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中国生物制品学杂志 2009年第5期22卷 457-460,467页

作者：郭丽媛杨致邦田一玲黄伟韩飞范贵荣向瑜重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室神经科学研究中心基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 西南大学荣昌校区动物医学系重庆402460

目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。... 详细信息

目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。在不同pH值的IgY液中加入不同浓度的硫糖铝和不同浓度的胃蛋白酶,将含不同浓度硫糖铝的IgY反复冻融7次,将含30%硫糖铝的IgY室温放置1d～4周,ELISA法测定各实验组IgY的相对抗体活性(AT/AC)。结果在pH1.5、2.0和3.0的条件下,含30%～60%硫糖铝的IgY的相对抗体活性高于不加硫糖铝的IgY;在pH1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY的相对抗体活性保持68.7%;在pH2.0和3.0条件下,50%和40%以上的硫糖铝几乎可完全保持IgY的相对抗体活性。在pH值为2.0和3.0时,正常胃蛋白酶浓度(0.02mg/ml)下,30%以上的硫糖铝均可有效保护IgY的相对抗体活性。30%以上的硫糖铝可增强IgY的抗冻融能力。室温放置4周后,含30%硫糖铝的IgY仍能保持80%以上的相对抗体活性。结论30%以上的硫糖铝可增强VacAIgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力及抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂。

关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素抗原卵黄抗体硫糖铝抗体活性

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医学微生物学虚拟试验在实验教学中的应用

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实验室研究与探索 2014年第10期33卷 46-49页

作者：杨致邦徐晨王毅邓西川刘佳重庆医科大学基础医学院病基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 重庆医科大学教务处重庆400016

根据实验教学的特点,用Photoshop等应用软件制作了"革兰染色法观察细菌形态和染色性"和"肠道病原菌的分离鉴定"两个网络虚拟实验。根据实验中学生需着重掌握的操作技术和易出错的操作环节设置障碍;根据学生需掌握... 详细信息

根据实验教学的特点,用Photoshop等应用软件制作了"革兰染色法观察细菌形态和染色性"和"肠道病原菌的分离鉴定"两个网络虚拟实验。根据实验中学生需着重掌握的操作技术和易出错的操作环节设置障碍;根据学生需掌握的操作技术的重要性评分;设置后台自动记分和反馈意见。将制作的虚拟实验应用于实验课、学生课后复习、实验考核。学生和教师使用后普遍认为该虚拟实验能真实地展现实验的全过程,能帮助操作者记住实验操作的要点,有趣味性。用于实验考核与实际操作考核结果比较无显著差异(P>0.05)。因此,医学微生物学虚拟试验软件应用于实验教学取得了较好效果。

关键词：医学微生物学虚拟实验 Flash技术网络实验教学

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HpaA-VacA IgY对小鼠胃内感染幽门螺杆菌的预防作用

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中国生物制品学杂志 2011年第1期24卷 34-36,40页

作者：夏丽君杨致邦黄伟张任飞蒋仁举蒋英重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 西南大学荣昌校区动物医学系重庆402460

目的研究HpaA-VacA IgY对小鼠幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)胃内定植及引起炎症的预防作用,为制备集预防和治疗***感染为一体的IgY制剂奠定基础。方法将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组、阴性对照组、感染预防组和炎症预防组,阳... 详细信息

目的研究HpaA-VacA IgY对小鼠幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)胃内定植及引起炎症的预防作用,为制备集预防和治疗***感染为一体的IgY制剂奠定基础。方法将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组、阴性对照组、感染预防组和炎症预防组,阳性对照组灌喂含108 cfu/ml ***的菌液;阴性对照组灌喂布氏肉汤代替***菌液;感染预防组灌喂不同剂量的IgY后,再灌喂同等剂量的菌液;炎症预防组灌喂同等剂量的菌液后,再灌喂不同剂量的IgY。通过胃黏膜***培养和组织切片染色镜检观察***定植及炎症反应程度。结果 HpaA-VacA IgY剂量为6 mg/只时,对***感染的预防率为88.9%,预防效果较好,当HpaA-VacA IgY的剂量为8 mg/只时,能完全预防***感染及其所引起的胃黏膜炎症。结论小鼠口服HpaA-VacA IgY具有预防和治疗***感染的作用,可用于制备防治***感染的口服制剂。

关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素黏附素卵黄抗体体内试验

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申克孢子丝菌双相转换差异表达基因的生物信息学分析

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中国生物制品学杂志 2011年第9期24卷 1022-1027页

