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Sox2下调表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞β-catenin与转录中介因子γ的影响

第三军医大学学报 2016年第1期38卷 55-61页

作者：李雄武张徽柳满然重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心病理学教研室重庆400016

目的下调乳腺癌MDA-MB-231细胞Sox2基因表达,观察对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响以及信号因子β-catenin和TIF1γ表达的影响。方法将MDA-MB-231细胞分为重组质粒转染组(转染Sox2-shRNA干扰载体)、阴性对照组(转染p Mafic7.1-shRNA-NC质粒... 详细信息

目的下调乳腺癌MDA-MB-231细胞Sox2基因表达,观察对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响以及信号因子β-catenin和TIF1γ表达的影响。方法将MDA-MB-231细胞分为重组质粒转染组(转染Sox2-shRNA干扰载体)、阴性对照组(转染p Mafic7.1-shRNA-NC质粒)、空白对照组(未经处理的MDA-MB-231细胞,n=6),并将shRNA-Sox2-1瞬时转入乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western blot检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中Sox2蛋白表达水平,FCM检测细胞凋亡的情况,Transwell检测细胞的侵袭能力,MTS检测细胞活力和增殖能力。另外,采用Western blot和免疫组化检测靶向抑制Sox2对信号因子β-catenin和TIF1γ蛋白的表达与分布。结果成功构建重组载体p Mafic7.1-shRNA-Sox2。与空白对照组(未转染组)和阴性对照组(转染p Mafic7.1-shRNA-NC)相比,p Mafic7.1-shRNA-Sox2转染至MDA-MB-231细胞后,Sox2蛋白的表达水平明显下调(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞的侵袭能力、活力和增殖能力均明显下降(P<0.05)。与空白对照组(0.79±0.07)和阴性对照组(0.74±0.10)相比,重组质粒转染组β-catenin(0.15±0.04)蛋白的表达水平明显下调(P<0.05);同样,与空白对照组(0.74±0.05)和阴性对照组(0.64±0.07)相比,重组质粒转染组TIF1γ蛋白(0.11±0.01)的表达水平明显下调(P<0.05)。结论靶向沉默Sox2基因能促进细胞凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭,其作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路与TIF1γ调控有关。

关键词：乳腺癌 RNA干扰凋亡侵袭 Sox2 β-catenin TIF1γ

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注射用核糖核酸Ⅱ上调p53诱导人白血病细胞凋亡

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中国药理学通报 2016年第12期32卷 1729-1734页

作者：郭珮冉建华李静陈地龙杨宝学何菲熊伟石雪萍李海星重庆医科大学基础医学院组织细胞工程与干细胞研究室北京100191 重庆医科大学基础医学院解剖学教研室北京100191 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 北京大学医学部基础医学院药理学系北京100191

目的研究注射用核糖核酸Ⅱ诱导人白血病细胞系K562和KG1a细胞凋亡的作用。方法以K562和KG1a细胞为研究对象,采用CCK-8法检测注射用核糖核酸Ⅱ对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;Hoechst33258染色观察细胞核形态;免疫印... 详细信息

目的研究注射用核糖核酸Ⅱ诱导人白血病细胞系K562和KG1a细胞凋亡的作用。方法以K562和KG1a细胞为研究对象,采用CCK-8法检测注射用核糖核酸Ⅱ对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;Hoechst33258染色观察细胞核形态;免疫印迹技术检测p53及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的表达。结果以100~300 mg·L^(-1)注射用核糖核酸Ⅱ处理K562和KG1a细胞12、24、48 h后,CCK-8检测结果显示K562和KG1a细胞的增殖降低,抑制率明显增高,并呈时间剂量依赖性;100、150、200mg·L^(-1)注射用核糖核酸Ⅱ处理K562和KG1a细胞24 h后,FCM结果显示细胞凋亡率随药物剂量增加而增高;Hoechst33258染色观察到细胞核出现染色质浓缩聚集、染色加深等凋亡指征;Western blot结果显示,注射用核糖核酸Ⅱ上调p53、Bax和cleaved caspase-3的表达,下调Bcl-2表达。结论注射用核糖核酸Ⅱ通过上调p53,调控Bcl-2/Bax的表达,激活caspase-3诱导人白血病K562和KG1a细胞凋亡。

