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Sulfiredoxin-1通过调节peroxiredoxins表达提高大鼠星形胶质细胞抗氧化作用

基础医学与临床 2014年第9期34卷 1193-1198页

作者：周杨周云川巫静娴喻姗姗赵涌重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨内源性抗氧化小分子蛋白Sulfiredoxin-1（Srxn1）对H2O2诱导的星形胶质细胞的抗氧化作用以及对内源性氧化应激防御系peroxiredoxins的调节作用.方法 Srxn1干扰慢病毒载体转染体外培养的大鼠原代星形胶质细胞;构建H2O2氧化应激... 详细信息

目的探讨内源性抗氧化小分子蛋白Sulfiredoxin-1（Srxn1）对H2O2诱导的星形胶质细胞的抗氧化作用以及对内源性氧化应激防御系peroxiredoxins的调节作用.方法 Srxn1干扰慢病毒载体转染体外培养的大鼠原代星形胶质细胞;构建H2O2氧化应激模型,采用LDH方法检测细胞损伤程度,用超氧化物歧化酶（SOD）分析细胞内氧化应激状态;Western blot检测Srxn1的表达与Prdx Ⅰ～Ⅳ和Prdx-SO2/3H（过氧化Prdx）活性的关系.结果 1）ShSrxn1干扰后,Srxn1蛋白水平下调59.2％（P＜0.01）,基因水平下调63.6％（P＜0.01）.2）干扰Srxn1增加H2O2后LDH漏出率（P＜0.01）并使氧化应激损伤显著加重、使Prdx Ⅰ ～Ⅳ的表达降低,Prdx-SO2/3H的表达显著增高（P＜0.01或P＜0.05）.结论 Srxn1减轻H2O2诱导的星形胶质细胞的氧化应激损伤,并可能是通过调节Prdxs的活性来完成的.

关键词： Sulfiredoxin-1 干扰星形胶质细胞 H2O2 peroxiredoxin

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RNAi干扰Shp2基因对K562细胞增殖的抑制效应

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中国细胞生物学学报 2014年第1期36卷 75-80页

作者：王灿蔚陶崑齐杰玉邓一平重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆40016 重庆医科大学实验中心重庆40016

通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因,构建重组质粒,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化... 详细信息

通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因,构建重组质粒,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化及细胞凋亡率,探索该基因的沉默表达对K562细胞的抑制作用。结果表明,该实验成功构建出能明显下调Shp2基因及其蛋白表达的重组质粒,转染K562细胞后,其bcr/abl融合基因及融合蛋白水平均明显降低、K562细胞增殖活力被抑制(P<0.05)、细胞凋亡水平上升(P<0.05)。与对照组相比,其差异具有统计学意义。提示,重组质粒可显著降低bcr/abl基因及蛋白的表达,抑制K562细胞的生物学效应,表明在细胞水平沉默Shp2有可能成为治疗慢性粒细胞白血病的有效靶点。

关键词：慢性粒细胞白血病(CML) bcr abl Shp2 K562细胞

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幽门螺杆菌感染对小鼠食道下端菌群的影响

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南方医科大学学报 2014年第9期34卷 1241-1247页

作者：田志颖杨致邦黄微微高继业周雪朱黎黎重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 重庆医科大学临床医学2007级七年制儿科1班重庆400016

目的通过小鼠动物模型,检测幽门螺杆菌感染后食道下端菌群的变化,探讨其与食道下端疾病发生的关系。方法将30只BALB/C小鼠随机均分为阴性对照组和感染组。感染组通过灌喂幽门螺杆菌菌液建立动物感染模型,两组小鼠均在末次灌喂菌液4周后... 详细信息

目的通过小鼠动物模型,检测幽门螺杆菌感染后食道下端菌群的变化,探讨其与食道下端疾病发生的关系。方法将30只BALB/C小鼠随机均分为阴性对照组和感染组。感染组通过灌喂幽门螺杆菌菌液建立动物感染模型,两组小鼠均在末次灌喂菌液4周后同时处死,取食道下端组织提取细菌的DNA,以原核生物16S rDNAV6区通用引物采用聚合酶链反应-变性梯度凝胶技术(PCR-DGGE)对V6区进行扩增,用Quantity-One 1-DAnalysis software.对DGGE图谱进行菌群分析,并将DGGE图谱上的组间差异条带用16S rDNAV6区引物分别扩增后,DNA测序,BLAST比对分析。结果 DGGE指纹图谱分析显示,实验组DNA条带数量极显著高于对照组(P<0.01),多样性指数、丰富度指数均显著高于对照组(0.01

关键词：食道下端菌群幽门螺杆菌感染聚合酶链反应-变形梯度凝胶电泳技术

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乙酰化酶抑制剂Garcinol对雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用与机制

