检索结果-内蒙古大学图书馆

高糖抑制蛋白KIAA0753和CCSAP表达并通过钙信号阻断小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的成骨分化

中国药理学通报 2025年第3期41卷 456-465页

作者：王吉春钱正霞李梦雪汪长东重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院麻醉科重庆400016

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blo... 详细信息

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blot检测KIAA0753和CCSAP蛋白表达情况;转染过表达质粒进入人胚肾细胞(HEK-293T),免疫共沉淀检测蛋白KIAA0753和CCSAP相互作用;利用成骨培养基分别在不同葡萄糖浓度和不同诱导时间处理MC3T3-E1细胞,试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,Western blot检测KIAA0753、CCSAP、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)等蛋白的表达情况,然后再设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-CCSAP组MC3T3-E1细胞,依次检测KIAA0753、OCN、OPN蛋白的表达情况以及ALP活性;利用高通量基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)中糖尿病鼠模型数据集筛选差异基因进行生物信息学分析;对MC3T3-E1细胞分别设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-KIAA0753组,Western blot检测钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡbeta,CAMK2B)、受磷蛋白(phospholamban,PLN)蛋白的表达。结果与5.5 mmol·L^(-1)组相比,25 mmol·L^(-1)抑制成骨细胞中KIAA0753和CCSAP蛋白表达,且蛋白KIAA0753和CCSAP存在相互作用。同时25 mmol·L^(-1)也抑制成骨细胞ALP、OPN、OCN蛋白表达,在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达CCSAP上调KIAA0753、OCN、OPN、ALP的表达。糖尿病鼠模型的差异基因主要富集在“信号受体、信号调控”等方面。25 mmol·L^(-1)葡萄糖抑制成骨细胞中CAMK2B、PLN蛋白的表达,且在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达KIAA0753上调CAMK2B、PLN蛋白的表达。结论高糖抑制KIAA0753和CCSAP蛋白表达,抑制小鼠胚胎成骨细胞前体细胞成骨分化和钙信号传导,过表达CCSAP挽救高糖对成骨分化的抑制作用以及过表达KIAA0753逆转高糖对钙信号通路的抑制作用。

关键词：糖尿病 KIAA0753 CCSAP 蛋白相互作用成骨分化钙信号

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UHRF1调控雌激素受体表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

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四川大学学报（医学版） 2020年第3期51卷 325-330页

作者：许琳婉张潞渝苟茜邱伊波刘智敏重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的观察泛素样含PDH和环指域1(UHRF1)对雌激素受体(ER)α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。方法应用Western blot、实时荧光定量(qRT)-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳... 详细信息

目的观察泛素样含PDH和环指域1(UHRF1)对雌激素受体(ER)α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。方法应用Western blot、实时荧光定量(qRT)-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳头状癌细胞BCPAP中UHRF1、ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达。分别用Scrambled siRNA、UHRF1 siRNA处理BCPAP细胞,qRT-PCR检测各组细胞中ERα和ERβ的mRNA表达;MTT、Transwell分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移。结果与Nthy-ori3-1细胞相比,BCPAP细胞中UHRF1和ERα蛋白及mRNA表达水平上调(P<0.05),而ERβ蛋白和mRNA表达水平下调(P<0.05)。与空白对照组和Scrambled siRNA组相比,转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞中ERαmRNA表达降低(P<0.05),ERβmRNA表达升高(P<0.05);转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移降低(P<0.05)。结论UHRF1可上调ERα/ERβ的表达比率,促进甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移。

关键词： UHRF1 ERα ERβ 甲状腺乳头状癌

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细胞原纤毛与人类疾病

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生理学报 2021年第6期73卷 999-1016页

作者：刘杰许洁陈茜汪长东重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心基础医学院重庆400016

细胞原纤毛定位于绝大多数哺乳动物细胞表面,属于非常保守的细胞器,调节细胞增殖、分化、迁移、极性、信号级联等生命活动来调控细胞生命进程和维持细胞稳态。原纤毛结构蛋白或附属蛋白编码基因突变所导致的疾病统称为"纤毛类疾病&... 详细信息

细胞原纤毛定位于绝大多数哺乳动物细胞表面,属于非常保守的细胞器,调节细胞增殖、分化、迁移、极性、信号级联等生命活动来调控细胞生命进程和维持细胞稳态。原纤毛结构蛋白或附属蛋白编码基因突变所导致的疾病统称为"纤毛类疾病",发生在胚胎期、婴儿期甚至成人期。纤毛类疾病不仅累及单一器官,也涉及多器官多系统,表现出多变表型和重叠表型。本文主要综述原纤毛相关基因突变对骨骼、牙齿、皮肤、肝胆、肾脏、大脑、视网膜、心脏等器官的影响,揭示其致病机制,并对当前一些纤毛类疾病新型治疗方法进行探讨。

