检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2008年第2期24卷 167-169页

作者：陈炜高娜王嘉丽田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。... 详细信息

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-dyn;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示胞浆中有dyanimtin蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-dyn,为后续研究dynamitin在病毒感染过程中的作用积累了有价值的实验资料。

关键词：病毒微管骨架逆行性运输胞质动力蛋白 Dynamitin

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屎肠球菌类毒力基因hyl功能的动物实验研究

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中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 799-802页

作者：吴利先王国富黄文祥云南大理学院下关校区基础医学院微生物学教研室大理671000 重庆医科大学附属第一医院感染科重庆400016

目的构建屎肠球菌透明质酸酶基因(hyaluronidase,hyl)突变株(*hyl),通过动物实验来研究hyl基因的功能。方法通过小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型来评价屎肠球菌hyl基因突变株(*hyl)的毒力下降情况。结果突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数... 详细信息

目的构建屎肠球菌透明质酸酶基因(hyaluronidase,hyl)突变株(*hyl),通过动物实验来研究hyl基因的功能。方法通过小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型来评价屎肠球菌hyl基因突变株(*hyl)的毒力下降情况。结果突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数致死量(LD50)提高了7倍,存活率也明显高于野生株,引起的兔心内膜炎的病理改变也较野生株轻微。结论hyl基因在屎肠球菌致病中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。

关键词：屎肠球菌透明质酸酶基因腹膜炎模型心内膜炎模型

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幽门螺杆菌katA基因功能及其在耐受氧化损伤中的作用分析

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生物技术通报 2024年第5期40卷 310-320页

作者：王鑫鑫管玉祝李晓苇洪伟吴道艳康颖倩刘永畅陈峥宏崔古贞贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵阳550000 贵州省病原生物学特色重点实验室贵阳550000 贵州省分子生物学重点实验室贵阳550000

【目的】过氧化氢酶(KatA)是幽门螺杆菌编码的重要毒力因子,在抵抗宿主免疫杀伤和疫苗研发等方面具有重要功能。为了鉴定幽门螺杆菌KatA的酶学特性,并分析其在幽门螺杆菌氧化耐受中的功能。【方法】首先,从幽门螺杆菌临床耐药菌株Hp_G27... 详细信息

【目的】过氧化氢酶(KatA)是幽门螺杆菌编码的重要毒力因子,在抵抗宿主免疫杀伤和疫苗研发等方面具有重要功能。为了鉴定幽门螺杆菌KatA的酶学特性,并分析其在幽门螺杆菌氧化耐受中的功能。【方法】首先,从幽门螺杆菌临床耐药菌株Hp_G272基因组中分离katA基因,并在大肠杆菌中克隆表达、分离纯化KatA^(G272)蛋白;然后,利用CAT检测试剂盒体外分析KatA^(G272)的过氧化氢酶活性;其次,利用同源重组技术构建katA基因工程菌株,包括敲除菌株和回补菌株;最后,通过比较野生菌株与工程菌株生长表型差异、分解过氧化氢能力差异及耐受过氧化氢能力差异,阐述katA基因的功能及其在幽门螺杆菌耐受氧化损伤中的作用。【结果】在大肠杆菌中成功克隆表达并分离纯化KatA^(G272),体外酶学分析表明,KatA^(G272)是一类嗜酸性过氧化氢酶,基因敲除分析表明,敲除该基因幽门螺杆菌丧失分解和耐受过氧化氢的能力,而回补该基因幽门螺杆菌回复分解和耐受过氧化氢的能力。【结论】katA基因是幽门螺杆菌分解和耐受过氧化氢的唯一功能基因,在幽门螺杆菌氧化耐受中具有重要功能。

关键词：幽门螺杆菌过氧化氢酶 katA 耐受性克隆表达基因敲除

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SAM-P1鼠对神经毒型流感病毒R404BP株中枢神经系统感染的免疫防御

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中国免疫学杂志 2005年第7期21卷 524-527页

