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早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠海马结构内有髓神经纤维改变的体视学研究

第三军医大学学报 2017年第8期39卷 760-766页

作者：赵振华晁凤蕾张蕾张毅周春妮蒋林肖倩罗艳敏黄维李常琼唐炜李桃唐勇重庆医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室、干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的探讨早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠海马结构内有髓神经纤维及髓鞘的改变。方法运用Morris水迷宫方法测试10月龄APP/PS1转基因AD小鼠和同月龄野生型小鼠的空间学习和记忆能力改变的情况;运用无偏体视... 详细信息

目的探讨早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠海马结构内有髓神经纤维及髓鞘的改变。方法运用Morris水迷宫方法测试10月龄APP/PS1转基因AD小鼠和同月龄野生型小鼠的空间学习和记忆能力改变的情况;运用无偏体视学方法结合透射电子显微镜技术对各组小鼠海马结构总体积,CA1和齿状回(dentate gyrus,DG)内有髓神经纤维的总长度和总体积,以及有髓神经纤维髓鞘总体积进行三维定量研究。结果 1与野生型小鼠相比,10月龄APP/PS1转基因AD小鼠的逃避潜伏期显著性增加(P<0.05),所在象限游泳时间百分比显著减少(P<0.01),而穿台次数差异无统计学意义(P>0.05);2与野生型小鼠相比,10月龄APP/PS1转基因AD小鼠海马体积、CA1体积、DG体积均显著性减小(P<0.05,P<0.01);3与同月龄野生型小鼠相比,10月龄APP/PS1转基因AD小鼠海马CA1区和DG内有髓神经纤维的总长度差异没有统计学意义(P>0.05),但是海马CA1区和DG内有髓神经纤维的总体积显著性减小(P<0.05),髓鞘总体积也显著减小(P<0.05,P<0.01)。结论 10月龄时APP/PS1转基因AD小鼠海马CA1和DG内均存在脱髓鞘改变,可能是引起AD早期空间学习记忆能力减退的结构基础之一。

关键词：海马CA1区齿状回有髓神经纤维髓鞘体视学

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早期APP/PS1转基因AD模型小鼠海马胆碱能神经元改变的体视学研究

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第三军医大学学报 2017年第6期39卷 553-559页

作者：李常琼晁凤蕾张蕾唐静蒋林张毅周春妮黄维唐炜李桃赵振华唐勇吴宏重庆医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的应用体视学方法定量研究APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内胆碱能神经元的早期改变情况。方法 Morris水迷宫检测10月龄雌性APP/PS1双转基因AD小鼠(APP/PS1组)和同月龄同窝生雌性野生型小鼠(Wild-type组)的空间学习记忆能力。运用现... 详细信息

目的应用体视学方法定量研究APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内胆碱能神经元的早期改变情况。方法 Morris水迷宫检测10月龄雌性APP/PS1双转基因AD小鼠(APP/PS1组)和同月龄同窝生雌性野生型小鼠(Wild-type组)的空间学习记忆能力。运用现代体视学方法结合免疫组织化学方法精确定量小鼠海马各亚区的体积和胆碱能神经元的数量。结果 APP/PS1组小鼠定位航行实验中逃避潜伏期长于Wild-type组(P<0.01)。空间探索实验中,APP/PS1组小鼠穿越平台的次数及平台所在象限时间百分比均少于Wild-type组(P=0.007、0.041)。APP/PS1组小鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)的体积较Wild-type组缩小(P=0.001),而APP/PS1组小鼠海马CA1、CA2/3区的体积较Wild-type组差异无统计学意义(P=0.089、0.059)。APP/PS1组小鼠海马DG内胆碱能神经元的数量较Wild-type组显著减少(P=0.017),APP/PS1组小鼠海马CA1区、CA2/3区内胆碱能神经元较Wild-type组差异均无统计学意义(P=0.076、0.074)。结论早期APP/PS1双转基因AD小鼠海马DG内胆碱能神经元丢失,可能是AD早期出现空间学习记忆能力障碍的重要结构基础之一。

关键词：胆碱能神经元齿状回 APP/PS1双转基因AD模型小鼠体视学

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当归多糖对急性辐射损伤小鼠骨髓基质细胞及血管内皮生长因子的影响

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重庆医科大学学报 2014年第5期39卷 612-616页

