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第四届吴宪吴瑞国际学术研讨会、第九届全国医学生物化学与分子生物学、第六届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术讨论会

作者：谢云鹏隋琳琳崔丹李英华马艳妮孔英大连医科大学基础医学院生化教研室辽宁省大连市旅顺南路西段9号大连医科大学

哺乳动物的胚胎着床是一个极其复杂而又精细的过程,其需要子宫内膜和胚胎在时空上的同步协调.为了使胚胎着床成功,需要通过特异黏附分子的出现,OPN(Osteopontin,骨桥蛋白)是从一种分泌型磷蛋白,与子宫内膜感受态的形成、胚胎发育及着床... 详细信息

哺乳动物的胚胎着床是一个极其复杂而又精细的过程,其需要子宫内膜和胚胎在时空上的同步协调.为了使胚胎着床成功,需要通过特异黏附分子的出现,OPN(Osteopontin,骨桥蛋白)是从一种分泌型磷蛋白,与子宫内膜感受态的形成、胚胎发育及着床的过程密切相关.FOXM1(Forkhead box M1,叉头框蛋白M1)属于Fox转录家族因子,调节着肿瘤细胞的增殖与凋亡.现已证明,胚胎着床与肿瘤侵袭的过程极其相似.所以,我们认为FOXM1也极有可能参与了胚胎着床这一过程.本课题通过以下几个方面进行了研究：1、FOXM1在人与小鼠子宫内膜组织中的表达、分布;2、雌孕激素调控FOXM1在小鼠子宫内膜和人子宫内膜细胞中的表达;3、OPN调控FOXM1在HEC-1A细胞中的表达与定位,进而影响HEC-1A的增殖;4、EGF通过调控FOXM1的表达影响JAR细胞的侵袭与迁移结果证实：FOXM1在人的子宫内膜变化过程中发挥作用且可影响小鼠胚胎着床;并发现雌孕激素可以对FOXM1起相反调控rhOPN可以通过p38,AKT和ERK1/2信号通路调控FOXM1表达,进而影响HEC-1A的增殖;EGF通过ERK1/2信号通路调控FOXM1,进而影响JAR细胞的侵袭与转移能力

关键词： FOXM1 胚胎着床增殖侵袭

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高尔基体基质蛋白130、14-3-3ζ、整合素α3在中、低分化胃癌组织的表达及意义

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重庆医科大学学报 2014年第12期39卷 1679-1685页

作者：陈婕牟玲易永芬重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的:检测高尔基体基质蛋白130(Golgi matrix protein 130,GM130)、14-3-3 zeta(14-3-3ζ)、整合素α3(integrin alpha3,Integrinα3)在正常胃组织和中、低分化胃癌组织中的表达,并由此探讨其与胃癌的关系。方法:运用免疫组织化学检测(s... 详细信息

目的:检测高尔基体基质蛋白130(Golgi matrix protein 130,GM130)、14-3-3 zeta(14-3-3ζ)、整合素α3(integrin alpha3,Integrinα3)在正常胃组织和中、低分化胃癌组织中的表达,并由此探讨其与胃癌的关系。方法:运用免疫组织化学检测(strept avidin-biotin complex,SABC)法分别检测临床收集的84例胃癌患者的胃癌组织和正常胃组织(距癌肿边缘5 cm以上的胃组织)GM130、14-3-3ζ、Integrinα3的表达情况,并结合临床病理资料进行分析;用RT-PCR和Western blot分别检测42例胃癌(低分化胃癌24例,中分化胃癌18例)和42例正常胃组织GM130、14-3-3ζ、Integrinα3的m RNA和蛋白表达情况。结果:(1)GM1301、14-3-3ζ2、Integrinα33在胃癌组织中的表达阳性率分别为88.1%、90.5%、95.2%,明显高于上述各指标在正常胃组织上的阳性表达率(52.4%、27.4%、42.9%);低分化胃癌组上述3个指标的表达较中分化胃癌组高,且2组间差异有统计学意义(P1=0.000、P2=0.007、P3=0.000)。Spearman等级相关性分析显示,胃癌中GM130、14-3-3ζ、Integrinα3之间表达呈两两正相关(P<0.05)。(2)GM130、14-3-3ζ、Integrinα3的表达均与年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤直径、肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移无关(P>0.05);而与肿瘤病理组织学分级及临床分期有关(P<0.05)。(3)RT-PCR及Western blot结果显示GM130、14-3-3ζ、Integrinα3 m RNA和蛋白质的表达在胃癌组较正常胃组织组高,低分化胃癌组较中和分化胃癌组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GM130的异常表达可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用。