作者：刘北星木村吉延中国医科大学基础医学院免疫学教研室沈阳11000 福井大学医学部微生物学教室 9101193

目的:研究SAMP1鼠中枢神经系统被流感病毒感染后,机体对感染神经元的清除及病毒感染所诱导的免疫应答。方法:采用立体定位微量注射法,用神经毒型流感病毒R404BP株经嗅球感染SAMP1鼠,造成实验性流感病毒脑炎动物模型。检测感染鼠生存率,... 详细信息

目的:研究SAMP1鼠中枢神经系统被流感病毒感染后,机体对感染神经元的清除及病毒感染所诱导的免疫应答。方法:采用立体定位微量注射法,用神经毒型流感病毒R404BP株经嗅球感染SAMP1鼠,造成实验性流感病毒脑炎动物模型。检测感染鼠生存率,感染神经元清除时间以及Th1型细胞免疫。结果:SAMP1鼠对流感病毒R404BP株易感性高,感染后生存率降低,清除感染神经元所需时间延长,脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性低下。结论:老化鼠因机体Th1型免疫应答下降导致对神经毒型流感病毒免疫防御机制的降低。

关键词：老化鼠神经毒型流感病毒R404BP株 Th1型免疫应答

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哺乳动物shRNA表达载体的构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 786-788页

作者：杨健唐恩洁朱道银川北医学院分子生物学研究所四川南充637007 重庆医科大学微生物学教研室重庆410000

目的:构建带有绿色荧光蛋白报告基因的哺乳动物shRNA表达载体。方法:用PCR方法从含有人U6启动子的载体PTZU6+1中扩增U6启动子,将其克隆到pEGFP-C1载体中,通过限制性内切酶、PCR及测序对构建的载体进行鉴定,以其转染HepG2细胞后,在倒置... 详细信息

目的:构建带有绿色荧光蛋白报告基因的哺乳动物shRNA表达载体。方法:用PCR方法从含有人U6启动子的载体PTZU6+1中扩增U6启动子,将其克隆到pEGFP-C1载体中,通过限制性内切酶、PCR及测序对构建的载体进行鉴定,以其转染HepG2细胞后,在倒置荧光显微镜下初步观察绿色荧光蛋白的表达。结果:经限制性内切酶、PCR及测序证实,成功地构建哺乳动物shRNA表达载体。以其转染HepG2细胞后可以表达绿色荧光蛋白。结论:构建了带有绿色荧光蛋白报告基因的哺乳动物shRNA表达载体,为以后运用该载体进行RNAi相关研究奠定了一定的基础。

关键词： shRNA RNA 哺乳动物

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小剂量阿糖胞苷体外诱导HL-60细胞凋亡的作用

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重庆大学学报（自然科学版） 2004年第11期27卷 145-147页

作者：杜冰朱道银唐恩洁川北医学院分子生物学研究所四川南充637007 重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

阿糖胞苷是白血病的重要药物 ,其小剂量化疗仍用于临床治疗白血病 ,并取得了一定的疗效 ,但其作用机制尚未完全阐明 ,可能与药物诱导细胞分化或凋亡有关。文中用TUNEL法和流式细胞仪分析小剂量Ara -C(10 - 8M)对HL 6 0细胞周期和细胞凋... 详细信息

阿糖胞苷是白血病的重要药物 ,其小剂量化疗仍用于临床治疗白血病 ,并取得了一定的疗效 ,但其作用机制尚未完全阐明 ,可能与药物诱导细胞分化或凋亡有关。文中用TUNEL法和流式细胞仪分析小剂量Ara -C(10 - 8M)对HL 6 0细胞周期和细胞凋亡的影响 ,用免疫组化法和原位杂交法分别检测P5 3蛋白和p5 3mRNA、bcl- 2mRNA表达水平的改变 ,以探讨bcl- 2和p5 3基因表达与小剂量阿糖胞苷诱导HL - 6 0细胞凋亡的关系。结果表明 :小剂量Ara -C能诱导HL - 6 0细胞凋亡 ,其分子机制可能与P5 3蛋白、p5 3mRNA表达增加和bcl-