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第二军医大学学报 2014年第7期35卷 714-721页

作者：叶霞邓华瑜张力赵敬袁磊重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的研究乙酰化酶抑制剂Garcinol对雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化及凋亡抑制的影响及机制。方法应用CCK-8法检测Garcinol对17β-雌二醇(17β-E2)促MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;细胞免疫荧... 详细信息

目的研究乙酰化酶抑制剂Garcinol对雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化及凋亡抑制的影响及机制。方法应用CCK-8法检测Garcinol对17β-雌二醇(17β-E2)促MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;细胞免疫荧光检测NF-κB/p65核转运情况;RT-PCR检测cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xLmRNA水平;蛋白质印迹分析检测乙酰化(ac)-H3、ac-H4、NF-κB/ac-p65、cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xL蛋白的表达水平。结果 Garcinol能抑制17β-E2促细胞增殖作用,使细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率增加(P<0.01);17β-E2促进MCF-7细胞ac-H3、ac-H4、NF-κB/ac-p65表达水平(P<0.01,P<0.05,P<0.01),Garcinol能抑制17β-E2对ac-H3、NF-κB/acp65的表达促进作用(P<0.01),对ac-H4影响无统计学意义;17β-E2促进NF-κB/p65核转运相应受到Garcinol抑制(P<0.01);17β-E2促进cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xL的mRNA转录和蛋白表达水平的作用受到Garcinol抑制(P<0.05)。结论17β-E2促MCF-7细胞增殖和凋亡抑制作用与组蛋白和非组蛋白NF-κB/p65乙酰化水平增高有关,乙酰化酶抑制剂Garcinol通过降低乙酰化水平对雌激素促乳腺癌细胞增殖具有明显抑制作用,降低NF-κB通路的ac-p65蛋白水平,从而下调cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xL可能是其重要机制。

关键词： Garcinol 乙酰化作用组蛋白类 NF-κB 乳腺肿瘤

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体外磁场定向迁移的间充质干细胞对脊髓损伤的治疗和GAP-43的表达

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第三军医大学学报 2014年第12期36卷 1284-1290页

作者：郑希李成鹏王顺和重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的探讨体外磁场定向迁移尾静脉注射的SPIO标记的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对大鼠脊髓损伤治疗的影响以及对脊髓中生长相关蛋白-43(growth-associated protein,GAP-43)表达的影响。方法体外培... 详细信息

目的探讨体外磁场定向迁移尾静脉注射的SPIO标记的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对大鼠脊髓损伤治疗的影响以及对脊髓中生长相关蛋白-43(growth-associated protein,GAP-43)表达的影响。方法体外培养SD大鼠BMSCs,流式细胞仪检测其免疫表型,超顺磁氧化铁颗粒(superparamagetic iron oxieds,SPIO)标记BMSCs,普鲁士蓝染色测定SPIO标记率,台盼蓝染色检测标记细胞存活率,CCK-8检测标记细胞分裂增殖能力,Western blot检测标记细胞干细胞标记物Nestin及GFAP表达。建立大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)模型,尾静脉注射移植细胞,对细胞移植后大鼠进行BBB评分。普鲁士蓝染色观察脊髓组织内标记细胞,TTC染色观察脊髓缺血损伤面积,Western blot检测损伤脊髓内GAP-43表达情况。结果原代BMSCs体外能成功分离、培养、传代,且流式细胞仪检测表达间充质干细胞标记物不表达造血干细胞标记物。普鲁士蓝染色显示SPIO标记率接近100%。台盼蓝染色显示标记细胞生存率与对照组无差异(P>0.05)。CCK-8检测磁场下标记细胞增殖活性不受影响(P>0.05)。Western blot检测磁场下标记细胞表达Nestin及GFAP无差异,分化活性不受影响(P>0.05)。磁铁组大鼠BBB评分明显优于对照组(P<0.05)。普鲁士蓝染色观察磁铁组脊髓组织中BMSCs明显多于无磁铁组。TTC染色显示磁铁组缺血面积小于无磁铁组(P<0.05)。Western blot检测脊髓组织中同一时间点GAP-43表达,磁场组明显大于对照组及无磁场组(P<0.05)。结论外置磁场可以定向更多SPIO标记的BMSCs到达脊髓损伤处,使其更好地发挥修复作用且上调GAP-43的表达,利于脊髓损伤的恢复。

关键词：磁场骨髓间充质干细胞超顺磁氧化铁脊髓损伤迁移 GAP-43

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MIBG对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

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基础医学与临床 2014年第9期34卷 1221-1225页

作者：刘逢秋管小琴王娅兰苏晏重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探究间碘苄胍(MIBG)对肝癌细胞HepG2增殖的影响及其可能机制。方法细胞免疫荧光法检测HepG2细胞中精氨酸特异性单腺苷二磷酸核糖基化转移酶1(ART1)的表达。MTT比色实验检测肝癌细胞HepG2的生存率。流式细胞计数法检测细胞周期。West... 详细信息