作者：周汛杨致邦肖异珠重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆400016 重庆医科大学基础医学院基础医学实验教学中心病原生物学教研室重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学附属儿童医院皮肤科重庆400014

目的探讨申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)双相转换的分子机制,筛选与其双相转换相关的差异表达基因。方法应用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信... 详细信息

目的探讨申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)双相转换的分子机制,筛选与其双相转换相关的差异表达基因。方法应用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信息学分析。结果 M+Y文库获得751条表达序列标签(Expressed sequence tags,ESTs),经拼接后获得101条非冗余序列(Unigenes);Y+M文库获得875条ESTs,拼接获得249条Unigenes。申克孢子丝菌酵母相和菌丝相的转换伴随着不同菌相细胞差异基因的高表达,这些高表达的差异基因可分为结构基因类、代谢酶类、细胞表面分子类及功能不明的细胞分子。结论已成功构建申克孢子丝菌双相转换相关的cDNA消减文库,并筛选出部分差异表达基因,为进一步研究申克孢子丝菌致病相关基因奠定了基础。

关键词：申克孢子丝菌抑制性消减杂交基因文库生物信息学分析

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地塞米松降解新基因的探讨

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中国生物工程杂志 2018年第1期38卷 15-24页

作者：张进斯丹杨致邦熊玉霞马廉举李津阳蒋仁举重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学药学实验教学中心重庆400016 重庆医科大学临床医学专业一系重庆400016

目的：探讨地塞米松降解代谢新基因,为构建高效、稳定的地塞米松降解基因工程菌提供思路。方法：根据新发现的地塞米松降解菌Burkholderia ***001（***001）全基因组测序和生物信息学分析,筛选疑似与地塞米松代谢相关的基因。提取***001... 详细信息

目的：探讨地塞米松降解代谢新基因,为构建高效、稳定的地塞米松降解基因工程菌提供思路。方法：根据新发现的地塞米松降解菌Burkholderia ***001（***001）全基因组测序和生物信息学分析,筛选疑似与地塞米松代谢相关的基因。提取***001总RNA逆转录为c DNA,以c DNA为模板,利用PCR技术快速克隆经实时荧光定量PCR技术（RT-q PCR）验证筛选出的新基因,测序鉴定后连接原核表达载体p ET-28a-c（＋）,构建重组质粒p ET-28a-Ivd。将p ET-28a-Ivd转化感受态***001,高效液相色谱（HPLC）验证表达菌降解能力的提升。结果：从***001基因组中筛选出3个未知基因,分别为ORF05499、ORF05827、ORF06535,其表达产物分别为过氧化物还原酶、甾酮异构酶、异戊酰辅酶A脱氢酶;RT-q PCR分析显示,3个目的基因在地塞米松诱导后均有不同程度表达上调,基因ORF06535表达上调明显;在***001中过表达基因ORF06535,HPLC检测显示,表达菌对地塞米松磷酸钠和地塞米松的降解率可达到89.0%和80.0%,相比原菌***001有明显提升。结论：在***001中发现新的地塞米松降解相关基因ORF06535,并完成基因克隆和功能验证,为制备地塞米松及甾体激素污染的生物修复剂提供了新的基因信息。

关键词：伯克霍尔德菌地塞米松降解基因实时荧光定量 PCR

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孢子丝菌复合体的分子生物学研究进展

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中国人兽共患病学报 2016年第6期32卷 576-580页

作者：贺羽赵秘密杨致邦周汛重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆400016 重庆医科大学基础医学院基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 重庆市中医院皮肤美容科重庆400021

孢子丝菌是人兽共患性真菌,感染人或动物可引起孢子丝菌病。以往形态学鉴定认为申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii,***)为孢子丝菌病的唯一致病菌种,而近年来分子生物学研究发现该菌是6个菌种构成的复合体,并且在基因鉴定、基因组学、... 详细信息

孢子丝菌是人兽共患性真菌,感染人或动物可引起孢子丝菌病。以往形态学鉴定认为申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii,***)为孢子丝菌病的唯一致病菌种,而近年来分子生物学研究发现该菌是6个菌种构成的复合体,并且在基因鉴定、基因组学、发病机制等方面有了进一步研究,有利于理解孢子丝菌病的发生发展过程,对于早期诊断、确定治疗方案及判断预后至关重要。本文就孢子丝菌复合体的分子生物学研究进展进行综述。