关键词：细胞原纤毛纤毛类疾病器官治疗

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KIAA0753减缓糖尿病抑制的成骨细胞糖代谢和能量代谢

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陆军军医大学学报 2024年第20期46卷 2291-2300页

作者：李梦雪王吉春李乐泰汪长东重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆2400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆2400016

目的探讨KIAA0753对成骨细胞MC3T3-E1糖代谢及能量代谢的影响。方法由基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)获取Joubert综合征患者基因表达数据集GSE182286并对其进行分析。构建KIAA0753过表达载体,实验分为对照组、高糖组... 详细信息

目的探讨KIAA0753对成骨细胞MC3T3-E1糖代谢及能量代谢的影响。方法由基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)获取Joubert综合征患者基因表达数据集GSE182286并对其进行分析。构建KIAA0753过表达载体,实验分为对照组、高糖组和高糖+过表达KIAA0753组,采用Western blot检测在高糖条件下KIAA0753对MC3T3-E1细胞糖代谢相关蛋白糖原合酶1(glycogen synthase 1,GYS1)、糖原磷酸化酶L(glycogen phosphorylase L,PYGL)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter type 4,GluT4)、磷酸果糖激酶(phosphofructokinase muscle,PFKM)、丙酮酸脱氢酶磷酸酶1(pyruvate dehydrogenase phosphatase 1,PDP1)、乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-CoA carboxylaseα,ACACA),以及线粒体相关蛋白过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator-1α,PGC-1α)、核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF1)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)的影响;通过检测细胞培养基中葡萄糖含量、细胞内的糖原含量和乳酸含量评估KIAA0753对糖代谢中间产物的影响;采用细胞免疫荧光和ATP含量检测KIAA0753对线粒体活性及功能的影响;采用EdU染色检测KIAA0753对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响。结果KIAA0753在Joubert综合症患者和高糖条件下表达下调(P<0.05)。高糖抑制蛋白GYS1、ACACA、PFKM、GluT4、PGC-1α、TFAM和NRF1的表达,促进蛋白PDP1和PYGL的表达,减少糖原生成和细胞外葡萄糖的消耗,促进乳酸生成,而过表达KIAA0753后减缓了高糖的作用,促进蛋白GYS1、ACACA、PFKM、GluT4、PGC-1α、TFAM和NRF1的表达,抑制蛋白PDP1和PYGL的表达,增加糖原生成和细胞外葡萄糖的消耗,抑制乳酸生成(P<0.05)。与高糖组相比,过表达KIAA0753在高糖条件下显著提升MC3T3-E1细胞线粒体的活性和膜电位,促进ATP的合成(P<0.05),促进MC3T3-E1细胞的增殖(P<0.05)。结论KIAA0753能够促进成骨细胞的糖代谢并提升线粒体活性和功能,从而为机体提供更多能量。

关键词： Joubert综合征成骨细胞 KIAA0753 糖代谢线粒体 ATP

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胃癌细胞系SGC7901通过间充质干细胞原纤毛调控钙信号对成骨分化的影响

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中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志 2023年第1期16卷 23-32页

作者：陈茜李梦雪王吉春刘杰许洁汪长东重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探究胃癌细胞系SGC7901如何影响间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化。方法分离SD大鼠乳鼠股骨,获取原代MSCs。将原代MSCs和经血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)处理的原代MSCs分别与胃黏膜细胞系GES-1和胃癌细胞系... 详细信息

