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中国生物工程学会第十一届学术年会暨2017年全国生物技术大会

作者：陈万方韩笑隋琳琳孔英商宇红大连医科大学基础医学院生化教研室大连医科大学第一临床学院妇产科

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是N-结合糖蛋白家族中细胞外基质磷酸化糖蛋白,其结构中存在N-糖基化位点及O-糖基化位点。OPN通过与细胞表面的整合素受体相互作用可调节细胞之间的黏附、细胞迁移、细胞基质间相互作用,参与机体发育及某些病... 详细信息

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是N-结合糖蛋白家族中细胞外基质磷酸化糖蛋白,其结构中存在N-糖基化位点及O-糖基化位点。OPN通过与细胞表面的整合素受体相互作用可调节细胞之间的黏附、细胞迁移、细胞基质间相互作用,参与机体发育及某些病理过程,与肿瘤细胞的生长增殖和侵袭转移密切相关,被认为是一种新的肿瘤标志物。

关键词：子宫内膜骨桥蛋白 OPN 接受状态

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人子宫颈癌肿瘤相关巨噬细胞浸润与T细胞亚型及临床病理特征的相关性分析

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基因组学与应用生物学 2016年第12期35卷 3235-3240页

作者：沈依帆徐曼王欣汪涛刘慧重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

为了探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)在人子宫颈癌微环境内的分布与T细胞亚型和临床病理特征的相关性,本研究应用S-P免疫组化法检测TAMs在60例子宫颈癌组织、10例高级别鳞状上皮内病变组织及10例子宫颈组织的... 详细信息

为了探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)在人子宫颈癌微环境内的分布与T细胞亚型和临床病理特征的相关性,本研究应用S-P免疫组化法检测TAMs在60例子宫颈癌组织、10例高级别鳞状上皮内病变组织及10例子宫颈组织的分布情况;间接免疫荧光双标法分析浸润的FOXP3^+Treg细胞数量、CD8^+T细胞数量及其粒酶B分泌情况。统计学分析TAMs数量与癌间质浸润的FOXP3^+Treg、CD8^+T数量和临床病理特征的相关性。结果显示TAMs在子宫颈癌微环境的数量均显著多于高级别鳞状上皮内病变和子宫颈组织(p<0.01,p<0.01),同时高级别鳞状上皮内病变组织阳性细胞数也明显多于子宫颈组织(p<0.01);TAMs数量与宫颈癌间质内浸润的FOXP3^+T细胞数量呈正相关性(p<0.05),且与淋巴结转移和癌栓相关(p<0.05,p<0.05),但与CD8^+T细胞浸润数量无明显相关性(p>0.05)。本实验发现TAMs在宫颈癌微环境内大量分布,且与肿瘤局部免疫抑制及淋巴结转移和癌栓有关。

关键词：肿瘤相关巨噬细胞宫颈癌 FOXP3^+Tregs CD8^+T 淋巴结转移

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注射用核糖核酸Ⅱ上调p53诱导人白血病细胞凋亡

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中国药理学通报 2016年第12期32卷 1729-1734页

作者：郭珮冉建华李静陈地龙杨宝学何菲熊伟石雪萍李海星重庆医科大学基础医学院组织细胞工程与干细胞研究室北京100191 重庆医科大学基础医学院解剖学教研室北京100191 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 北京大学医学部基础医学院药理学系北京100191

目的研究注射用核糖核酸Ⅱ诱导人白血病细胞系K562和KG1a细胞凋亡的作用。方法以K562和KG1a细胞为研究对象,采用CCK-8法检测注射用核糖核酸Ⅱ对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;Hoechst33258染色观察细胞核形态;免疫印... 详细信息

目的研究注射用核糖核酸Ⅱ诱导人白血病细胞系K562和KG1a细胞凋亡的作用。方法以K562和KG1a细胞为研究对象,采用CCK-8法检测注射用核糖核酸Ⅱ对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;Hoechst33258染色观察细胞核形态;免疫印迹技术检测p53及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的表达。结果以100~300 mg·L^(-1)注射用核糖核酸Ⅱ处理K562和KG1a细胞12、24、48 h后,CCK-8检测结果显示K562和KG1a细胞的增殖降低,抑制率明显增高,并呈时间剂量依赖性;100、150、200mg·L^(-1)注射用核糖核酸Ⅱ处理K562和KG1a细胞24 h后,FCM结果显示细胞凋亡率随药物剂量增加而增高;Hoechst33258染色观察到细胞核出现染色质浓缩聚集、染色加深等凋亡指征;Western blot结果显示,注射用核糖核酸Ⅱ上调p53、Bax和cleaved caspase-3的表达,下调Bcl-2表达。结论注射用核糖核酸Ⅱ通过上调p53,调控Bcl-2/Bax的表达,激活caspase-3诱导人白血病K562和KG1a细胞凋亡。