关键词：胃癌高尔基体基质蛋白130 14-3-3ζ蛋白整合素α3

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双功能RGD-R8修饰阿霉素脂质体的制备及其体外评价

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第三军医大学学报 2014年第20期36卷 2103-2107页

作者：何笑冬舒小镭李少林重庆医科大学基础医学院放射医学教研室重庆400016

目的制备串联的RGD-R8肽修饰阿霉素(DOX)脂质体(RGD-R8-LP-DOX),对其理化性质进行表征,并研究脂质体与乳腺癌MCF-7细胞的亲和力和增殖抑制作用。方法采用薄膜分散法制备RGD-R8-LP-DOX,研究脂质体的形态、粒径、电位以及包封率;定量细胞... 详细信息

目的制备串联的RGD-R8肽修饰阿霉素(DOX)脂质体(RGD-R8-LP-DOX),对其理化性质进行表征,并研究脂质体与乳腺癌MCF-7细胞的亲和力和增殖抑制作用。方法采用薄膜分散法制备RGD-R8-LP-DOX,研究脂质体的形态、粒径、电位以及包封率;定量细胞摄取实验研究乳腺癌MCF-7细胞对RGD-R8-LP的摄取效率以及对脂质体摄取的影响因素。定性共聚焦实验观察肿瘤细胞对脂质体的摄取。MTT实验研究RGD-R8-LP-DOX对乳腺癌MCF-7细胞的细胞毒性。结果 RGD-R8-LP-DOX的粒径为(115.8±11.5)nm,电位为(23.45±4.68)mV,阿霉素的包封率为95.6%。细胞摄取实验结果显示,RGD-R8-LP在4 h摄取效率是2 h的1.75倍,差异有统计学意义(P<0.05);MCF-7细胞在与脂质体共同孵育4 h后对RGD-R8-LP的摄取效率分别是R8-LP、RGD-LP和LP的2.1倍、2.9倍和3.8倍,差异有统计学意义(P<0.01);RGD-R8-LP-DOX与乳腺癌MCF-7细胞孵育24 h后的存活率是48 h的1.8倍,差异有统计学意义(P<0.05);在给药48 h后,R8-LP-DOX、RGD-LP-DOX和LP-DOX的细胞存活率分别是RGD-R8-LP-DOX组的1.6倍、1.8倍和2.4倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论整合素受体特异性配体RGD和细胞穿膜肽R8串联的RGD-R8肽修饰阿霉素脂质体能够有效穿透肿瘤细胞膜进入肿瘤细胞,是一种潜在高效的乳腺癌给药系统。

关键词：整合素受体细胞穿膜肽脂质体乳腺癌

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电击死大鼠骨骼肌肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1-mRNA表达的法医学研究

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重庆医科大学学报 2014年第1期39卷 39-42页

作者：袁增琼万立华重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016

目的 :研究电击死早期骨骼肌肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1(muscle-specific RING finger protein 1,MuRF1)-mRNA随时间的变化归律及其在鉴别生前电击死与死后电击中的应用。方法:60只健康的Wistar大鼠,雌雄不限,每组20只。电击死组大... 详细信息