关键词：阿糖胞苷凋亡 HL-60细胞 bcl-2 p53

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巨噬细胞内表达的人颗粒溶素对胞内结核分枝杆菌的杀菌活性

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中华传染病杂志 2009年第2期27卷 69-73页

作者：伊正君付玉荣李俊明杨春何永林李娜朱道银潍坊医学院临床学院检验专业山东省潍坊市261031 潍坊医学院基础医学教学部病原生物学教研室重庆医科大学微生物学与免疫学教研室

目的构建携带人颗粒溶素（GLS）的真核表达质粒并探讨其表达后对巨噬细胞RAW264．7内结核分枝杆菌的杀菌能力。方法利用套式PCR从同种异型抗原激活的人CTL中扩增出GLS基因，并克隆入pBudCE4．1载体，构建重组质粒。将其转染至感染结核... 详细信息

目的构建携带人颗粒溶素（GLS）的真核表达质粒并探讨其表达后对巨噬细胞RAW264．7内结核分枝杆菌的杀菌能力。方法利用套式PCR从同种异型抗原激活的人CTL中扩增出GLS基因，并克隆入pBudCE4．1载体，构建重组质粒。将其转染至感染结核分枝杆菌H37Rv的巨噬细胞株RAW264．7中，套式PCR、免疫荧光检测GLS表达；转染96h后裂解细胞作抗酸染色及菌落计数，检测GLS细胞内直接杀菌活性。数据行t或t＇检验。结果成功构建携带GLS的真核表达质粒pBudCE4．1／GLS；在转染的已感染H37Rv巨噬细胞株RAW264．7中，从转录和翻译水平都检测到目标基因GLS的表达产物；转染96h，佛波酯＋pBudCE4．1／GLS组、佛波酯＋pBudCE4．1组与未激活初始巨噬细胞荷菌量分别为（1．44±1．25）、（3．16±0．20）和（3．59±0．21）个，两两比较，差异均有统计学意义（t=2．403，t=2．854，均P〈0．05）。结论携带人GLS的真核表达质粒在巨噬细胞表达后具有明显的杀菌活性，为进一步作为结核基因治疗疫苗的应用提供了实验依据。

关键词：蛋白质类杀伤细胞,天然巨噬细胞分枝杆菌,结核基因疗法

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核心蛋白聚糖硫酸软骨素C末端Ⅱ型胶原在关节炎患者血清中的表达及与临床特征的关系

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中华风湿病学杂志 2018年第6期22卷 370-375页

作者：刘敏丽张军锋王桂琴山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室太原030001 山西医科大学基础医学院公共卫生学院卫生统计教研室太原030001

目的探讨关节炎患者血清中核心蛋白聚糖（DCN）、硫酸软骨素（CS）、C末端Ⅱ型胶原（CTX-Ⅱ）表达变化，并分析其与临床特征的相关关系，为临床诊治提供依据。方法研究对象分为OA组、RA组、对照组，每组30例，OA组、RA组选取山西大医院... 详细信息

