检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2019年第15期41卷 1445-1452页

作者：梁森李帅庭袁志黄慧哲重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院发育生物学研究室重庆400016

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼lkb1基因,观察和验证纯合子表型,初步探讨Lkb1对肾小管发育的影响。方法针对斑马鱼lkb1基因设计并体外合成gRNA,通过显微注射技术将gRNA和Cas9 mRNA注入野生型胚胎一细胞期卵黄中,利用T7E1酶切和测序... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼lkb1基因,观察和验证纯合子表型,初步探讨Lkb1对肾小管发育的影响。方法针对斑马鱼lkb1基因设计并体外合成gRNA,通过显微注射技术将gRNA和Cas9 mRNA注入野生型胚胎一细胞期卵黄中,利用T7E1酶切和测序筛选出高效gRNA,通过测序筛选出F0代突变体及可遗传突变体,野生鱼和可遗传突变体鱼杂交产生F1代杂合子突变体,测序鉴定F1代杂合子突变类型,通过F1代杂合子自交产生F2代纯合子幼鱼,通过观察鉴定出纯合子表型;通过RT-PCR和免疫印迹验证纯合子表型。结果制备了斑马鱼lkb1 gRNA和Cas9 mRNA,筛选出3种产生移码突变的杂合子,发现斑马鱼lkb1基因敲除纯合子幼鱼受精后第5天游动时头尾剧烈摆动,异常兴奋,鱼鳔缺失,体轴弯曲,卵黄消耗过快,肝脏暗淡,肠道水肿;第9天大多数死亡;纯合子g6pase、pdk2b、pcpck1 mRNA显著升高,Lkb1完全不表达;肾小管标志蛋白mRNA显著升高。结论利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼lkb1基因产生了多种表现,包括肝脏衰竭、肠道水肿、体轴弯曲、鱼鳔缺失、早期致死的表型,同时表明Lkb1对斑马鱼肾小管发育有影响。

关键词： CRISPR/Cas9 lkb1 斑马鱼

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基于多种数据库分析E2F3基因在黑色素瘤中的变异、表达及临床意义

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海南医学院学报 2023年第20期29卷 1563-1573页

作者：韩利民叶钢邓川代姣赵海龙重庆市长寿区人民医院内分泌内科重庆401220 重庆市长寿区人民医院肝胆外科重庆401220 重庆市长寿区人民医院神经内科重庆401220 重庆市长寿区人民医院药学部重庆401220 遵义医科大学基础医学院病理生理学教研室贵州遵义563000

目的:探究E2F3基因在黑色素瘤中的变异、表达及临床意义。方法:首先,采用cBioportal数据库、Oncomine数据库、GEO数据库分析E2F3基因在黑色素瘤中的变异情况和表达水平,OSskcm数据库和TISIDB数据库分析E2F3与黑色素瘤的预后和肿瘤免疫... 详细信息

目的:探究E2F3基因在黑色素瘤中的变异、表达及临床意义。方法:首先,采用cBioportal数据库、Oncomine数据库、GEO数据库分析E2F3基因在黑色素瘤中的变异情况和表达水平,OSskcm数据库和TISIDB数据库分析E2F3与黑色素瘤的预后和肿瘤免疫浸润细胞的关系。接着,采用LinkedOmics数据库鉴定黑色素瘤中与E2F3表达相关的差异基因并进行生物学功能分析,利用Cytoscpae筛选Hub基因。最后,通过CMap数据库筛选治疗黑色素瘤的小分子化合物。结果:E2F3基因在黑色素瘤中的变异率为约4%,突变位点有21个。与正常皮肤组织相比,E2F3基因在黑色素瘤中的表达明显升高(P<0.01)。E2F3基因的变异和表达水平升高与黑色素瘤患者的总生存期(OS)缩短有关(P<0.05)。E2F3的CNA水平与pDC、Neutrophil、Act DC、Th17等淋巴细胞的表达水平呈负相关,与CXCL5、CCL13、CCR1等趋化因子的表达水平呈负相关。E2F3的甲基化水平与Th1、Neutrophil、Act DC等淋巴细胞的表达水平呈正相关,与CXCL16、CXCL12、CCR1等趋化因子的表达水平呈正相关。E2F3的表达水平与Th17、Tcm CD4、Th1等淋巴细胞的表达水平呈负相关,与CXCL 16、CCL 22、CCL 2等趋化因子的表达水平呈负相关。黑色素瘤中UHRF1BP1等96个基因的表达与E2F3的表达呈显著相关(|cor|≥0.5,P<0.05),以上基因主要与RNA转运、真核生物的核糖体生物生成、细胞周期等通路有关;其中,WDR12、WDR43、RBM28、UTP18、DKC1、PAK1IP1、DDX31、TEX10、TRUB1、TRMT61B是前10位hub基因。YC-1、辛伐他汀、细胞松弛素-d、Deforolimus和细胞松弛素-b可能是治疗黑色素瘤的5种潜在小分子化合物。结论:E2F3基因突变和表达水平升高与黑色素瘤的不良预后有关,可通过影响不同肿瘤免疫浸润细胞亚型的表达参与黑色素瘤的发生和发展,其可能是黑色素瘤的潜在诊断标志物和治疗靶点。