目的 :研究电击死早期骨骼肌肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1(muscle-specific RING finger protein 1,MuRF1)-mRNA随时间的变化归律及其在鉴别生前电击死与死后电击中的应用。方法:60只健康的Wistar大鼠,雌雄不限,每组20只。电击死组大鼠用220 V交流电的两极分别连接右前肢与左后肢,通电90 s致死,于电击死后0、1、3、6 h取材;死后电击组大鼠采用颈椎脱臼法处死后,分别于0、1、3、6 h电击90 s取材;空白对照组大鼠直接颈椎脱臼法处死,不进行电击,于死后0、1、3、6 h取材。用RT-PCR技术检测各组大鼠左后肢腓肠肌、胫骨前肌MuRF1-mRNA表达水平。结果:电击死组大鼠左后肢腓肠肌MuRF1-mRNA表达量于死后即刻升高,1、3 h下降,与空白对照组相比差异有统计学意义(P=0.000、P=0.000、P=0.000),6 h低于空白对照组(P=0.925);电击死组大鼠左后肢胫骨前肌MuRF1-mRNA表达量于死后即刻升高,1 h达峰值,3 h开始降低,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P=0.000、P=0.000、P=0.000);死后电击组左后肢腓肠肌、胫骨前肌较空白对照组高,但升高不如电击死组显著;电击死组、死后电击组左后肢胫骨前肌MuRF1-mRNA含量均较腓肠肌高。结论:大鼠电击死6 h内左后肢骨骼肌MuRF1-mRNA在Ⅰ型肌纤维、Ⅱ型肌纤维中的表达量不同,且其表达具有时间规律性,可为电击死早期死亡时间推断提供一定的参考依据,还可以作为生前电击死与死后电击鉴别的辅助指标。

关键词：法医病理学电击死骨骼肌肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1

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嗜尸性昆虫群落演替及其法医学应用研究进展

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中国法医学杂志 2015年第2期30卷 166-170页

作者：吕宙唐瑞杨永强郝建文万立华重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016 重庆市公安局万盛区分局刑侦支队重庆400800 重庆警察学院刑事科学技术系重庆401331

法医昆虫学是近年来法庭科学中发展较快的学科之一,而利用昆虫学证据来推断死亡时间或称死后经历时间(PMI)是其最主要的应用。当尸体PMI达一周以上,无法通过蝇蛆生长发育历期来推算时,仍可以借助嗜尸性昆虫群落演替规律来判断。嗜尸性... 详细信息

法医昆虫学是近年来法庭科学中发展较快的学科之一,而利用昆虫学证据来推断死亡时间或称死后经历时间(PMI)是其最主要的应用。当尸体PMI达一周以上,无法通过蝇蛆生长发育历期来推算时,仍可以借助嗜尸性昆虫群落演替规律来判断。嗜尸性昆虫群落演替规律与尸体腐败过程息息相关,法医昆虫学家通过对尸体腐败进行人为分期,能够辨别出不同的演替波次,从而达到推断PMI的目的。本文对嗜尸性昆虫群落演替研究与应用进行了综述,并分析了未来研究趋势,希望能为相关研究和实践应用提供参考。

关键词：法医昆虫学昆虫群落演替死亡时间推断

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过表达Bmi-1基因对乳腺癌细胞株BT474侵袭转移能力的影响

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第三军医大学学报 2014年第21期36卷 2187-2190页

作者：李海玉宋方洲卜友泉易发平朱慧芳汪长东刘革力武向梅重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院生理学教研室重庆400016

目的建立过表达Bmi-1的乳腺癌稳定细胞株,检测过表达Bmi-1对该肿瘤细胞株侵袭转移能力的影响,探讨Bmi-1与乳腺癌转移的相关性。方法根据GenBank中人源Bmi-1的mRNA序列,设计引物,构建Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,将其转染乳腺癌细胞株B... 详细信息