关键词：注射用核糖核酸Ⅱ 白血病 p53 K562细胞 KG1a细胞凋亡

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Toll样受体7激动剂T7-利尿酸偶合物联合ROR1具有更强的抗乳腺癌作用

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第7期32卷 876-880,885页

作者：张娜靳广毅晋贞超刘兵彭博雅高宁宁胡云龙唐俐重庆医科大学病理生理学教研室组织工程与干细胞研究室重庆400016 深圳大学医学部广东深圳518060

目的探讨Toll样受体7激动剂T7-利尿酸偶合物(T7-EA)联合受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)抗乳腺癌的作用。方法采用Syfpeithi表位预测软件预测ROR1的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位;ELISA检测4μmol/L T7-EA、4μmol/L ROR1和4μmol/L T7-E... 详细信息

目的探讨Toll样受体7激动剂T7-利尿酸偶合物(T7-EA)联合受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)抗乳腺癌的作用。方法采用Syfpeithi表位预测软件预测ROR1的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位;ELISA检测4μmol/L T7-EA、4μmol/L ROR1和4μmol/L T7-EA联合4μmol/L ROR1诱导小鼠脾淋巴细胞产生的γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)和骨髓来源的树突状细胞(DC)产生的肿瘤坏死因子α(TNF-α);BALB/c小鼠皮下接种乳腺癌4T1细胞建立移植瘤模型,腹腔分别注射3 mg/kg T7-EA、15 mg/kg ROR1、3 mg/kg T7-EA联合15 mg/kg ROR1,每周1次,免疫治疗4次后处死小鼠检测肿瘤质量;ELISA检测血清中针对4T1细胞肿瘤蛋白的Ig G水平;乳酸脱氢酶(LDH)法测定特异性CTL活性。结果在预测的多条ROR1 CTL表位肽中选取序列PYCDETSSV作为疫苗多肽;体外实验显示T7-EA活化淋巴细胞呈现剂量依赖性,与ROR1相关多肽混合后不改变其活性;T7-EA与ROR1合用诱导小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ和IL-12,刺激DC产生TNF-α;体内实验显示T7-EA联合ROR1抑制肿瘤生长效果显著强于单用T7-EA组和ROR1组,T7-EA联合ROR1诱导的针对4T1细胞肿瘤蛋白的血清Ig G水平显著高于T7-EA和ROR1单独给药组,T7-EA联合ROR1诱发的T细胞杀伤作用显著强于T7-EA和ROR1单独处理组。结论 T7-EA和ROR1联合应用具有更强的抗乳腺癌效果。

关键词：乳腺癌 Toll样受体7 T7-利尿酸偶合物(T7-EA) 受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1) 肿瘤免疫治疗

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胰淀素在痴呆小鼠和正常小鼠脑内的分布和表达变化

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第三军医大学学报 2016年第3期38卷 258-263页

作者：张婷曾庆桦刘滢贺桂琼汪克建重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院人体解剖学教研室重庆400016

目的观察胰淀素在正常小鼠、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠和肥胖模型小鼠脑内的分布和表达情况,分析其与小鼠脑内老年斑的关系,探讨胰淀素是否参与老年性痴呆的发病。方法取5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠(AD模型小鼠)... 详细信息

目的观察胰淀素在正常小鼠、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠和肥胖模型小鼠脑内的分布和表达情况,分析其与小鼠脑内老年斑的关系,探讨胰淀素是否参与老年性痴呆的发病。方法取5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠(AD模型小鼠)、ob/ob肥胖模型小鼠及野生型小鼠(正常小鼠),采用免疫荧光染色方法检测胰淀素和老年斑在各组小鼠脑内的分布和表达。结果免疫荧光双标检测结果显示:胰淀素免疫阳性神经元广泛分布于APP/PS1双转基因小鼠脑内,包括皮质、海马、丘脑等区域,强阳性表达于岛叶和梨形皮质区域(P<0.01),而老年斑则选择性表达于新皮质、海马等区域,胰淀素的分布范围较老年斑的分布广泛,在部分老年斑的周围可见胰淀素免疫阳性物质分布。5月龄AD模型小鼠、ob/ob肥胖模型小鼠新皮质内胰淀素阳性神经元数目明显高于正常小鼠(P<0.05,P<0.01)。结论胰淀素在AD模型小鼠、ob/ob肥胖模型小鼠及正常小鼠脑内的分布和表达存在差异,这种差异有可能促进老年斑的形成以及参与AD疾病的发生。