关键词：黑色素瘤 E2F3 数据库突变免疫浸润预后

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甘草素通过抗炎发挥对阿尔茨海默病的保护作用

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免疫学杂志 2019年第4期35卷 327-333页

作者：杜烨湘罗敏冯敏汪克建贺桂琼重庆医科大学神经科学中心 400016 重庆医科大学基础医学院人体解剖学教研室 400016

目的研究植物雌激素甘草素(liquiritigenin,LG)是否通过抗炎对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发挥保护作用。方法 LG是从中药甘草中提取的一种黄酮类化合物单体,具有多靶向作用,如抗炎、抗氧化等。本实验用N2A细胞(神经瘤母细胞... 详细信息

目的研究植物雌激素甘草素(liquiritigenin,LG)是否通过抗炎对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发挥保护作用。方法 LG是从中药甘草中提取的一种黄酮类化合物单体,具有多靶向作用,如抗炎、抗氧化等。本实验用N2A细胞(神经瘤母细胞)作为正常对照细胞和稳定表达瑞士突变型淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的N2A细胞(N2AAPP)作为AD细胞模型,结合LG处理,通过MTT、ELISA、Western blot、RT-PCR检测LG对AD模型细胞的细胞活性、雌激素受体(ERβ)、炎症相关蛋白NLRP3和caspase-1以及炎症因子IL-1β、TNF-α的影响。结果与正常的N2A细胞相比,N2A-APP细胞中APP、BACE1蛋白表达以及Aβ水平显著增加,说明N2A-APP作为AD模型细胞的有效性。MTT结果显示LG不影响N2A的细胞活力(P>0.05)。Westers blot结果显示,与正常N2A细胞相比,N2A-APP细胞内ERβ的表达显著下调,而LG处理可显著逆转ERβ的表达。Westers blot结果还发现,与正常细胞相比,N2A-APP细胞内炎症相关蛋白NLRP3和p-caspase-1蛋白表达显著增强,而LG处理可有效逆转NLRP3和p-caspase-1的表达上调(P<0.01)。相应地,RT-PCR结果发现,LG可显著降低N2A-APP细胞内炎症因子IL-1β、TNF-α的水平。结论甘草素可有效抑制AD模型细胞的炎症反应,其机制可能与其上调ERβ蛋白的表达有关。

关键词：阿尔兹海默病甘草素炎症雌激素受体β

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中医学在自然哲学-科学发展的历史定位——对中医药优势特点及未来发展的哲学再思考

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世界科学技术-中医药现代化 2021年第5期23卷 1470-1477页

作者：杜力军赵玉男王玉刚谢伟东雷帆李俊孙虹袁梽漪清华大学生命科学学院北京100084 南京中医药大学基础医学院病理教研室南京210046 华中科技大学同济医学院基础医学院武汉430030 清华大学国际深圳研究生院生命与健康学部深圳518055 江西中医药大学创新药物与高效节能降耗制药设备国家重点实验室南昌330006 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100094 重庆医科大学药学院重庆400016

一直以来对中医学与当代自然科学的关系存在着争论。对于中医学这种临床具有强大生命力的学科,从历史发展的角度对其进行分析定位,对于全面深入认识与发展中医学具有重要意义。为此,我们从西方自然哲学-自然科学的发展角度来探讨中医学... 详细信息

一直以来对中医学与当代自然科学的关系存在着争论。对于中医学这种临床具有强大生命力的学科,从历史发展的角度对其进行分析定位,对于全面深入认识与发展中医学具有重要意义。为此,我们从西方自然哲学-自然科学的发展角度来探讨中医学的历史定位,从中获得对中医学的理性认识,为中医药学科的发展提供哲学和科学依据。结果表明:(1)从探讨自然运行规律来看,中医学属于科学范畴;(2)从历史角度来看,中医学应属于自然哲学下,与由数理实验科学发展而来的自然科学并列;(3)"形而上学-辨证论治-信息反馈修正"是其理论形成的主要闭环模式,并以此确保了这种形而上学与临床诊疗紧密结合在防治疾病上的可行性和可确证性;(4)对中医学的研究应该既不同于自然哲学也不同于自然科学;(5)坚持科学自觉和哲学自觉是研究发展中医学的重要治学态度。