关键词：孢子丝菌基因鉴定基因组发病机制分子生物学

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白介素-1和肿瘤坏死因子-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的关系

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细胞生物学杂志 2009年第2期31卷 271-276页

作者：向瑜杨致邦陈瀑范贵荣郭丽媛成凤重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室神经科学研究中心基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016

为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取***阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、... 详细信息

为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取***阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取***阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。

关键词：胃十二指肠疾病基因多态性幽门螺杆菌白细胞介素-1 肿瘤坏死因子-α

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幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达

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重庆医科大学学报 2010年第6期35卷 822-825页

作者：韩飞杨致邦重庆三峡中心医院微免科重庆404000 重庆医科大学基础医学院:病原生物学教研室神经科学研究中心基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016

目的:重组表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)hp1188基因,为研究该基因所编码蛋白在***的黏附过程中的作用奠定基础。方法:以***标准株NCTC11637基因组DNA为模板,PCR扩增hp1188基因片段,克隆至质粒pQE-30中获得重组质粒pQE30-hp11... 详细信息

目的:重组表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)hp1188基因,为研究该基因所编码蛋白在***的黏附过程中的作用奠定基础。方法:以***标准株NCTC11637基因组DNA为模板,PCR扩增hp1188基因片段,克隆至质粒pQE-30中获得重组质粒pQE30-hp1188,经DNA测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。Ni2+-NTA树脂亲和层析纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测表达,Westernblot鉴定相应抗原表位。结果:扩增的hp1188基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子量约为30600Dalton,与预期相符;大肠杆菌裂解液中表达产物接近可溶性蛋白总量的一半,但沉淀中仍能检测到表达蛋白。目标蛋白纯化后均一性接近90%,Westernblot证实与多克隆抗体有良好结合能力。结论:成功克隆了hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。

关键词：幽门螺杆菌 hp1188基因表达

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幽门螺杆菌NCTC11637株Hp1501蛋白的原核表达与纯化

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中国生物制品学杂志 2011年第12期24卷 1421-1424页

作者：杨继文杨致邦敬保迁于拽拽熊玉霞王朝丽冯莉重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室神经科学研究中心重庆400016 川北医学院分子生物学研究所四川南充637007

目的原核表达并纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)NCTC11637株Hp1501蛋白。方法 PCR扩增*** NCTC11637株Hp1501基因编码功能区序列Hp1501a,定向克隆至pQE30载体,构建重组原核表达质粒pQE30-Hp1501a,转化*** XL1-blue,IPTG诱导表达,并分析重组蛋白的表达形式。用Ni-NTA His柱对重组蛋白进行纯化。结果重组表达质粒pQE30-Hp1501a经双酶切鉴定构建正确,测序分析表明插入基因序列完全正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为37 000,表达量约占菌体总蛋白的21%,主要以包涵体形式存在,可与兔抗His单克隆抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度达91%。结论成功原核表达并纯化了*** NCTC11637株Hp1501蛋白,为***外膜蛋白的生物学功能和疫苗的研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌 Hp1501基因生物信息学原核细胞基因表达纯化

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申克孢子丝菌菌丝相和酵母相cDNA消减文库的构建及差异表达基因的筛选

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中国人兽共患病学报 2011年第5期27卷 427-431页

作者：周汛杨致邦肖异珠重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆400016 重庆医科大学基础医学院基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学附属儿童医院重庆400014

目的构建申克孢子丝菌双相cDNA消减文库,筛选与双相转换相关的差异表达基因。方法运用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信息学分析。结果 M+Y... 详细信息

目的构建申克孢子丝菌双相cDNA消减文库,筛选与双相转换相关的差异表达基因。方法运用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信息学分析。结果 M+Y文库获得751条表达序列标签(Expressed Sequence Tags,ESTs),经拼接后获得101条uni-genes;Y+M文库获得875条ESTs,拼接获得249条unigenes。申克孢子丝菌酵母相菌丝相的转换伴随着不同菌相细胞差异基因的高表达,这些高表达的差异基因可分为结构基因类、代谢酶类、细胞表面分子类及功能不明的细胞分子。结论成功构建了申克孢子丝菌双相转换相关的cDNA消减文库基础上,筛选出部分差异表达基因,为进一步研究申克孢子丝菌致病相关基因奠定了基础。

关键词：申克孢子丝菌抑制性消减杂交 cDNA消减文库生物信息学分析

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