关键词：胰淀素老年斑 β淀粉样蛋白阿尔茨海默病

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阿米替林治疗伴有抑郁的偏头痛患者的疗效评估

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世界复合医学 2017年第4期3卷 74-76页

作者：袁冬莉谭忠宜李王文冉丽李琴重庆医科大学医学信息学院智慧医学系统教研室重庆400016 重庆医科大学附属第二医院普外科重庆400010 重庆市三峡中心医院神经内科重庆404000 重庆市中医院神经内科重庆400011 重庆市中山医院神经内科重庆400013

目的在重庆市3家医院研究阿米替林预防性治疗偏头痛的效果。方法该研究从2014年9月—2016年12月在重庆3家医院中筛选了72例伴有抑郁的偏头痛患者,使用阿米替林治疗。对患者治疗前后的疼痛评分,疼痛次数,抑郁量表,脑电图进行统计学分析... 详细信息

目的在重庆市3家医院研究阿米替林预防性治疗偏头痛的效果。方法该研究从2014年9月—2016年12月在重庆3家医院中筛选了72例伴有抑郁的偏头痛患者,使用阿米替林治疗。对患者治疗前后的疼痛评分,疼痛次数,抑郁量表,脑电图进行统计学分析。结果最终68例患者完成了临床实验。经过阿米替林的治疗,患者的疼痛评分从(6±2.4)分,变为(2±1.5)分,(P<0.05),患者的疼痛次数从(8±3.5)次/月变为(3±2.1)次/月(P<0.05),有12例患者的抑郁症状完全缓解(P<0.05)。治疗前68例患者有30例患者(44.1%)出现脑电图的变化,治疗后有29例患者(42.6%)出现脑电图的变化。患者治疗后与治疗前相比,脑电图没有明显变化(P>0.05)。结论阿米替林25mg/d连续使用3月可以有效的治疗偏头痛。

关键词：阿米替林偏头痛抑郁

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阿尔茨海默病患者松果体MRI研究

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中国临床解剖学杂志 2016年第4期34卷 378-382页

作者：邓玲钱学华郭轶徐玉玉吕发金重庆医科大学解剖学教研室、法医学与生物医学信息研究室重庆医科大学附属第一医院放射科重庆400016

目的观察阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病进程中松果体的MRI形态学改变。方法依据AD发病进程,分别采集NC组24例、MCI组18例、轻度AD组16例、中-重度AD组20例受试者大脑MRI扫描图像,测量松果体矢径、横径、高、体积,并分析组... 详细信息

目的观察阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病进程中松果体的MRI形态学改变。方法依据AD发病进程,分别采集NC组24例、MCI组18例、轻度AD组16例、中-重度AD组20例受试者大脑MRI扫描图像,测量松果体矢径、横径、高、体积,并分析组间各测量值变化趋势。结果松果体标化高MCI期、轻度AD期较NC组增大(P<0.05),中-重度AD期标化高较MCI期、轻度AD缩小(P<0.05);松果体标化矢径、标化横径、标化体积MCI期、轻度AD、中-重度AD与NC组比无明显变化(P>0.05),但中-重度AD较MCI期组缩小(P<0.05)。结论在AD发病进程中松果体高先增大再萎缩,松果体高对MCI期、轻度AD患者的诊断有较大价值。

关键词：阿尔茨海默病松果体 MRI

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腰椎椎管的断面解剖和断层影像学研究

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云南医药 2017年第1期38卷 85-87页

作者：李林宏钱学华西双版纳州人民医院骨科云南景洪666100 重庆医科大学解剖学教研室法医学与生物医学信息研究室重庆400016

脊柱腰段是人体脊柱负载最大、运动幅度较大的区域,该区域小关节、韧带、筋膜、血管、神经配布复杂,是较易发生增生性或退行性变的部位,骨、韧带、筋膜的病变常累及毗邻血管、神经,导致腰腿痛（[1]）。因此,对脊柱腰段主要结构及其毗邻... 详细信息