目的探究胃癌细胞系SGC7901如何影响间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化。方法分离SD大鼠乳鼠股骨,获取原代MSCs。将原代MSCs和经血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)处理的原代MSCs分别与胃黏膜细胞系GES-1和胃癌细胞系SGC7901共培养,并以成骨诱导培养基(OS培养基)诱导72 h,提取MSCs总蛋白和总RNA。对总RNA进行RNA-seq检测并对显著差异基因进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)和真核直系同源群(euKaryotic Ortholog Groups,KOG)可视化分析;以GAPDH为内参,Western blot检测成骨标志蛋白,钙信号相关蛋白和原纤毛结构相关蛋白表达;对共培养后获取的MSCs总蛋白进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测。结果MSCs原代培养细胞呈多角形或梭形;经过成骨诱导培养基(OS培养基)诱导,茜素红染色矿化结节呈红色;以SGC7901为对照,MSCs细胞高表达CD44,低表达CD34。与GES-1共培养相比,SGC7901共培养的MSCs中骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和Runx2表达均降低(P<0.01),ALP酶活力显著降低(P<0.001)。SGC7901共培养上调了MSCs中乙酰化α-微管蛋白和γ-微管蛋白表达(P<0.01)。RNA-seq分析显著差异基因共3712个,2756个基因表达上调,956个基因表达下调;SGC7901共培养的MSCs中ADRB3和PLN表达均降低(P<0.001)。经过AngⅡ处理后,SGC7901共培养抑制的Runx2和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平增加(P<0.05),ALP酶活力增强(P<0.001)。结论胃癌细胞SGC7901通过促进MSCs原纤毛生长,抑制钙信号从而抑制MSCs成骨分化。

关键词： SGC7901 间充质干细胞成骨分化原纤毛钙信号

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产肠毒素大肠杆菌基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性

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中国生物制品学杂志 2010年第7期23卷 727-729,733页

作者：王荣荣郝亚宁马永平李江李世彬重庆医科大学基础医学院医学分子与肿瘤研究中心生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的观察产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic ***,ETEC)基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性。方法将含ETEC抗原成分热不稳定肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin Bsubunit,LTB)的双歧杆菌疫苗给SD大鼠灌胃4次,同时设对照组,以PBS平行... 详细信息

目的观察产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic ***,ETEC)基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性。方法将含ETEC抗原成分热不稳定肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin Bsubunit,LTB)的双歧杆菌疫苗给SD大鼠灌胃4次,同时设对照组,以PBS平行灌胃。采用ELISA法检测大鼠粪便上清液IgA及血清IgG抗体水平;免疫组化法检测大鼠空肠中sIgA抗体的表达;肠绊试验检测肠毒素的活性。结果免疫疫苗的SD大鼠粪便上清液中产生了IgA抗体,血清中产生了特异性的IgG抗体,肠道内产生了特异性分泌型sIgA抗体;免疫组化结果显示,随着免疫次数的增加,抗体分泌量明显增加;双歧杆菌疫苗免疫的大鼠能够抵抗LT抗原的侵袭,而对照组大鼠则出现明显的肠道积液现象。结论构建的双歧杆菌疫苗具有良好的免疫效果,可保护SD大鼠免受ETEC的感染。

关键词：产肠毒素大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位双歧杆菌基因工程疫苗免疫原性

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人产肠毒素大肠杆菌基因工程疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 544-548页

作者：王荣荣马永平重庆医科大学基础医学院医学分子与肿瘤研究中心生物化学与分子生物学教研室重庆400016

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起腹泻的主要致病菌之一,在世界范围内,每年可导致数亿人发生腹泻,尤其是发展中国家的婴幼儿和儿童。目前,世界各国通过构建新型的ETEC基因工程疫苗预防ETEC引起的腹泻。将ETEC的肠毒素基因和菌毛蛋白基因转... 详细信息

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起腹泻的主要致病菌之一,在世界范围内,每年可导致数亿人发生腹泻,尤其是发展中国家的婴幼儿和儿童。目前,世界各国通过构建新型的ETEC基因工程疫苗预防ETEC引起的腹泻。将ETEC的肠毒素基因和菌毛蛋白基因转化至无毒的受体菌中,构建出基因工程疫苗,免疫人体后可有效预防ETEC引起的腹泻。本文就ETEC的致病机理及国内外ETEC基因工程疫苗的最新研究进展作一综述。

关键词：产肠毒素大肠杆菌基因工程疫苗肠毒素菌毛蛋白腹泻

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低氧诱导金属硫蛋白对甲状腺乳头状癌上皮间质转化的影响

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第三军医大学学报 2011年第7期33卷 671-674页

作者：贾朝莉吴婷婷龙方懿刘智敏重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究低氧诱导金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法以人甲状腺乳头状癌NPA细胞为研究模型,将其分为正常氧组(21%O2)、低氧组(5%O2)和MTs-siRNA干扰低氧组,Western blot、RT-PCR方法检测各组细胞MTs、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和间质细胞波形蛋白(Vimentin)的表达,Transwell/Matrigel方法检测各组细胞侵袭转移细胞数。结果低氧可诱导NPA细胞表达MTs,并伴随有EMT标志性分子E-cadherin表达的下调和Vimentin表达的升高,侵袭细胞数由正常氧组15.6±2.8增加到40.3±5.1,迁移细胞数由25.1±5.6增加到48.7±7.6,均有统计学差异(P<0.01);MTs靶向干扰可有效抑制低氧诱导的MTs蛋白表达,同时E-cadherin表达回升,Vimentin表达下降,侵袭细胞数仅增加到25.7±4.2,迁移细胞数仅增加到35.5±5.4,与低氧组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论低氧所诱导表达的MTs对人PTC细胞发生EMT有促进作用,MTs靶向干扰可使EMT受到部分抑制。