关键词：注射用核糖核酸Ⅱ 白血病 p53 K562细胞 KG1a细胞凋亡

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锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第10期32卷 1317-1320,1326页

作者：方陈城张继明卢楠李鹏樊宇康月茜杨春何永林重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心病原生物学教研室重庆400016

目的观察卡介苗（BCG）的锌离子依赖金属蛋白酶1（Zmp1）对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21（DE3）中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测（0... 详细信息

目的观察卡介苗（BCG）的锌离子依赖金属蛋白酶1（Zmp1）对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21（DE3）中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测（0、24、48、72、96）h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期分布;用减毒沙门菌感染RAW264.7细胞诱导吞噬体形成后,用Zmp1处理细胞,在吞噬体内的减毒沙门菌和溶酶体的溶酶体相关膜蛋白1（LAMP1）分别用相应Alexa Fluor（R）350抗沙门菌抗体（蓝色荧光）和Cy5抗LAMP1抗体（红色荧光）标记,通过荧光显微镜观察RAW264.7细胞内两种荧光,将其重合分析吞噬体与溶酶体融合情况。结果用Zmp1蛋白处理细胞48 h后,细胞增殖活性明显降低;处理48 h后,细胞周期中G1期细胞比例下降,S期比例增高;采用双荧光标记感染沙门菌的RAW264.7细胞,Zmp1处理后显示紫色荧光的吞噬溶酶体融合减少。结论 Zmp1抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖,抑制吞噬体-溶酶体融合。

关键词：锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1) 细胞增殖吞噬体溶酶体

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GM130对胃癌细胞O-糖基化及细胞粘附能力的影响

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重庆医科大学学报 2016年第6期41卷 563-568页

作者：苏琳茜冯阳阳管停宏张婉玉易永芬重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:初步探讨沉默高尔基体基质蛋白130(golgi matrix protein 130,GM130)基因对胃癌细胞MKN-45 O-糖基化及细胞粘附能力的影响。方法:通过si RNA干扰胃癌细胞中GM130的表达水平,用Lipofectamine 2000将GM130-si RNA转染入MKN-45细胞。... 详细信息

目的:初步探讨沉默高尔基体基质蛋白130(golgi matrix protein 130,GM130)基因对胃癌细胞MKN-45 O-糖基化及细胞粘附能力的影响。方法:通过si RNA干扰胃癌细胞中GM130的表达水平,用Lipofectamine 2000将GM130-si RNA转染入MKN-45细胞。实验分为GM130-si RNA组、阴性对照组和空白对照组。分别用q RT-PCR和Western blot检测转染后各组中GM130、N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(polypeptide N-acetylgalactosaminyl transferase 2,pp Gal NAc-T2)、核心1β3半乳糖基转移酶(core 1 synthase,glycoprotein-N-acetylgalactosamine 3-β-galactosyltransferase1,C1Gal-T1)、β-半乳糖α-2,3-唾液酸转移酶1(beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase,ST3Gal-1)m RNA和蛋白表达的变化。应用凝集素流式细胞术检测3组细胞中α2,3唾液酸残基糖链结构的表达水平。肿瘤细胞与内皮细胞粘附实验及基质胶粘附实验检测细胞粘附能力。结果:q RT-PCR和Western blot结果显示GM130基因与蛋白水平明显受到抑制,表明转染成功;GM130-Si RNA组C1Gal-T1、ST3Gal-1的m RNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),pp Gal NAc-T2在3组中无明显变化(P>0.05),α2,3唾液酸糖链结构的表达量降低(P<0.05),细胞粘附能力下降(P<0.05)。结论:在MKN-45细胞中,下调GM130后,可能通过下调C1Gal-T1、ST3Gal-1的表达影响胃癌细胞O-糖基化,降低肿瘤细胞粘附能力。

关键词：沉默高尔基体基质蛋白130 RNA干扰胃癌糖基化粘附

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尿素通道蛋白B基因敲除小鼠海马精氨酸酶Ⅰ和NO水平降低

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中国组织化学与细胞化学杂志 2017年第1期26卷 13-17页