脊柱腰段是人体脊柱负载最大、运动幅度较大的区域,该区域小关节、韧带、筋膜、血管、神经配布复杂,是较易发生增生性或退行性变的部位,骨、韧带、筋膜的病变常累及毗邻血管、神经,导致腰腿痛（[1]）。因此,对脊柱腰段主要结构及其毗邻关系进行断面解剖学、影像学和三维可视化研究,阐明腰椎各主要解剖结构的形态结构规律和空间位置关系,有助于腰椎、腰椎间盘疾病的诊断和治疗，也可为脊柱显微外科手术提供导航信息。

关键词：腰椎椎管断面解剖学断层影像学

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中国儿童15项常用临床检验指标的生物参考区间研究

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中华儿科杂志 2018年第11期56卷 835-845页

作者：钟旭辉丁洁周建华余自华孙书珍包瑛毛建华于力李志辉韩子明宋红梅蒋小云刘玉玲张碧丽夏正坤金春华朱光华王墨冯仕品沈颖黄松明马青山李海霞王学晶 Ichihara Kiyoshi 姚晨董冲亚北京大学第一医院儿科 100034 北京大学第一医院检验科 100034 北京大学第一医院医学统计室 100034 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科福州总医院儿科山东大学附属省立医院肾脏风湿免疫科西安市儿童医院肾脏科浙江大学医学院附属儿童医院肾内科广州市第一人民医院儿科湖南省儿童医院肾脏风湿科、南华大学儿科学院新乡医学院第一附属医院儿科中国医学科学院、北京协和医学院、北京协和医院儿科中山大学附属第一医院儿科中山博爱医院儿科天津市儿童医院肾内科南京军区南京总医院儿科首都儿科研究所附属儿童医院保健科上海交通大学附属儿童医院肾脏风湿科重庆医科大学附属儿童医院肾脏内科成都市妇女儿童中心医院肾脏科首都医科大学附属北京儿童医院肾脏科南京医科大学附属南京儿童医院肾脏科吉林大学第一医院小儿肾病科民航总医院检验科 Department of Clinical Laboratory Science Yamaguchi University Graduate School of MedicineJapan

目的建立不同年龄、性别儿童的临床常用检验指标的生物参考区间。方法横断面多中心研究。由全国15个省、市（北京、广东、湖北、江苏、福建、陕西、山东、浙江、湖南、河南、天津、上海、重庆、四川、吉林）20家医学中心合作完成，自201... 详细信息

目的建立不同年龄、性别儿童的临床常用检验指标的生物参考区间。方法横断面多中心研究。由全国15个省、市（北京、广东、湖北、江苏、福建、陕西、山东、浙江、湖南、河南、天津、上海、重庆、四川、吉林）20家医学中心合作完成，自2013年6月至2014年12月招募6月龄-17岁的表观正常儿童作为研究对象，通过问卷调查、体格检查和腹部超声等筛选、建立＂参考人群＂；留取研究对象空腹血液标本，送中心实验室进行检测，检测指标包括性激素（雌二醇、睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素，化学发光微粒子免疫检测法）、肝功能（丙氨酸转氨酶，加磷酸吡哆醛、不加磷酸吡哆醛试剂速率法两种方法同时检测）、肾功能（肌酐，碱性苦味酸法、酶法两种方法检测；胱抑素C，免疫透射比浊法）、免疫功能（免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、补体C3、补体C4，免疫透射比浊法）、碱性磷酸酶（磷酸对硝基苯法）、尿酸（尿酸酶法）和肌酸激酶（酶法）。将＂参考人群＂上述15项指标的检测数据按照性别、年龄进行分层统计分析，建立中国儿童参考区间。结果共招募2 259名儿童完成现场调查，筛选＂表观正常儿童＂1 648名作为＂参考人群＂；其中男830名、女818名，年龄（7.4±4.9）岁。建立了15项检验指标的生物参考区间，各指标参考区间随性别、年龄变化的趋势如下：（1）性激素：随年龄增长逐渐上升，卵泡刺激素在各年龄组均存在性别差异；（2）肝功能：2岁以下儿童的血丙氨酸转氨酶相对较高，5-9岁相对稳定，之后随年龄增长缓慢上升；（3）肾功能：儿童血肌酐随年龄增长持续上升，血胱抑素C在2岁以下相对高；（4）免疫功能：儿童血免疫球蛋白水平随年龄增长逐渐上升，而补体的参考范围相对恒定（年龄、性别差异不明显）；（5）其他：碱性磷酸酶和肌酸激酶在生后早期（2岁以下）处于较高水平，肌酸激酶和尿酸的检测值在5-9岁儿童相对稳定。上述指标中，性激素、肌酐、免疫球蛋白、肌酸激酶、碱性磷酸酶和尿酸的参考区间在进入青春期后迅速升高、伴有性别差异。检测丙氨酸转氨酶时，加磷酸吡哆醛试剂速率法的参考区间高于不加磷酸吡哆醛法；苦味酸法检测出的肌酐参考区间高于酶法（特别是9岁及以下儿童）。结论建立了中国儿童基于年龄、性别分层的生物参考区间，涵盖肝肾功能、免疫功能和性激素等15项临床常用检验指标。