关键词：中医学自然哲学自然科学中药学科学

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藤黄节杆菌ATCC21606的全基因组测序及序列分析

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基因组学与应用生物学 2020年第5期39卷 2071-2078页

作者：谷璐婷李凌彦孔道春易发平重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 北京大学生命科学学院蛋白质与植物基因研究国家重点实验室北京100871

藤黄节杆菌(Arthrobacter luteus,***)ATCC 21606是一种革兰氏阳性短杆状的放线菌。该菌分泌的溶菌酶(Lyticase)能够有效裂解酵母细胞壁,同时能分泌限制性核酸内切酶AluⅠ和热稳定的黄嘌呤氧化酶,但目前还没有该菌株的全基因组序列相关... 详细信息

藤黄节杆菌(Arthrobacter luteus,***)ATCC 21606是一种革兰氏阳性短杆状的放线菌。该菌分泌的溶菌酶(Lyticase)能够有效裂解酵母细胞壁,同时能分泌限制性核酸内切酶AluⅠ和热稳定的黄嘌呤氧化酶,但目前还没有该菌株的全基因组序列相关的报道。本研究首先通过对*** ATCC 21606菌株的基因组进行高通量测序;再利用SOAPdenovo、GeneMarks等软件对基因组进行组装和组分分析;接着与COG、GO、KEGG、NR、Swiss-Prot和CAZy数据库比对进行基因功能注释;并利用antiSMASH软件进行次级代谢产物合成基因簇预测;最终得到大小为4209480 bp的全基因组序列,GC含量为74.68%,共预测到编码基因3741个。基因序列已提交至美国国立生物技术信息中心(NCBI)的GenBank数据库,登录号为RQIK000-00000。本研究首次报道了*** ATCC 21606的全基因组序列,为后续该菌株的功能基因、代谢产物合成途径及比较基因组学等相关研究提供基础。

关键词：藤黄节杆菌(Arthrobacter luteus) 溶菌酶全基因组测序基因注释基因簇

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雌二醇与ESR1靶向结合通过ERK信号通路调控软骨细胞的增殖

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南方医科大学学报 2019年第2期39卷 134-143页

作者：刘敏谢巍伟郑维尹丹旸罗瑞郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室//发育生物学与模式动物平台重庆400016

目的探讨雌二醇(E2)/ESR1(ERα)对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy腺病毒包装系统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不同病毒感染组处... 详细信息

目的探讨雌二醇(E2)/ESR1(ERα)对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy腺病毒包装系统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不同病毒感染组处理C28I2细胞,Western blot检测各处理组C28I2细胞的自噬、凋亡相关蛋白的表达及ERK信号通路的磷酸化水平;免疫荧光实验观察细胞内自噬流的强弱;FCM检测各组细胞凋亡率及周期;QPCR检测mRNA水平增殖相关标志基因(PCNA)、细胞周期蛋白B1(CyclinB1)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达。ERK特异性抑制剂处理细胞,Western blot检测抑制ERK通路后自噬及凋亡相关蛋白表达,QPCR检测增殖相关标志基因表达。结果成功构建过表达腺病毒Ad-ESR1。过表达ESR1能够促进E2处理后LC3和ATG7的表达,促进LC3和LAMP1在细胞质中共定位,抑制cleaved caspase3、cleavedcaspase12的表达并且促进PCNA、cyclinB1和cyclinD1表达,且细胞内pERK明显减少;而干扰ESR1表达后,自噬相关蛋白表达减少,自噬流减弱,凋亡蛋白表达增加,增殖标志基因表达下调,细胞内pERK相对增加。特异性抑制剂阻断ERK活化,E2/ESR1诱导的自噬增加以及凋亡减少被抑制,增殖相关基因表达被抑制。结论 E2与ESR1的靶向结合可促进软骨细胞的增殖,其作用机制可能与抑制ERK信号通路活化从而促进自噬、抑制凋亡有关。

关键词： ESR1 自噬凋亡增殖 ERK信号通路雌二醇

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肠道NDRG2参与PTSD状态下内脏高敏感作用及其机制研究