作者：陈凤鸣关雪晶吴宏姜蓉重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:研究当归多糖(angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的保护作用。方法:直线加速器一次性全身均匀X射线(4.0 Gy)照射BALB/c小鼠,照射后腹腔注射不同剂量的APS或生理盐水,并于照射后第7、14、21天处死小鼠,取外周血进行常规检查;观察BMSC贴壁情况、细胞80%贴壁时间;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测VEGF mRNA的表达水平。结果:与正常组相比,辐射第7、14、21天外周血白细胞及血小板计数明显减少;BMSC贴壁细胞数少且折光性差,达80%贴壁时间明显延长;G0/G1期细胞比例及细胞凋亡率升高;VEGF mRNA的表达降低。辐射APS高剂量组和辐射APS低剂量组均能增加外周血各指标计数,BMSC贴壁细胞数增多且折光性变好,达80%贴壁时间缩短,G0/G1期细胞比例及细胞凋亡率均显著降低,VEGF mRNA的表达显著增加。结论:APS可能通过增强VEGF的表达,提高BMSC的增殖能力,减少其凋亡,从而加速机体造血功能的恢复。

关键词：辐射损伤当归多糖血管内皮生长因子骨髓基质细胞

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老年雄性APP/PS1模型小鼠大脑海马齿状回内有髓神经纤维结构的体视学研究

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重庆医科大学学报 2017年第1期42卷 79-84页

作者：朱殷青蒋林张毅周春妮晁风蕾张蕾唐静梁芯綦英强张杨唐勇重庆医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:运用现代体视学方法定量研究16月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠海马齿状回有髓神经纤维的结构改变,以期深入了解阿尔茨海默病海马的形态学改变。方法:Morris水迷宫方法测试16月龄雄性野生型小鼠和16月龄雄性APP/PS1双转基因模型小鼠... 详细信息

目的:运用现代体视学方法定量研究16月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠海马齿状回有髓神经纤维的结构改变,以期深入了解阿尔茨海默病海马的形态学改变。方法:Morris水迷宫方法测试16月龄雄性野生型小鼠和16月龄雄性APP/PS1双转基因模型小鼠的空间学习记忆能力,透射电子显微镜技术和现代体视学方法定量研究模型小鼠和野生型小鼠海马齿状回内有髓神经纤维长度、有髓神经纤维及其轴突和髓鞘体积等参数。结果:Morris水迷宫结果显示在前六天的隐蔽站台试验中模型组小鼠逃避潜伏期明显长于野生型小鼠(分组效应:F=9.952,P=0.008;时间效应:F=3.082,P=0.023;时间分组交互作用:F=0.312,P=0.873),在第七天的空间探索试验中模型小鼠穿台次数明显少于野生型小鼠(F=2.961,P=0.011),原平台所在象限停留时间百分比明显小于野生型小鼠(F=0.090,P=0.002)。虽然两组小鼠海马体积没有统计学差异,但是DG区内有髓神经纤维的超微结构均存在退行性改变,体视学定量分析结果显示在0.7~1.2μm直径段模型组小鼠海马DG内有髓神经纤维长度较野生型组明显降低(P=0.022)。结论:16月龄时APP/PS1模型小鼠空间学习记忆能力明显减退,且海马DG内0.7~1.2μm直径段有髓神经纤维明显丢失可能是APP/PS1模型小鼠空间学习记忆能力进行性减退的结构基础之一。

关键词： APP/PS1模型小鼠齿状回有髓神经纤维透射电子显微镜体视学

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跑步锻炼减少中老年APP/PS1双转基因AD小鼠海马齿状回内树突棘丢失

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重庆医科大学学报 2017年第6期42卷 707-712页

作者：唐炜晁凤蕾蒋林张毅周春妮张蕾梁芯朱殷青黄维李常琼李桃赵振华唐勇重庆医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:运用现代体视学方法定量研究跑步锻炼对APP/PS1双转基因模型小鼠海马齿状回树突棘的作用。方法:12月龄APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠随机分为跑步组和阳性对照组,同窝生野生型小鼠作为阴性对照组... 详细信息

目的:运用现代体视学方法定量研究跑步锻炼对APP/PS1双转基因模型小鼠海马齿状回树突棘的作用。方法:12月龄APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠随机分为跑步组和阳性对照组,同窝生野生型小鼠作为阴性对照组,每组各15只。跑步组小鼠进行4个月的跑步锻炼。运用Morris水迷宫方法测试3组小鼠的空间学习记忆能力,现代体视学方法定量研究3组小鼠海马齿状回树突棘密度和总数。结果:定位航行实验中跑步组小鼠逃避潜伏期[(25.0±2.5)s]明显短于阳性对照组小鼠[(35.4±2.5)s](P=0.016)。空间探索试验中跑步组小鼠穿台次数、目标象限游泳时间、目标象限游泳距离百分比[(3.2±1.9)次、(21.5±7.6)s、(0.31±0.12)%]明显多于阳性对照组小鼠[(1.3±0.9)次、(14.0±8.2)s、(0.23±0.14)%](P=0.01,P=0.029,P=0.019);跑步组小鼠海马齿状回内树突棘密度、总数[(0.431 9±0.044 8)/μm3、(4.546 6±1.081 4)×108]明显高于阳性对照组[(0.285 6±0.013 3)/μm3、(2.667 9±0.643 5)×108](P<0.001,P=0.043)。结论:跑步锻炼对AD小鼠海马齿状回树突棘的作用可能是跑步锻炼改善AD小鼠空间学习能力的重要结构基础之一。