关键词：儿童多中心研究参考区间

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锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第10期32卷 1317-1320,1326页

作者：方陈城张继明卢楠李鹏樊宇康月茜杨春何永林重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心病原生物学教研室重庆400016

目的观察卡介苗（BCG）的锌离子依赖金属蛋白酶1（Zmp1）对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21（DE3）中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测（0... 详细信息

目的观察卡介苗（BCG）的锌离子依赖金属蛋白酶1（Zmp1）对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21（DE3）中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测（0、24、48、72、96）h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期分布;用减毒沙门菌感染RAW264.7细胞诱导吞噬体形成后,用Zmp1处理细胞,在吞噬体内的减毒沙门菌和溶酶体的溶酶体相关膜蛋白1（LAMP1）分别用相应Alexa Fluor（R）350抗沙门菌抗体（蓝色荧光）和Cy5抗LAMP1抗体（红色荧光）标记,通过荧光显微镜观察RAW264.7细胞内两种荧光,将其重合分析吞噬体与溶酶体融合情况。结果用Zmp1蛋白处理细胞48 h后,细胞增殖活性明显降低;处理48 h后,细胞周期中G1期细胞比例下降,S期比例增高;采用双荧光标记感染沙门菌的RAW264.7细胞,Zmp1处理后显示紫色荧光的吞噬溶酶体融合减少。结论 Zmp1抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖,抑制吞噬体-溶酶体融合。

关键词：锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1) 细胞增殖吞噬体溶酶体

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大肠不耐热肠毒素B亚单位佐剂活性相关蛋白的筛选

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中国药理学通报 2016年第12期32卷 1761-1766页

作者：刘林周慧聪王秋娟陈思静马永平重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的通过对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位相互作用蛋白的分析,探讨LTB佐剂活性的分子机制。方法纯化的LTB蛋白和生理盐水分别处理RAW 264.7细胞,pulldown实验分离与LTB有相互作用的蛋白分子,质谱鉴定这些相互作用蛋白;免疫荧光和Western ... 详细信息

目的通过对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位相互作用蛋白的分析,探讨LTB佐剂活性的分子机制。方法纯化的LTB蛋白和生理盐水分别处理RAW 264.7细胞,pulldown实验分离与LTB有相互作用的蛋白分子,质谱鉴定这些相互作用蛋白;免疫荧光和Western blot分析验证与LTB相互作用蛋白在细胞内的相互作用。结果通过质谱鉴定了25种可能与LTB存在相互作用的蛋白分子,并构建了其相互作用网络图,筛选出可能与LTB免疫调节作用相关的蛋白分子;免疫荧光结果显示神经节苷脂能阻断LTB进入RAW 264.7细胞内,LTB在细胞内与GM130存在相互作用,而Vimentin在生理状态下与LTB不存在相互作用;LTB处理RAW 264.7细胞12 h后,β-actin表达上调,Hspd1表达无变化。结论 LTB佐剂活性的发挥是通过与免疫细胞表面GM1结合,引起内吞,并以小泡的形式到达高尔基体,通过高尔基体的加工。最终通过与Jup结合进而作用于TCF/LEF,引起Bcl-2、IL-6、Runx3等基因表达的变化,发挥促进T细胞和B细胞的增殖分化及活化、分泌细胞因子及免疫球蛋白的作用。

关键词： LTB RAW 264.7 相互作用蛋白免疫佐剂内吞

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