作者：侯良绢冉建华夏菁程创重庆三峡医药高等专科学校基础医学部解剖学教研室万州404120 重庆市抗肿瘤天然药物工程技术研究中心万州404120 重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心重庆400016

目的探讨尿素通道蛋白B(urea transporter B,UT-B)与海马内精氨酸酶Ⅰ(arginase Ⅰ,Arg Ⅰ)和一氧化氮(nitri oxide,NO)水平的关系。方法免疫组织化学染色和免疫印迹检测Arg Ⅰ在野生型(wild type,WT)和UT-B基因敲除(knockout,KO)小鼠... 详细信息

目的探讨尿素通道蛋白B(urea transporter B,UT-B)与海马内精氨酸酶Ⅰ(arginase Ⅰ,Arg Ⅰ)和一氧化氮(nitri oxide,NO)水平的关系。方法免疫组织化学染色和免疫印迹检测Arg Ⅰ在野生型(wild type,WT)和UT-B基因敲除(knockout,KO)小鼠海马的表达,NO检测试剂盒测定两型小鼠海马NO水平。结果与野生型小鼠相比,UT-B基因敲除小鼠海马Arg Ⅰ阳性细胞数量减少,染色弱,Arg Ⅰ和NO水平降低。结论海马内UT-B对Arg Ⅰ水平和NO生成具有调节作用。

关键词：精氨酸酶Ⅰ 小鼠海马一氧化氮

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枸杞多糖对受X射线照射小鼠外周血象及骨髓单个核细胞的影响

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辐射防护 2016年第4期36卷 218-223,231页

作者：李文波庞华周静吴宏姜蓉重庆医科大学附属第一医院核医学科重庆400016 重庆医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室重庆400016

利用直线加速器全身均匀一次性照射昆明小鼠,建立放射损伤模型,经腹腔分别注射生理盐水(NS)、枸杞多糖(LBP)50、100和200 mg/kg,连续注射观察14天,计数小鼠外周血WBC、RBC、PLT及骨髓单个核细胞(BMNCs),检测BMNCs的细胞周期、凋亡率及BM... 详细信息

利用直线加速器全身均匀一次性照射昆明小鼠,建立放射损伤模型,经腹腔分别注射生理盐水(NS)、枸杞多糖(LBP)50、100和200 mg/kg,连续注射观察14天,计数小鼠外周血WBC、RBC、PLT及骨髓单个核细胞(BMNCs),检测BMNCs的细胞周期、凋亡率及BMNCs表面黏附分子CD49d和CD44的表达水平。结果表明,照射后小鼠表现为饮水、进食减少,行动缓慢、嗜睡,毛发凌乱,光泽性差,说明放射损伤模型建立成功;在相同时间点下,NS组与正常对照组相比,外周血WBC、RBC、PLT及BMNCs细胞计数明显减少(p<0.05)、BMNCs的细胞增殖能力明显减弱(p<0.05)、S期细胞比例显著减少(p<0.05)、G_0/G_1期细胞比例显著增加、BMNCs的细胞凋亡率明显增多(p<0.05)、黏附分子CD49d和CD44表达明显减少(p<0.05);而各LBP组与NS组相比,外周血各项指标、BMNCs细胞计数明显增多(p<0.05)、BMNCs细胞的增殖能力明显增强(p<0.05)、S期细胞比例显著增多(p<0.05)、G_0/G_1期细胞比例显著减少、细胞凋亡率明显减少(p<0.05)、黏附分子CD49d、CD44表达明显增加(p<0.05)。以上结果说明,LBP可能通过加速BMNCs细胞周期由G_0/G_1期向S期转换、降低BMNCs细胞凋亡率,提高放射损伤小鼠BMNCs细胞的增殖能力,进而上调细胞表面黏附分子CD49d和CD44的表达,来促进辐射损伤小鼠造血功能的恢复。

关键词：枸杞多糖放射损伤骨髓单核细胞细胞周期细胞凋亡

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脑出血后脑组织中水通道蛋白4的定位分布变化

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中国组织化学与细胞化学杂志 2016年第1期25卷 23-29页

作者：邱国平孙善全卓飞徐进汪克建重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016

目的观察脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后大鼠脑组织中水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)的定位分布变化,以探讨AQP4在出血性脑水肿发生发展中的作用。方法 SD雄性大鼠随机分为假手术(sham)组和ICH组(ICH后1d、3d、7d),采用自体血... 详细信息