关键词：金属硫蛋白上皮间质转化低氧甲状腺乳头状癌

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氯化钴对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响及其机制

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第三军医大学学报 2012年第2期34卷 150-153页

作者：贾朝莉龙方懿刘智敏杨俊艳刘小花董超然王妮重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究氯化钴(CoCl2)诱导的低氧对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响,初步探讨HIF-1α在其中的机制。方法 MTT检测CoCl2(50、100、150、200、250μmol/L)对细胞活力的影响,倒置显微镜观察低氧(150μmol/L的CoCl2分别作用0、12... 详细信息

目的研究氯化钴(CoCl2)诱导的低氧对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响,初步探讨HIF-1α在其中的机制。方法 MTT检测CoCl2(50、100、150、200、250μmol/L)对细胞活力的影响,倒置显微镜观察低氧(150μmol/L的CoCl2分别作用0、12、24、48 h)对细胞形态的影响,Western blot检测低氧(150μmol/L的CoCl2分别作用0、3、6、12、24 h)对HIF-1α、E-cadherin和Vimentin表达的影响,Transwell法检测低氧(150μmol/L的CoCl2分别作用0、6 h)对细胞侵袭、转移的影响,用免疫荧光对HIF-1α蛋白进行亚细胞定位。结果低氧模拟剂CoCl2可抑制NPA细胞活力。随着CoCl2低氧处理时间的延长,NPA细胞逐渐获得间质细胞的形态特征,HIF-1α、Vimentin表达在0～6 h逐渐增加,随后开始下降,E-cadherin表达持续降低,低氧0 h与6 h相比各蛋白表达均具有统计学差异(P<0.01)。低氧组侵袭、转移细胞数目较对照组明显增加(P<0.01),同时低氧组细胞HIF-1α发生核转位。结论 CoCl2模拟化学性低氧可促进NPA细胞上皮间质转化及侵袭、转移,其分子机制可能涉及HIF-1α介导的信号通路对E-cadherin、Vimentin基因表达的调控。

关键词：低氧诱导因子-1α 上皮间质转化甲状腺乳头状癌

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17β-雌二醇促进甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及三叶草因子1分泌

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第三军医大学学报 2017年第17期39卷 1715-1719页

作者：廖凌瑶戴宇婕赵婷婷刘智敏重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究17β-雌二醇(estradiol,E_2)刺激甲状腺乳头状癌K-1细胞增殖、迁移及生长因子类似物人三叶草因子1(trefoil factor family 1,TFF1)分泌及分子机制。方法 ELISA检测E_2、ERβ激动剂(propylpyrazoletriol,PPT)、ERβ激动剂(diarylpropionitrile,DPN)对K-1细胞TFF1分泌的影响,Western blot检测细胞中雌激素受体ERα、ERβ的表达量;设计合成ERαsiRNA、ERβsiRNA后,转染K-1细胞,采用ELISA观察其对E_2诱导的TFF1分泌的影响。染色体免疫共沉淀检测ERα、ERβ与TFF1基因启动子的相互作用;MTT检测E_2对K-1细胞增殖的影响;Transwell检测E_2对K-1细胞迁移的作用。结果 E_2处理后K-1细胞上清TFF1含量逐渐升高,24 h达到峰值,随后降低;PPT处理K-1细胞后TFF1含量增多,而DPN处理降低TFF1含量;转染ERαsiRNA后细胞TFF1分泌量减少;而转染ERβsiRNA后分泌量升高。Western blot检测结果显示,K-1细胞中雌激素受体ERα表达高于ERβ。染色体免疫共沉淀结果显示,ERα能与TFF1基因启动子区域结合;MTT结果显示,E_2处理促进K-1细胞增殖;Transwell检测结果显示,E_2处理增强K-1细胞迁移。结论 E_2可以通过ERα促进K-1细胞中TFF1的表达及分泌,促进细胞增殖和迁移。

关键词： 17β-雌二醇甲状腺乳头状癌三叶草因子1 雌激素受体

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