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免疫学杂志 2014年第10期30卷 897-901页

作者：杨磊唐萃王旎杨俊艳刘智敏重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心 400016 重庆医科大学附属口腔医院检验科 400016

目的探讨低氧诱导因子-1(HIF-1α)、Smad蛋白的相互作用蛋白1(SIP1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测72例人甲状腺乳头状癌和37例癌旁正常组织中HIF-1α、SIP1和MMP-9的表达水... 详细信息

目的探讨低氧诱导因子-1(HIF-1α)、Smad蛋白的相互作用蛋白1(SIP1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测72例人甲状腺乳头状癌和37例癌旁正常组织中HIF-1α、SIP1和MMP-9的表达水平,分析其表达与临床病理指标的关系及三者间表达的相关性。结果在PTC组织中,HIF-1α、SIP1和MMP-9的阳性表达率分别为51.56%、51.39%和54.16%,显著高于癌旁正常组织(P<0.01)。HIF-1α、SIP1和MMP-9的表达与患者颈部淋巴结转移显著相关(P<0.05)。HIF-1α与SIP1、HIF-1α与MMP-9、SIP1和MMP-9的表达均呈显著正相关(rs=0.304,P=0.009;rs=0.243,P=0.040;rs=0.277,P=0.019)。2种蛋白(HIF-1α/SIP1,HIF-1α/MMP-9,SIP1/MMP-9)联合表达较二者之一表达与颈部淋巴结转移更具相关性(P<0.05)。HIF-1α、SIP1和MMP-9 3种蛋白联合表达较三者之一表达与颈部淋巴结转移更具有相关性(P<0.05)。结论 HIF-1α、SIP1和MMP-9在PTC组织中的表达与颈部淋巴结转移密切相关,且三者存在相互协同作用,其表达情况可能作为监测PTC颈部淋巴结转移的指标。

关键词：甲状腺乳头状癌 HIF-1α SIP1 MMP-9

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核仁素蛋白调节嗅觉介导素4mRNA表达的研究

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重庆医科大学学报 2014年第5期39卷 657-660页

作者：安娜吴莉雅宋利华黄轶蒋雪刘先俊重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室、分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属儿童医院临床分子诊断中心重庆400014

目的:探讨核仁素(nucleolin,NCL或C23)蛋白与嗅觉介导素4(olfaetomedin 4,OLFM4)mRNA之间是否存在相互作用,以及NCL对OLFM4转录水平的调控。方法:本研究利用RNA染色质免疫共沉淀(RNA chromatin immunoprecipitation assay,RNA chip)结合RT-PCR确定NCL是否能与OLFM4 mRNA相互作用,以及双荧光素酶报告基因试验检测NCL对OLFM4报告基因的影响。结果:在SGC-7901细胞内,NCL能与OLFM4 mRNA结合,且过表达NCL质粒的相对荧光素酶活性约为对照质粒的1.15倍,敲低NCL质粒的相对荧光素酶活性约为对照质粒的0.8倍,NCL对OLFM4具正向调节作用。结论:NCL与OLFM4mRNA可以相互结合,且NCL可以通过增加OLFM4转录水平和延长OLFM4 mRNA的半衰期来增加OLFM4 mRNA的稳定性。

关键词：核仁素嗅觉介导素4 RNA染色质免疫共沉淀(RNA Chip) 双荧光素酶报告基因试验

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低氧诱导因子-1α、锌指转录抑制因子Twist和钙黏蛋白E在人乳腺癌组织中的表达及其意义

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中国生物制品学杂志 2012年第7期25卷 884-887页

作者：龙方懿印国兵刘智敏吴婷婷贾朝莉杨俊艳刘小花重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第二医院普外科重庆400016

目的探讨低氧诱导因子-1α(Hgpoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、锌指转录抑制因子Twist和钙黏蛋白E(E-cadherin)在人乳腺癌中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP法检测术前未接受过放疗、化疗及激素治疗的69名患者乳腺癌组织标本... 详细信息

目的探讨低氧诱导因子-1α(Hgpoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、锌指转录抑制因子Twist和钙黏蛋白E(E-cadherin)在人乳腺癌中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP法检测术前未接受过放疗、化疗及激素治疗的69名患者乳腺癌组织标本中HIF-1α、Twist和E-cadherin的表达,并分析三者表达的相关性。结果在69份乳腺癌组织标本中,HIF-1α、Twist和E-cadherin的阳性表达率分别为71.01%(49/69)、57.97%(40/69)和50.72%(35/69);HIF-1α、Twist和E-cadherin的阳性表达率与TNM分期和腋淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01),与患者年龄、肿瘤大小和病理类型无关(P>0.05)。HIF-1α与Twist的表达呈显著正相关(r=0.286,P<0.05),Twist与E-cadherin的表达呈显著负相关(r=-0.371,P<0.01)。结论 HIF-1α、Twist和E-cadherin在乳腺癌中的表达情况可作为监测乳腺癌发展的指标。