关键词：树突棘齿状回 APP/PS1 AD小鼠体视学

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当归多糖对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞的影响

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第三军医大学学报 2013年第8期35卷 779-783页

作者：关雪晶吴宏何晓莉姜蓉重庆医科大学基础医学院干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的研究当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromalcell,BMSC)的保护作用。方法 BALB/c小鼠按随机数字表法分为10组,每组24只,共计240只。正常组不作任何处理,其余9组经X射线照射后分别... 详细信息

目的研究当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromalcell,BMSC)的保护作用。方法 BALB/c小鼠按随机数字表法分为10组,每组24只,共计240只。正常组不作任何处理,其余9组经X射线照射后分别给予生理盐水(NS)、2 mg/kg APS和8 mg/kg APS,给药至第7、14、21天计数小鼠外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)及骨髓单个核细胞(BMNC);观察BMSC生长达80%贴壁所需时间及形成的成纤维细胞集落(CFU-F)数量;流式细胞术检测BMSC细胞周期、凋亡率及表面黏附分子CD54、CD106的表达水平。结果与正常组比较,NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数明显减少(P<0.05);BMSC达80%贴壁所需时间明显延长,CFU-F数明显减少(P<0.05);G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例显著降低(P<0.05);BMSC细胞凋亡率明显增高(P<0.05);CD54、CD106表达明显降低(P<0.05)。2 mg/kg APS、8 mg/kg APS组与NS组相比,外周血各指标、BMNC数及CFU-F数明显增加(P<0.05);BMSC达80%融合时间显著缩短(P<0.05);G0/G1期比例明显降低,S期比例显著增加(P<0.05);凋亡率显著降低(P<0.05);CD54、CD106表达明显增高(P<0.05)。第21天8 mg/kg APS组各指标均恢复正常。结论 APS可能是通过提高BMSC贴壁及增殖能力,加速BMSC由G0/G1期向S期转换,降低BMSC凋亡率,上调CD54、CD106表达来促进辐射损伤后小鼠造血功能的恢复。

关键词：当归多糖辐射损伤骨髓基质细胞凋亡率黏附分子

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人胚胎生殖细胞饲养层的制备

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重庆医科大学学报 2011年第12期36卷 1440-1444页

作者：姜蓉黎晓莉吴宏王璐重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:建立稳定高效的人包皮成纤维细胞(Human foreskin fibroblasts,HFF)饲养层培养体系,用于培养人胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs)。方法:取4～5岁小儿包皮,采用机械法和组织消化法分离、培养成纤维细胞,倒置相差显微镜观察... 详细信息

目的:建立稳定高效的人包皮成纤维细胞(Human foreskin fibroblasts,HFF)饲养层培养体系,用于培养人胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs)。方法:取4～5岁小儿包皮,采用机械法和组织消化法分离、培养成纤维细胞,倒置相差显微镜观察细胞生长状况,免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术检测细胞纯度、生长曲线及细胞周期,筛选丝裂霉素C作用的最佳浓度和时间。分离5～11周人胚胎原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)并培养于经丝裂霉素C处理的HFF饲养层上,观察人EGCs生长情况。结果:机械法和组织消化法结合分离HFF方法可靠,纯度高,细胞生长活性好,能快速进入对数生长期,细胞周期与细胞生长曲线保持一致,细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;丝裂霉素C抑制细胞增殖的适宜浓度及时间为12.5 mg/L作用2.5 h;分离的人PGCs在该饲养层上培养可形成典型的EGCs集落,体外连续培养超过3代。结论:HFF饲养层能有效地支持人EGCs的生长。

关键词：人胚胎生殖细胞包皮成纤维细胞饲养层

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硝普钠促进静脉移植BMSCs向溃疡性结肠炎大鼠结肠的迁移

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重庆医科大学学报 2011年第2期36卷 152-155页

作者：陈晓云徐艳华姜蓉汪维伟重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:观察硝普钠能否促进静脉移植的大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向溃疡性结肠炎(Ulcerativecolitis,UC)大鼠结肠的迁移。方法:分离培养4、’,6-二脒基-2-苯基吲哚盐酸(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)荧光标记SD大鼠BMSCs。免疫复合法建立UC大鼠模型,1、2组UC大鼠均经尾静脉注射DAPI标记BMSCs的细胞悬液,2组细胞悬液还含0.2 mg/kg体重的硝普钠。移植后第7、14天各处死5只大鼠,取溃疡及非溃疡部位结肠做恒冷切片,荧光显微镜下分别计数各组DAPI标记BMSCs在溃疡及非溃疡部位结肠的细胞数。结果:移植第7、14天,2组结肠溃疡部位阳性细胞数均明显高于非溃疡部位(P<0.01);移植第7天,2组溃疡及非溃疡部位的阳性细胞数均高于1组(P<0.05)。结论:静脉移植BMSCs的同时给予硝普钠能促进BMSCs向结肠溃疡部位的迁移。

