,NCAPG,ZWINT,PBK,BTL,TTK和NUSAP1),它们与肝癌患者的总体生存率具有明显相关性,并为其构建了miRNA调控网络。本研究通过生物信息学方法有效分析了肝细胞癌发生、发展相关的差异表达基因,筛选出15个核心基因,分析其生物学相关功能,以期探索肝细胞癌发病机制,并为临床诊断标志物的改进以及筛选提供一定的理论基础。

关键词：肝癌差异表达基因生物信息学

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关节软骨微环境的物质输运研究进展

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重庆医科大学学报 2021年第3期46卷 263-267页

作者：窦霄云裴启霖饶习耘王彬重庆医科大学生命科学研究院医学实验技术教研室重庆400016

关节软骨是最常见且研究最多的一种透明软骨;其软骨细胞的物质输运主要由扩散和对流2种方式完成。在关节软骨的胞外基质内,生物活性分子的扩散和对流输运在组织生理调节和细胞生物学响应中起到极为重要的作用。近年来,关节软骨与软骨下... 详细信息

关节软骨是最常见且研究最多的一种透明软骨;其软骨细胞的物质输运主要由扩散和对流2种方式完成。在关节软骨的胞外基质内,生物活性分子的扩散和对流输运在组织生理调节和细胞生物学响应中起到极为重要的作用。近年来,关节软骨与软骨下骨的交互作用备受关注;其交互作用在骨关节炎的发生发展中不容忽视。本文主要对关节软骨内、关节软骨与软骨下骨间物质输运的实验研究进展进行综述,旨在为研究关节软骨微环境的生理病理作用提供一定参考,并为临床治疗骨关节炎提供一定的新思路。

关键词：关节软骨软骨细胞软骨下骨钙化软骨物质输运

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环境污染物暴露对儿童免疫系统发育的影响

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广西医科大学学报 2024年第11期41卷 1530-1537页

作者：霍霞谢博曾志俊徐锡金暨南大学环境与气候学院环境医学与发育毒理学实验室广州511443 暨南大学第一附属医院环境医学与发育毒理学实验室广州510630 重庆医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室重庆400016 汕头大学医学院环境医学与发育毒理学实验室汕头515041 汕头大学医学院细胞生物学与遗传学教研室汕头515041

环境污染物的暴露会导致炎症因子释放和免疫功能受损。本文基于粗放式电子垃圾拆解污染现场,通过检测重金属、有机污染物、大气污染物等环境污染物内、外暴露水平,儿童外周血炎症细胞、细胞因子和接种I类疫苗后血清特异性抗体浓度等免... 详细信息

环境污染物的暴露会导致炎症因子释放和免疫功能受损。本文基于粗放式电子垃圾拆解污染现场,通过检测重金属、有机污染物、大气污染物等环境污染物内、外暴露水平,儿童外周血炎症细胞、细胞因子和接种I类疫苗后血清特异性抗体浓度等免疫相关指标,探讨环境污染物暴露对儿童免疫系统发育的影响及其健康风险。结果发现,粗放式电子垃圾拆解区各类污染物处于较高水平,长期污染物暴露可造成儿童机体呈现慢性低度炎症状态,疫苗接种所产生的特异性抗体滴度较低且与污染物暴露水平负相关,儿童黏膜免疫系统受损,感冒、腹泻等呼吸、消化系统病症的发生频率增加,儿童免疫功能的变化与年龄、性别、营养状况和复合暴露有关。由于机体低度炎症是衰老和慢性疾病的重要因素,也是各类器官系统损伤和疾病发生的主要诱发因素,随着年龄的增长,罹患心血管疾病、糖尿病、神经退行性疾病和自身免疫性疾病等慢性疾病的发病风险不断加大。研究提示,环境污染物暴露可通过干扰儿童期免疫系统的正常发育,增加成年后罹患相关疾病的风险。这些研究可为制定针对性的疫苗接种政策和慢性疾病的早期防控提供科学依据。

关键词：污染物暴露免疫毒理慢性低度炎症儿童健康

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创伤性非阻塞性肠系膜缺血1例及文献复习

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临床急诊杂志 2021年第3期22卷 212-215页

作者：李洪超田俊英蒋东坡敬慧丹陆军特色医学中心重症医学科重庆400010 重庆医科大学外国语学院医学英语教研室

非阻塞性肠系膜缺血(non-occlusive mesenteric ischemia,NOMI)是一种由于肠壁缺血、炎症和梗死等情况引起的急性肠系膜缺血(acute mesenteric ischaemia,AMI),占急性肠系膜缺血的20%~30%,病死率超过70%[1-2]。因NOMI临床罕见,表现不典型,且常合并其他全身严重疾病,导致早期诊断困难,常因肠坏死而最终导致死亡。我们最近收治1例创伤后发生的NOMI,救治过程曲折,现报道如下。