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胃肠病学 2021年第3期26卷 139-144页

作者：王静王彦钧王悠邓天伟曾玮玮梁华平王建民陈东风张健陈阳美杨敏陆军军医大学大坪医院消化内科 400042 重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆大学附属三峡医院消化内科陆军军医大学大坪医院战伤感染与特需药品研究室 400042 陆军军医大学大坪医院武器杀伤生物效应评估研究室 400042 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

背景:内脏高敏感是功能性胃肠病(FGIDs)发生的最重要的病理生理学机制。创伤后应激障碍(PTSD)状态下存在广泛的内脏敏感性改变,但在肠道水平敏化的机制尚不清楚。目的:探讨PTSD状态下N-Myc下游调控基因2(NDRG2)在肠道水平参与内脏高敏... 详细信息

背景:内脏高敏感是功能性胃肠病(FGIDs)发生的最重要的病理生理学机制。创伤后应激障碍(PTSD)状态下存在广泛的内脏敏感性改变,但在肠道水平敏化的机制尚不清楚。目的:探讨PTSD状态下N-Myc下游调控基因2(NDRG2)在肠道水平参与内脏高敏感的作用。方法:采用单一连续刺激(SPS)方法建立PTSD模型。将SD大鼠分为正常对照组、CTX组、PTSD组、PTSD+CTX组,小鼠分为正常对照组、PTSD组、NDRG2^(-/-)组和NDRG2^(-/-)+PTSD组。采用结直肠扩张法(CRD)和内脏运动反射(VMR)评估大鼠和小鼠的内脏敏感性变化,免疫荧光法评估大鼠肠道NDRG2表达。结果:CRD压力为40、60 mm Hg时,PTSD小鼠的VMR显著高于正常对照小鼠(P=0.033,P=0.021),NDRG2^(-/-)+PTSD组小鼠的VMR显著低于PTSD小鼠(P=0.015,P=0.002)。CRD压力为40、60 mm Hg时,PTSD大鼠的VMR显著高于正常对照大鼠(P=0.003,P<0.001),CTX组VMR显著低于正常对照大鼠(P=0.022,P=0.012),PTSD+CTX组的VMR显著低于PTSD大鼠(P=0.003,P<0.001)。与正常对照大鼠相比,PTSD大鼠结肠NDRG2表达显著增高(P=0.007),CTX大鼠显著降低(P=0.001);与PTSD大鼠相比,PTSD+CTX组大鼠结肠NDRG2表达显著降低(P<0.001)。结论:在PTSD状态下,肠道NDRG2在外周水平参与了内脏高敏感的形成,CTX干预可下调NDRG2表达,从而发挥抗内脏伤害性刺激的作用。

关键词：应激障碍,创伤后基因,NDRG2 内脏高敏感内脏运动反射头孢曲松

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原头蚴体外形成棘球蚴的优化培养体系研究

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第三军医大学学报 2019年第5期41卷 415-423页

作者：吴宏烨李锴王芬刘许诺范俊杰叶彬重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的建立适合细粒棘球绦虫原头蚴在体外形成棘球蚴的培养体系。方法以RPMI1640或DMEM培养基为基质,胎牛血清或绵羊血清为营养成分,人肝细胞株L02为饲养细胞设计配伍2大类、6个组培养体系;培养细粒棘球绦虫原头蚴45 d,根据各组原头蚴的... 详细信息

目的建立适合细粒棘球绦虫原头蚴在体外形成棘球蚴的培养体系。方法以RPMI1640或DMEM培养基为基质,胎牛血清或绵羊血清为营养成分,人肝细胞株L02为饲养细胞设计配伍2大类、6个组培养体系;培养细粒棘球绦虫原头蚴45 d,根据各组原头蚴的头节外翻率、成囊率和囊泡大小情况,寻找适合原头蚴形成棘球蚴的体外培养体系最佳配伍;在最佳配伍的培养体系继续培养棘球蚴囊泡至180 d。结果在起初的45 d期间,DMEM体系的E组(DMEM+胎牛血清+人肝细胞株L02)培养的棘球蚴生长最快,20 d起原头蚴成囊率高于其他各组(P<0.05),25 d起棘球蚴囊泡大于其他各组(P<0.05),45 d时原头蚴成囊率达到100%;在其后的46～180 d内,棘球蚴囊泡持续增大,至80 d时肉眼可见透明囊泡,至180 d时最大囊泡直径达2.2 mm。结论添加胎牛血清及人肝细胞株L02的DMEM培养基有利于体外培养的原头蚴发育为棘球蚴囊泡。

关键词：细粒棘球绦虫原头蚴成囊棘球蚴培养体系

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人MAPK3基因原核表达载体的构建及鉴定

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贵州医科大学学报 2021年第10期46卷 1145-1150页