关键词：骨髓间充质干细胞移植溃疡性结肠炎硝普钠

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急性低剂量辐射对小鼠肝脏及骨髓DNA甲基化的影响

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基础医学与临床 2014年第7期34卷 933-938页

作者：陈凤鸣吴宏张梦关雪晶何晓莉蒋林重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学药学院重庆400016

目的观察低剂量辐射(LDR)对小鼠肝脏及骨髓单个核细胞(BMNC)DNA甲基化及甲基化转移酶的影响。方法直线加速器一次性全身X射线1.0 Gy均匀照射C57BL/6小鼠,建立辐射损伤模型。并于照射后1、3、7和14 d取眼球血进行外周血细胞计数,处死小... 详细信息

目的观察低剂量辐射(LDR)对小鼠肝脏及骨髓单个核细胞(BMNC)DNA甲基化及甲基化转移酶的影响。方法直线加速器一次性全身X射线1.0 Gy均匀照射C57BL/6小鼠,建立辐射损伤模型。并于照射后1、3、7和14 d取眼球血进行外周血细胞计数,处死小鼠提取肝脏及BMNC,高效液相色谱法检测全基因组DNA甲基化的水平,Western blot检测DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、DNMT3A及DNMT3B的水平。结果与正常组相比,辐射组白细胞及血小板计数均明显降低(P<0.05),白细胞在1 d时降至最低,而血小板在3 d时降至最低,14 d仍未恢复正常。辐射组肝及BMNC全基因组DNA甲基化水平下降(P<0.05),其后均逐渐恢复正常。与正常组相比,辐射组肝脏及BMNC DNMT1及DNMT3A表达显著升高(P<0.05),14 d时仍未恢复至正常,DNMT3B的表达也显著升高(P<0.05),但在7 d时已恢复至正常。结论低剂量辐射可导致小鼠肝脏及骨髓DNA甲基化水平的降低及DNMTs表达的升高。

关键词：低剂量辐射 DNA甲基化 DNA甲基化转移酶表观遗传学

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小鼠造血干细胞衰老体内模型构建及相关生物学研究

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重庆医科大学学报 2011年第4期36卷 385-388页

作者：蔡世忠周玥姜蓉杨斌王亚平重庆医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:构建小鼠造血干细胞(Homatopoietic stemcell,HSCs)衰老体内模型,并探讨其生物学特点,为延缓HSCs衰老的研究提供平台。方法:免疫磁性分选法分离、纯化雄性鼠的Sca-1+HSCs,流式细胞术鉴定分选纯度,免疫荧光检测Sca-1表达。将1×... 详细信息

目的:构建小鼠造血干细胞(Homatopoietic stemcell,HSCs)衰老体内模型,并探讨其生物学特点,为延缓HSCs衰老的研究提供平台。方法:免疫磁性分选法分离、纯化雄性鼠的Sca-1+HSCs,流式细胞术鉴定分选纯度,免疫荧光检测Sca-1表达。将1×104个雄性供体鼠Sca-1+HSCs经尾静脉移植给9Gy60Coγ射线全身辐射的雌性受体鼠。PCR检测移植后受体鼠造血细胞Y染色体性别决定(Sex-determining region of Ychromosome,Sry)基因,混合造血祖细胞集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析HSCs衰老的生物学特点;计数受体鼠脾集落形成单位(CFU-S)、测定脾脏和胸腺指数,检测受体鼠外周血指标(WBC、RBC、PLT、HCT),评价供体鼠Sca-1+HSCs在受体鼠内衰老和造血功能重建情况。结果:免疫磁性分选法得到的Sca-1+HSCs纯度达87.2%以上。雌性受体鼠的造血细胞均能检测出342 bp的Sry基因。供体鼠Sca-1+HSCs连续2次移植后,形成CFU-Mix集落数量和形成集落的细胞数明显减少;HSCs出现G1期阻滞,G0+G1期细胞比例增高,S期比例下降;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率明显增高;脾脏与胸腺指数明显降低;CFU-S形成能力下降;外周血各项指标均有下降。结论:雄性供体Sca-1+HSCs移植能有效重建受体鼠造血功能,连续尾静脉移植2次能初步建立HSCs复制性衰老的体内模型。

关键词：造血干细胞衰老体内模型连续移植生物学研究

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