关键词：非阻塞性肠系膜缺血休克升压药肠坏死

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三氧化二砷通过下调TET2促进Nanog甲基化并抑制胚胎干细胞向中胚层分化

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解剖科学进展 2023年第2期29卷 149-152,156页

作者：罗春燕刘婵杜凤卢思宇李春莉重庆青年职业技术学院健康医学院康复教研室重庆400712 重庆医科大学生命科学研究院重庆400046

目的研究三氧化二砷(ATO)调节胚胎干细胞(ESC)的中胚层分化和分化相关基因的表达。方法构建10-11易位2蛋白(TET2)的敲低慢病毒载体(shTET2)和过表达慢病毒载体(pVd-TET2),阴性对照分别为shNC和pVd-null,并转染培养的ESC细胞(CGR8)。使用... 详细信息

目的研究三氧化二砷(ATO)调节胚胎干细胞(ESC)的中胚层分化和分化相关基因的表达。方法构建10-11易位2蛋白(TET2)的敲低慢病毒载体(shTET2)和过表达慢病毒载体(pVd-TET2),阴性对照分别为shNC和pVd-null,并转染培养的ESC细胞(CGR8)。使用ATO联合pVdTET2处理CGR8。细胞分为对照组、ATO、shNC、shTET2、ATO+pVd-null、ATO+pVd-TET2。Western blot检测以上各组ESC干性蛋白Nanog、Oct4、Rex-1,分化相关蛋白AFP、cleaved-CASP3、PARP-1(p85),中胚层标志物APOA1、EOMES,及外胚层标志物PAX6、TFAP2B、ZIC1的表达量。免疫缺陷小鼠体内注射ATO、shNC、shTET2处理的CGR8细胞,10周后,免疫组织荧光法检测小鼠畸胎瘤组织中Nanog的阳性率。结果ATO抑制CGR8细胞的增殖率,增加Nanog甲基化水平,上调ESC干性蛋白和外胚层标志物的表达,下调TET2以及分化相关蛋白和中胚层标志物的表达量(均P<0.05)。在CGR8细胞中沉默TET2后表现出于ATO一致的结果。然而,与ATO+pAd-null组比,ATO+pVd-TET2组降低Nanog甲基化水平,下调ESC干性蛋白和外胚层标志物的表达,上调TET2以及分化相关蛋白和中胚层标志物的表达量(均P<0.05)。ATO和shTET2细胞都抑制体内畸胎瘤中Nanog的标记的中胚层分化(均P<0.05)。结论ATO通过抑制TET2促进Nanog甲基化并抑制中胚层的分化。

关键词：三氧化二砷胚胎干细胞中胚层分化 TET2 甲基化

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高三尖杉酯碱通过下调IRS4蛋白质的表达抑制黑色素瘤维罗非尼耐药细胞周期和增殖

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第8期36卷 970-976页

作者：黄世莹曾娣张滔唐加峰杜玉梅连瑞李静陈地龙重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016 重庆医科大学公共卫生与管理学院卫生检验学教研室重庆400016 重庆三峡医药高等专科学校重庆404120

黑色素瘤是一种死亡率极高的恶性肿瘤。近年来,其发病率逐年上升且耐药问题日渐突出。因此,如何克服耐药提高治疗效果是目前急需解决的问题。本文对高三尖杉酯碱对黑色素瘤维罗非尼耐药细胞A375R的作用及其机制进行初步探究。采用CCK-8... 详细信息

黑色素瘤是一种死亡率极高的恶性肿瘤。近年来,其发病率逐年上升且耐药问题日渐突出。因此,如何克服耐药提高治疗效果是目前急需解决的问题。本文对高三尖杉酯碱对黑色素瘤维罗非尼耐药细胞A375R的作用及其机制进行初步探究。采用CCK-8法检测发现,维罗非尼对黑色素瘤细胞A375和A375R的半数抑制浓度(IC50)分别为0.94μmol/L和49.09μmol/L,其耐药倍数为52.22倍,证明A375R具有耐药性,可进行后续实验;高三尖杉酯碱作用于A375R细胞24、48、72 h后的IC50分别为18.57 ng/mL、9.88 ng/mL、9.23 ng/mL,说明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性。克隆形成实验显示与对照组相比,给予高三尖杉酯碱5、10、20 ng/mL,作用24 h,克隆形成率分别为52.18%、29.72%、2.36%,表明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的克隆形成。流式细胞术检测显示,G0/G1期细胞由正常对照组的38.94%增加至55.05%,细胞阻滞在G0/G1期。蛋白质印迹结果显示,与A375细胞相比,A375R细胞中胰岛素受体底物4(IRS4)、p-Akt蛋白质表达水平上调,使用高三尖杉酯碱能下调A375R中IRS4、p-Akt、细胞周期蛋白E1、CDK2蛋白质的表达水平。以上结果表明,高三尖杉酯碱可能通过下调IRS4蛋白表达抑制PI3K/Akt通路的激活,使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制黑色素瘤耐药细胞的增殖。