目的探究间碘苄胍(MIBG)对肝癌细胞HepG2增殖的影响及其可能机制。方法细胞免疫荧光法检测HepG2细胞中精氨酸特异性单腺苷二磷酸核糖基化转移酶1(ART1)的表达。MTT比色实验检测肝癌细胞HepG2的生存率。流式细胞计数法检测细胞周期。Westrenblot检测ART1、RhoA、c-myc和cyclinA1的表达。结果ART1在HepG2细胞有表达。MIBG对HepG2细胞增殖抑制呈剂量依赖性(P<0.05),主要是将细胞阻滞在S期(P<0.05)。MIBG能降低ART1、RhoA、c-myc和cyclinA1的表达水平(P<0.05)。结论MIBG通过影响RhoA信号通路,下调c-myc蛋白和cyclinA1蛋白的表达,将细胞阻滞在S期,而抑制HepG2细胞的增殖。

关键词：肝癌细胞增殖单腺苷二磷酸核糖基化间碘苄胍

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miR-451调控早期糖尿病肾病小鼠肾小球肥大的机制

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重庆医科大学学报 2014年第11期39卷 1584-1589页

作者：彭睿周吉李天驹孙艳尹频彭惠民张政重庆医科大学基础医学院生物信息学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学第一附属医院感染科重庆400016 重庆医科大学实验教学中心重庆400331

目的:观察mi R-451对早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠肾脏形态学影响,探讨mi R-451在DN发病机制中的作用。方法:采用24只7周龄雄性db/db小鼠和8只正常对照db/m小鼠依次分为未处理组、空质粒组、mi R-451组及对照组。... 详细信息

目的:观察mi R-451对早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠肾脏形态学影响,探讨mi R-451在DN发病机制中的作用。方法:采用24只7周龄雄性db/db小鼠和8只正常对照db/m小鼠依次分为未处理组、空质粒组、mi R-451组及对照组。腹腔注射法进行质粒注射处理2周后,光镜下观察肾小球形态学变化,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测肾脏组织mi R-451的表达水平,Western blot和激光共聚焦检测肾脏组织中mi R-451的靶基因酪氨酸-3单氧化酶/色氨酸单氧化酶活化蛋白(tyrosine3-monooxy-genase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein,Ywhaz)及其相关的丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径中p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)及其上游激酶MKK3(MAPK kinase3)的表达水平。结果:7周龄db/db小鼠未处理组相比对照组出现高血糖且尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAE)增加,提示进入早期DN阶段,给予30 mg/(kg·d)质粒注射实验2周。光镜观察和肾小球直径测量发现,mi R-451处理组肾小球形态减小(P=0.000)。Real-time PCR检测显示mi R-451组小鼠肾脏组织中mi R-451的表达水平增高1.79倍(P=0.002),Western blot和激光共聚焦结果显示,mi R-451组较未处理组和空质粒组肾脏组织Ywhaz的表达受到下调,同时p38MAPK及上游激酶MKK3蛋白表达水平减少(P均=0.000)。结论:mi R-451可能通过直接靶向Ywhaz基因,调控MAPK途径中关键蛋白p38MAPK、MKK3的表达,从而抑制肾小球肥大,在DN发病机制中可能起着重要的作用。

关键词：糖尿病肾病微小RNA 酪氨酸-3单氧化酶/色氨酸单氧化酶活化蛋白 p38丝裂原激活的蛋白激酶

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慢性脑缺血对小鼠脑内星形胶质细胞的影响

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重庆医科大学学报 2014年第2期39卷 137-141页

作者：王凌晞刘刚贺桂琼楚亚楠宋冲周泽芬姚秋会重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016

目的:研究慢性脑缺血对小鼠脑内星形胶质细胞的影响。方法:C57小鼠,3月龄时行改良双侧颈总动脉结扎术,假手术组对照。甲苯胺蓝染色观察模型有效性。于术后1、2、4、5、6个月胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)... 详细信息

目的:研究慢性脑缺血对小鼠脑内星形胶质细胞的影响。方法:C57小鼠,3月龄时行改良双侧颈总动脉结扎术,假手术组对照。甲苯胺蓝染色观察模型有效性。于术后1、2、4、5、6个月胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组化观察小鼠脑内星形胶质细胞的病理改变。免疫印迹检测脑内GFAP表达量变化。结果:甲苯胺蓝灌注后,模型0 h组大脑冠状切面苍白色,假手术对照组呈深蓝色。慢性脑缺血后,星形胶质细胞增生,表现为细胞数量增多,胞体肿胀肥大,突起增多,变粗,变长。与假手术对照组比较,从模型2个月组开始,GFAP阳性细胞数量持续性增多,染色加深,累计光密度增强,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。免疫印迹结果显示,与假手术对照组比较,模型2、4、5、6个月组脑内GFAP表达量增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性脑缺血后星形胶质细胞出现持续性增生,可能在缺血性脑损伤后脑内的不可逆病理改变中有重要意义。