目的观察脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后大鼠脑组织中水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)的定位分布变化,以探讨AQP4在出血性脑水肿发生发展中的作用。方法 SD雄性大鼠随机分为假手术(sham)组和ICH组(ICH后1d、3d、7d),采用自体血注入法建立大鼠ICH动物模型,干湿重法检测脑水含量变化,透射电镜检测组织结构病理变化,免疫荧光双标记检测AQP4的定位分布变化。结果 ICH后1d、3d出血侧脑组织明显水肿,ICH后1d血肿周围组织结构破坏最为明显,可见毛细血管内皮细胞肿胀及血管周围间隙增宽等改变;免疫荧光结果显示,ICH后脑组织中,AQP4在血肿周围组织、外胶质界膜、内胶质界膜等与水转运密切相关的极性表达部位,其免疫反应发生变化;而在穹窿下器、齿状回等AQP4的非极性表达部位,AQP4的免疫反应无明显变化。结论结果表明,ICH后病理改变主要影响AQP4的极性表达非极性表达则不受影响。由此提示,AQP4极性表达变化可能促进出血性脑水肿的发展。

关键词：水通道蛋白脑出血脑水肿极性表达

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维生素D受体与毛发疾病

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临床皮肤科杂志 2016年第1期45卷 76-79页

作者：赵恒光易永芬重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)是一种细胞核受体,广泛存在于人体各组织,在配体1,25(OH)2D3作用下结合于靶基因DNA启动调节区的Vit D应答元件(vitamin D response element,VDRE),启动下游基因的转录。VDR与毛发生长密切相关。最... 详细信息

维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)是一种细胞核受体,广泛存在于人体各组织,在配体1,25(OH)2D3作用下结合于靶基因DNA启动调节区的Vit D应答元件(vitamin D response element,VDRE),启动下游基因的转录。VDR与毛发生长密切相关。最近研究显示,VDR参与了cWnt、Shh、mTOR、TGF-β、Hairless等信号通路之间的相互作用,共同调节毛囊干细胞的增殖分化和毛囊的周期循环过程,并且VDR的基因多态性也在部分毛发疾病中起重要作用。目前,针对VDR及相关信号通路的靶向药物在实验室和临床研究中也显示出了对毛发疾病治疗的良好前景。该文就近年来关于VDR及相关信号通路在常见毛发疾病中的作用机制进行简要综述,以期为后续研究提供基础。

关键词：维生素D 维生素D受体毛发毛囊干细胞

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对CUS抑郁症大鼠模型海马齿状回突触改变的体视学研究

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第三军医大学学报 2016年第13期38卷 1506-1511页

作者：张杨梁芯唐静高原黄春霞蒋林綦英强朱殷青唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室、干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院老年科重庆400016 重庆医科大学基础医学院生理学教研室重庆400016

目的运用无偏体视学方法定量研究慢性不可预知应激(chronic unpredictable stress,CUS)模型大鼠海马DG体积、DG突触密度、突触总数的改变情况。方法筛选4~5周龄雄性SD大鼠分为对照组(n=15)和CUS组(n=23)。CUS组大鼠通过孤养并结合慢性... 详细信息

目的运用无偏体视学方法定量研究慢性不可预知应激(chronic unpredictable stress,CUS)模型大鼠海马DG体积、DG突触密度、突触总数的改变情况。方法筛选4~5周龄雄性SD大鼠分为对照组(n=15)和CUS组(n=23)。CUS组大鼠通过孤养并结合慢性不可预知应激方式建立模型,对照组每5只为1笼,正常喂养。建模期间,每周进行糖水偏好试验。建模4周后,结合糖水偏好试验、旷场实验、高架十字迷宫实验对两组大鼠行为学表现进行评估。随后运用现代体视学与免疫组织化学相结合的方法测量两组大鼠海马DG体积、DG突触密度和突触总数。结果经过4周CUS干预后,CUS组大鼠与对照组相比,体质量显著降低(P<0.05),糖水偏好显著下降(P<0.05);旷场实验中央区域路程、中央路程比和中央时间比显著降低(P<0.05)。CUS组大鼠海马DG突触密度[(0.48±0.13)/μm^3]和突触总数(6.713 5×10~8)较对照组大鼠[突触密度(0.15±0.03)/μm^3,突触总数(2.103 3×10~9)]显著下降(P<0.05)。结论抑郁症模型大鼠海马DG的突触总数减少、突触密度减小,表明海马齿状回突触改变可能是抑郁症发病的重要神经结构基础之一。

关键词：抑郁症大鼠海马齿状回突触体视学

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