关键词：高三尖杉酯碱黑色素瘤耐药胰岛素受体底物4 细胞周期

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^18F-FDG PET/CT SUVmax值对弥漫大B细胞淋巴瘤患者R-CHOP治疗生存预后分析

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第三军医大学学报 2020年第17期42卷 1693-1698页

作者：雷成明王丽丹李文波黄颖邓熙牛梦达彭志平重庆医科大学附属第一医院核医学科重庆400016 重庆医科大学基础医学院放射医学教研室重庆400016

目的探讨R-CHOP治疗前^18F-脱氧葡萄糖(^18F-fluorodeoxy glucose,^18F-FDG)正电子发射计算机断层扫描(positron emission tomography/computed tomograph,PET/CT)检查最大标准摄取值(maximum standard uptake value,SUVmax)对弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者生存预测价值。方法收集重庆医科大学附属第一医院2015-2019年在R-CHOP治疗前进行^18F-FDG PET/CT检查的76例DLBCL患者的临床资料,应用R-Studio软件对DLBCL患者的年龄、性别、^18F-FDG PET/CT显像的SUVmax值以及免疫学标志物和免疫分型等进行单因素及多因素预后分析;根据SUVmax值将76例DLBCL患者分为SUVmax≤10组和SUVmax>10组,采用χ^2检验比较两组间年龄、性别、临床分期、B症状、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、IPI评分方面的差异。结果单因素和多因素预后分析结果均显示,年龄、SUVmax、IPI评分均为DLBCL患者的预后影响因素。相对危险度(relative risk,RR)分别为RR(>60岁/≤60岁)=12.56(95%CI:3.32~47.54),RR(SUVmax值>10/SUVmax值≤10)=3.11(95%CI:1.04~9.34),RR(>2分/≤2分)=5.67(95%CI:1.09~29.60)。免疫学标志物CD10、BCL-6、MUM-1的表达以及免疫学分型与患者预后差异无统计学意义(P>0.05)。SUVmax≤10组和SUVmax>10组在年龄、分期等各临床指标之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论治疗前^18F-FDG PET/CT显像的SUVmax值对DLBCL患者R-CHOP方案治疗后生存预测有一定临床指导意义。

关键词： ^18F-FDG PET/CT SUVmax 弥漫大B细胞淋巴瘤 R-CHOP治疗 Kaplan-Meier评估

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缺氧条件下胶质瘤分泌的外泌体通过JAK/STAT3信号通路促进胶质瘤干细胞迁移

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第三军医大学学报 2020年第4期42卷 392-400页

作者：程玥叶秀峰重庆医科大学基础医学院病理学教研室

目的探讨胶质瘤细胞在缺氧条件下分泌的外泌体对胶质瘤干细胞迁移的作用。方法超高速离心法提取缺氧和常氧条件下胶质瘤细胞分泌的外泌体,采用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)、Western blot检测等方法对外泌体进行鉴定;用DIO染... 详细信息

目的探讨胶质瘤细胞在缺氧条件下分泌的外泌体对胶质瘤干细胞迁移的作用。方法超高速离心法提取缺氧和常氧条件下胶质瘤细胞分泌的外泌体,采用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)、Western blot检测等方法对外泌体进行鉴定;用DIO染料标记外泌体,荧光显微镜观察胶质瘤干细胞能否摄取外泌体。将PBS(空白组)、常氧(20%O2,常氧组)和缺氧(1%O2,缺氧组)条件下提取的外泌体与胶质瘤干细胞共培养,CCK-8法测定胶质瘤干细胞增殖情况,Transwell实验检测胶质瘤干细胞迁移能力变化,Western blot检测JAK/STAT3通路蛋白磷酸化水平的改变。结果在胶质瘤干细胞的胞质中检测到外泌体携带的荧光染料DIO。CCK-8结果显示:提取的外泌体以不同浓度(浓度梯度依次为1、5、10、20、40μg/mL)处理不同时间(12、24、48、72 h)后,常氧组和缺氧组胶质瘤干细胞的细胞活力差异无统计学意义。与空白组和常氧组比较,缺氧组提取外泌体共培养组的胶质瘤干细胞迁移能力显著提高(P<0.05),JAK/STAT3通路蛋白磷酸化水平也显著增加(P<0.05)。结论胶质瘤细胞在缺氧条件下分泌的外泌体部分通过提高JAK/STAT3通路磷酸化水平促进胶质瘤干细胞迁移。

关键词：外泌体胶质瘤干细胞缺氧细胞迁移 JAK/STAT3

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