关键词：慢性脑缺血星形胶质细胞神经胶原纤维酸性蛋白小鼠

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shRNA抑制高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ基因的表达对胃癌细胞侵袭力的影响及机制

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重庆医科大学学报 2014年第3期39卷 310-317页

作者：张璐杨雅莹黄子洋易永芬重庆医科大学基础医学院病理学教研室、分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院老年科重庆400016

目的:初步分析高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi alpha-mannosidaseⅡ,GMⅡ)在低中不同分化人胃癌细胞系中的差异表达,以探讨GMⅡ在胃癌发生发展中的作用。方法:应用阳离子脂质体法将合成的靶向GMⅡ基因的pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ-1406质粒载体... 详细信息

目的:初步分析高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi alpha-mannosidaseⅡ,GMⅡ)在低中不同分化人胃癌细胞系中的差异表达,以探讨GMⅡ在胃癌发生发展中的作用。方法:应用阳离子脂质体法将合成的靶向GMⅡ基因的pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ-1406质粒载体,分别转染至低分化胃癌细胞MGC-803和中分化胃癌细胞SGC-7901中,然后荧光倒置显微镜观察并计算转染率,最后经过G418筛选出稳定转染的细胞株。应用RT-PCR和Western blot检测转染后GMⅡ和E-cadherin、α-catenin的mRNA及蛋白表达变化情况,同时利用细胞划痕实验和Transwell体外侵袭实验来测定GMⅡ被沉默后两株细胞侵袭能力的变化。结果:GMⅡ短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染胃癌MGC-803和SGC-7901细胞后GMⅡ的mRNA和蛋白表达明显抑制,而E-cadherin和α-catenin的2种因子检测结果明显升高(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,转染重组质粒pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ-1406组(GMⅡshRNA组)与对照组(空白对照组,阴性对照组)相比,GMⅡ被沉默后的胃癌细胞的侵袭能力降低(P<0.05);Transwell体外侵袭实验中GMⅡshRNA组胃癌细胞较空白对照组、阴性对照组细胞侵袭能力都明显降低,18 h穿过小室的细胞数分别为:(65±5)、(197±6)、(186±5),(72±4)、(178±4)、(184±5)个与对照组相比差别具有统计学意义(MGC-803:P=0.000,SGC-7901:P=0.000)。结论 :GMⅡ基因沉默后的胃癌细胞的侵袭能力下降,可能与上调E-cadherin、α-catenin的表达有关。

关键词：高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ 短发卡RNA 胃癌侵袭

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表达HBx的肝前体细胞的小鼠肝内移植模型的构建

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第三军医大学学报 2014年第24期36卷 2451-2454页

作者：钟沁张超何雪梅胡代曦张锡峰黄佳祎冯涛重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆3400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物研究中心重庆3400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆3400016

目的构建表达乙肝病毒X基因(HBx)的肝前体细胞,并经小鼠门静脉注射建立肝内移植模型,为进一步研究HBx对肝前体细胞的作用和影响及其在原发性肝癌发病机制中的作用奠定了基础。方法分别将表达HBx基因的重组腺病毒Ad-HBx-GFP和空载体Ad-GF... 详细信息

目的构建表达乙肝病毒X基因(HBx)的肝前体细胞,并经小鼠门静脉注射建立肝内移植模型,为进一步研究HBx对肝前体细胞的作用和影响及其在原发性肝癌发病机制中的作用奠定了基础。方法分别将表达HBx基因的重组腺病毒Ad-HBx-GFP和空载体Ad-GFP转染小鼠肝前体细胞,再经小鼠门静脉注射后3、7、14 d取血清和肝组织,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)变化情况,观察绿色荧光蛋白表达情况,免疫组织化学法观察HBx阳性染色,并取表达高峰在第7天的肝组织,进行Western blot法和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法分别检测HBx的蛋白及mRNA表达。结果成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,绿色荧光蛋白表达量、免疫组化阳性细胞数量及血清ALT均在注射后第7天达到高峰,RT-PCR及Western blot均检测到第7天14-19/Ad-HBx-GFP组小鼠肝组织目的基因及蛋白的特异性表达,与14-19/Ad-GFP组及生理盐水注射组相比结果具有统计学差异。结论成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,操作可靠,重复性好,效果稳定,不仅对探讨原发性肝癌的发生机制奠定了基础,也为肿瘤动物模型的构建提供了新的思路。

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞绿色荧光蛋白门静脉小鼠模型

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