作者：石松薛殿婷张培石静孙达权黔东南苗族侗族自治州人民医院重症医学科贵州凯里556000 贵州医科大学基础医学院生化与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的探讨人丝裂原激活蛋白激酶3(MAPK3)基因原核表达载体的构建及鉴定。方法取对数生长期正常人肝细胞系HL-7702细胞,采用TRIzol法抽提细胞总RNA,以此为模板用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)反转录扩增MAPK3基因的蛋白编码区,脱氧核糖核... 详细信息

目的探讨人丝裂原激活蛋白激酶3(MAPK3)基因原核表达载体的构建及鉴定。方法取对数生长期正常人肝细胞系HL-7702细胞,采用TRIzol法抽提细胞总RNA,以此为模板用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)反转录扩增MAPK3基因的蛋白编码区,脱氧核糖核苷酸(DNA)测序鉴定后插入原核表达载体pGEX-4t-1中构建重组原核表达质粒(命名为pGEX-MAPK3_(GST));将pGEX-MAPK3_(GST)导入细菌Rosetta(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达MAPK3融合蛋白(GST-MAPK3),采用Sepharose 4B亲和层析法纯化MAPK3融合蛋白(GST-MAPK3),采用考马斯亮蓝染色和蛋白免疫印迹分析GST-MAPK3的蛋白纯度和验证目的蛋白。结果RT-PCR法成功克隆了人MAPK3基因的蛋白编码区,DNA测序结果显示该片段无任何突变;用克隆获得的基因片段成功构建了pGEX-MAPK3_(GST),通过原核表达的方式获得了GST-MAPK3,并通过亲和层析纯化了GST-MAPK3。结论成功克隆人MAPK3基因并获得MAPK3蛋白,可用于体外研究MAPK3对细胞角蛋白18(CK18)的磷酸化作用。

关键词：丝裂原激活蛋白激酶类丝裂原激活蛋白激酶3 基因克隆载体构建原核表达亲和层析蛋白纯化

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人脐带间充质干细胞预防小鼠急性移植物抗宿主病作用及其机制研究

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第三军医大学学报 2021年第21期43卷 2276-2285页

作者：洪涛王瑞王筱淇王蔚浩杜雨軒何云地马超安慧慧王俊洁张云芳高强国杨世杰张曦陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院血液病医学中心全军血液病中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400037 遵义医科大学第二附属医院检验科贵州遵义563099 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院细胞生物学教研室重庆400038

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)对小鼠急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的预防效果并初步探索其作用机制。方法通过对接受全身辐照的雄性BALB/c小鼠移植雄性C57BL/6小鼠的骨髓细胞和脾脏细胞,构建小鼠异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后aGVHD模型,建模部分实验分组:BM组[尾静脉注射500μL供者C57BL/6小鼠骨髓细胞(5×10^(6)/只)悬液]和aGVHD组[尾静脉注射500μL骨髓细胞(5×10^(6)/只)和脾脏细胞(5×10^(6)/只)混悬液]。观察小鼠生存率、临床评分和体质量变化;流式细胞术检测移植后嵌合度;HE染色观察aGVHD靶器官(肺脏、肝脏、结肠、小肠)的病理学改变。收集P4代HUCMSCs,于移植当天混合供者骨髓细胞和脾脏细胞输注BALB/c小鼠,实验分组:①aGVHD组(处理同建模部分);②aGVHD+MSCs组[经尾静脉注射500μL骨髓细胞(5×10^(6)/只)、脾脏细胞(5×10^(6)/只)和HUCMSCs(5×10^(5)/只)混悬液]。观察HUCMSCs对aGVHD的预防效果,应用ELISA检测各组小鼠血清IFN-γ、TNF-α浓度;流式细胞术检测CD4^(+)T细胞在靶器官中绝对数计数和凋亡水平。结果aGVHD组较BM组生存率降低、临床评分增高、体质量减轻明显(P<0.05),靶器官病理损伤更为严重(P<0.05);移植后小鼠达完全嵌合。HUCMSCs输注显著改善移植后小鼠生存、降低临床评分和靶器官病理损伤(P<0.05),并降低血清炎症因子浓度(P<0.05),增加CD4^(+)T细胞在靶器官中的凋亡,CD4^(+)T细胞绝对数计数显著下降(P<0.05)。结论HUCMSCs联合allo-HSCT能有效预防及减轻小鼠aGVHD,其作用机制主要是HUCMSCs介导淋巴细胞凋亡,减少其在靶器官中的浸润和调控炎症因子分泌。

关键词：异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病人脐带间充质干细胞细胞疗法炎症因子

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