目的建立过表达Bmi-1的乳腺癌稳定细胞株,检测过表达Bmi-1对该肿瘤细胞株侵袭转移能力的影响,探讨Bmi-1与乳腺癌转移的相关性。方法根据GenBank中人源Bmi-1的mRNA序列,设计引物,构建Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,将其转染乳腺癌细胞株BT474,G418筛选建立过表达Bmi-1的稳定细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot检测Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平,Matrigel和Transwell侵袭小室模型检测转染和未转染BT474细胞体外侵袭和转移能力的变化,荧光定量PCR和Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的变化。结果成功构建人源Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,转染BT474细胞后,获得稳定转染细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,与空载体组相比,实验组Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。Bmi-1过表达后,迁移能力明显增强、穿膜细胞数明显增多,MMP-2、MM-9 mRNA和蛋白表达水平显著增强(P<0.05)。结论过表达Bmi-1稳定细胞株构建成功,Bmi-1表达上调可显著提高乳腺癌细胞的体外侵袭转移能力。

关键词：乳腺癌 Bmi-1 BT474 过表达侵袭转移

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结核分枝杆菌Zmp1基因原核表达载体的构建及表达鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第6期30卷 573-575,580页

作者：张继明杨春何永林穆柳青张春燕樊宇徐蕾重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-Zmp1;转化入大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot法鉴定。结果PCR法扩增出Zmp1基因;重组表达质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确;表达的重组Zmp1融合蛋白相对分子质量(Mr)约为94 000,大小与预期融合蛋白一致;重组Zmp1融合蛋白可与His标签单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了Zmp1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得重组Zmp1融合蛋白表达。

关键词：结核分枝杆菌 Zmp1 原核表达

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血红素加氧酶1.2在髓母细胞瘤中的表达及意义

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重庆医科大学学报 2014年第3期39卷 337-340页

作者：唐俐何密斯郑维萍陈黎李昱重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院实验教学管理中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的:探讨血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1和HO-2在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)中的表达及意义。方法:采用SP免疫组织化学法检测41例MB组织和23例对照脑组织标本中HO-1和HO-2的表达,分析HO-1和HO-2的表达相关性及其与MB的临床特... 详细信息

目的:探讨血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1和HO-2在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)中的表达及意义。方法:采用SP免疫组织化学法检测41例MB组织和23例对照脑组织标本中HO-1和HO-2的表达,分析HO-1和HO-2的表达相关性及其与MB的临床特征(性别、年龄、病理类型和肿瘤部位)之间的关系。结果:在41例MB中,HO-1和HO-2的阳性表达率分别为78.0%(32/41)和73.2%(30/41),高于对照脑组织(P=0.002、0.001),且二者在MB中的表达呈正相关(rs=0.477,P=0.009);HO-1和HO-2在MB中的表达与患者的性别、年龄和肿瘤部位等临床特征均无相关性,差异无统计学意义(HO-1:χ2=0.118、0.000、2.903,P=0.732、1.000、0.424;HO-2:χ2=2.737、1.191、1.169,P=0.098、0.662、0.945),但HO-1和HO-2在不同组织病理学类型的MB中的表达具有统计学差异(HO-1:χ2=12.570,P=0.002;HO-2:χ2=6.677,P=0.044)。结论:HO-1和HO-2的高表达在MB的生长中发挥重要作用。HO-1和HO-2的表达与MB的组织病理学分型密切相关,提示HO-1和HO-2可作为评估患者病情和预后的新指标及治疗新靶点。

关键词：血红素加氧酶髓母细胞瘤免疫组化

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NO信号通过I-kappaB磷酸化激活人肝细胞内源凝血因子Ⅷ重表达的调控作用

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吉林大学学报（医学版） 2014年第6期40卷 1155-1160页