目的探讨关节炎患者血清中核心蛋白聚糖（DCN）、硫酸软骨素（CS）、C末端Ⅱ型胶原（CTX-Ⅱ）表达变化，并分析其与临床特征的相关关系，为临床诊治提供依据。方法研究对象分为OA组、RA组、对照组，每组30例，OA组、RA组选取山西大医院风湿免疫科已确诊的初治患者，对照组选择在山西大医院体检中心体检的健康志愿者。采用疼痛视觉模拟评分（VAS）法评估患者的疼痛程度，采用X线评估关节病变程度，采用ELISA检测血清中DCN、CS、CTX-Ⅱ水平，并分析上述指标的相关性。计量资料采用x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用Tambane’s T2法，两因素间相关分析采用Spearman相关分析。结果OA组、RA组、对照组的DCN含量为（3．19±1．38）ng／ml，（1．90±0．62）ng／ml，（1．33±0．33）ng／ml，3组间的差异有统计学意义，OA组高于对照组（P〈0．01），RA组高于对照组（P〈0．01），OA组高于RA组（P〈0．D1）；OA组、RA组、对照组的CS含量是（0．57±0．12）ng／ml，（0．95±0．47）．g／ml，（0．36±0．09）ng／ml，3组问的差异有统计学意义，OA组高于对照组（P〈0．01），RA组高于对照组（P〈0．01），OA组低于RA组（P〈0．01）；OA组、RA组、对照组的CTX-Ⅱ含量是（3．1±0．9）ng／ml，（3．0±1．1）ng／ml，（2．2±0．8）ng／ml]，OA组、RA组的CTX-Ⅱ水平高于对照组，OA组高于对照组（P〈0．01），RA组高于对照组（P=0．005），OA组与RA组CTX-Ⅱ水平差异无统计学意义（P=0．996）。OA、RA患者血清DCN、CS、CTX-Ⅱ与x线、VAS评分均呈正相关，DCN的相关性最高，OA组DCN与x线、VAS评分（r=0．777，P〈O．01；r=0．622，P〈0．01），RA组DCN与x线、VAS评分（r=0．640，P〈0．01；r=0．493，P=0．006）。结论关节炎患者血清中DCN、CS、CTX—Ⅱ水平较健康人群明显增高，且与疼痛程度、软骨、骨损伤程度呈正相关，DCN在OA、RA的早期鉴别诊断中可能有一定的价值，但临床应用还需要有更确切的循证医学证据。

关键词：关节炎核心蛋白聚糖硫酸软骨素 C末端Ⅱ型胶原临床特征

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

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中国人兽共患病学报 2007年第4期23卷 319-322页

作者：杨琴顾江毛旭虎邹全明宋方洲丁红雷王庆旭重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫教研室

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫... 详细信息

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗TccP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Western blotting法进行测定和分析。结果从EHEC O157∶H7 Sakai菌株中克隆出了1014bp的TccP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达;以TccP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blotting分析此抗体能与TccP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TccP基因,所获TccP具有良好的抗原性,为进一步研究TccP在EHEC O157∶H7致病机制中的作用奠定基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 Tir-细胞骨架偶联蛋白基因表达多克隆抗体

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流感病毒聚合酶碱性蛋白1相关宿主因子研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第11期43卷 860-867页

作者：刘浩如王盛羽孙欣宋鸿遵义医科大学基础医学院微生物学教研室遵义563000 遵义医科大学贵州省普通高等学校传染病与生物安全重点实验室遵义563000

流感病毒严重危害人类健康,对社会发展造成重大影响,成为世界公共卫生安全隐患。因此,了解流感病毒的生命周期能够为抗病毒感染提供策略。感染病毒的宿主细胞会通过启动固有免疫系统来抵御病毒的入侵,而病毒与宿主因子的关系是密不可分... 详细信息

流感病毒严重危害人类健康,对社会发展造成重大影响,成为世界公共卫生安全隐患。因此,了解流感病毒的生命周期能够为抗病毒感染提供策略。感染病毒的宿主细胞会通过启动固有免疫系统来抵御病毒的入侵,而病毒与宿主因子的关系是密不可分的,在流感病毒生命周期中的各个阶段都需要宿主因子的参与并对流感病毒的增殖产生不同的效应。聚合酶碱性蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)为RNA聚合酶亚基,是流感病毒复制和转录过程中的关键病毒蛋白。本综述总结了不同的宿主因子与PB1发生相互作用,进而调节流感病毒的复制、传播与致病性,为抗病毒药物的研发提供新思路。

关键词：流感病毒宿主因子聚合酶碱性蛋白1

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