作者：温泉何玉霞周云飞王娟张军重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:建立一氧化氮(NO)前体化合物L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子Ⅷ(FⅧ)重表达的分子细胞生物学模型,探讨NO信号激活L02中内源FⅧ重表达的调控通路及分子基础。方法:取对数生长期L02细胞随机分为对照组、加药组(L-精氨酸)、抑制... 详细信息

目的:建立一氧化氮(NO)前体化合物L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子Ⅷ(FⅧ)重表达的分子细胞生物学模型,探讨NO信号激活L02中内源FⅧ重表达的调控通路及分子基础。方法:取对数生长期L02细胞随机分为对照组、加药组(L-精氨酸)、抑制剂组(L-NAME和L-精氨酸)和抑制剂对照组(L-NAME),分别培养12、24、36、48和60h,采用流式细胞术检测作用48h后L02中人FⅧ蛋白的表达,Griess法检测不同时间点L02细胞内NO水平,RT-PCR法检测L02中人FⅧ基因、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因、核转录因子(NF-κB1)基因和核因子κB(免疫球蛋白κ轻链基因增强子)抑制蛋白α亚基(I-κB alpha)基因的转录水平,Western blotting法检测L02中人磷酸化I-kappaB(磷酸化I-κB)表达水平。结果:流式细胞术检测,加L-精氨酸培养48h后L02中出现人FⅧ蛋白的表达。Griess法检测,加药组L02在3、6和12h内NO表达水平显著增加(P<0.05),随后又基本恢复到正常水平,正常组、抑制剂组和抑制剂对照组L02细胞内NO水平无变化;RT-PCR检测,加药组L02中人FⅧmRNA转录;对照组、抑制剂组和抑制剂对照组均无人FⅧmRNA的转录,加药组iNOS、NF-κB1和I-κB alpha转录水平均上升(P<0.05),对照组、抑制剂组和抑制剂对照组上述基因转录水平均无明显变化。Western blotting法检测,加入L-精氨酸后,磷酸化I-κB表达水平明显增加(P<0.05),其他组则无此变化。结论:L-精氨酸通过NO信号通路进而激活I-κB磷酸化,导致人FⅧ基因启动子上游调控相关的转录因子NF-κB1进入胞核从而激活人离体肝细胞L02中内源人FⅧ的表达。

关键词：人凝血因子Ⅷ L-精氨酸一氧化氮信号通路磷酸化 human coagulation factor Ⅷ

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uPA合成抑制剂阿米洛利对卵巢癌细胞迁徙、侵袭能力的影响

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解剖科学进展 2015年第5期21卷 536-538页

作者：宗志红赵林孟晓娜陈说赵杨中国医科大学基础医学院生化教研室沈阳110122 辽宁省肿瘤医院乳腺外科沈阳110042 中国医科大学附属第一医院妇科沈阳110001

目的探索urokinase-type plasminogen activator(u PA)合成抑制剂阿米洛利(氨氯吡咪,Amiloride)在卵巢癌细胞迁徙、侵袭过程中的作用。方法检测阿米洛利处理后卵巢癌细胞OVCAR3的迁徙及侵袭能力变化,RT-RCR及Western Blotting检测u PA... 详细信息

目的探索urokinase-type plasminogen activator(u PA)合成抑制剂阿米洛利(氨氯吡咪,Amiloride)在卵巢癌细胞迁徙、侵袭过程中的作用。方法检测阿米洛利处理后卵巢癌细胞OVCAR3的迁徙及侵袭能力变化,RT-RCR及Western Blotting检测u PA表达水平变化。结果卵巢癌细胞OVCAR3经阿米洛利处理后u PA m RNA及蛋白表达水平及细胞迁徙、侵袭能力显著下降,且呈浓度依赖性。结论 u PA合成抑制剂阿米洛利可能通过下调u PA表达水平抑制卵巢癌细胞迁徙及侵袭,是一种潜在的抑制卵巢癌发展的药物。

关键词：卵巢癌 u PA 阿米洛利细胞迁徙细胞侵袭

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