关键词：乳腺癌低氧诱导因子 Twist E-cadherin

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人血清ANGPTL3含量与高血脂、高血糖的相关性

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中国生物制品学杂志 2010年第4期23卷 422-424页

作者：肖亚雄王继红孔渝菡重庆医科大学实验教学中心生物化学与分子生物学实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院神经病学实验室重庆400016

目的分析高血脂、高血糖及高血糖合并高血脂患者血清ANGPTL3含量与人类脂代谢、糖代谢紊乱的相关性。方法根据体检结果将观察对象分为健康对照(C)组、高血脂(HL)组、高血糖(HG)组和高血糖合并高血脂(HG-HL)组,采用双抗体夹心ELISA法检... 详细信息

目的分析高血脂、高血糖及高血糖合并高血脂患者血清ANGPTL3含量与人类脂代谢、糖代谢紊乱的相关性。方法根据体检结果将观察对象分为健康对照(C)组、高血脂(HL)组、高血糖(HG)组和高血糖合并高血脂(HG-HL)组,采用双抗体夹心ELISA法检测各组血清ANGPTL3含量。结果HL、HG及HG-HL组患者血清ANGPTL3含量明显高于C组,且差异有统计学意义;仅HG组女性血清ANGPTL3含量显著高于男性,其余各组男性与女性血清ANGPTL3含量差异无统计学意义。结论高血脂、高血糖及高血糖合并高血脂人群血清ANGPTL3水平高于正常人,ANGPTL3可能在人类糖和脂类代谢紊乱的发病过程中发挥重要作用。

关键词：血管生成素样蛋白3 高血脂高血糖

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大鼠、豚鼠和金黄地鼠的尿液蛋白质组比较

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生物工程学报 2018年第4期34卷 578-585页

作者：倪娜吴建强李梨高友鹤重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院病理生理学系北京100005 北京师范大学生物化学与分子生物学系北京基因工程与生物技术重点实验室北京100875

生物标志物是指与生理或病理变化相关的可监测的变化。尿液作为机体的一种排泄物,不受稳态机制的调节,可以反映机体的多种变化。动物模型可以模拟人类疾病过程,监测疾病的变化,并为早期诊断提供线索。大鼠作为常用的模型动物并非所有疾... 详细信息

生物标志物是指与生理或病理变化相关的可监测的变化。尿液作为机体的一种排泄物,不受稳态机制的调节,可以反映机体的多种变化。动物模型可以模拟人类疾病过程,监测疾病的变化,并为早期诊断提供线索。大鼠作为常用的模型动物并非所有疾病的优势模型动物,因此比较大鼠与其他动物的尿液蛋白质组,从而为其他疾病选择优势模型动物提供线索。文中通过膜上酶切切成肽段再通过液相色谱与串联质谱偶联技术(LC-MS/MS)分析肽段信息,比较大鼠、豚鼠和金黄地鼠的尿液蛋白,结果显示3种鼠的尿蛋白数量不同,在机体不同系统中表达情况不同,参与的生物功能也不同。这为不同疾病选择不同的优势模型动物提供了依据。

关键词：尿液蛋白质组学液相色谱与串联质谱偶联技术动物模型大鼠豚鼠金黄地鼠

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MicroRNA-29b重组慢病毒表达载体的构建及其抑制胃癌细胞系的迁移和增殖

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基础医学与临床 2011年第6期31卷 609-614页

作者：蒋崇亮汪晓艳龚佳男王芳余佳冯涛重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心生物化学与分子生物学教研室重庆400016 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建has-miR-29b重组慢病毒的表达载体,并观察其对胃癌细胞系迁移和增殖能力的影响。方法将PCR扩增的miR-29b前体序列和pMIR载体经双酶切后连接产生pMIR-miR-29b慢病毒表达载体。pMIR-miR-29b、Packaging Plasmid(s)和pVSV-G质粒共... 详细信息

目的构建has-miR-29b重组慢病毒的表达载体,并观察其对胃癌细胞系迁移和增殖能力的影响。方法将PCR扩增的miR-29b前体序列和pMIR载体经双酶切后连接产生pMIR-miR-29b慢病毒表达载体。pMIR-miR-29b、Packaging Plasmid(s)和pVSV-G质粒共转染包装细胞系293TN,包装产生慢病毒。使用收获的慢病毒颗粒感染胃癌细胞系HGC-27,72 h后利用real-time PCR检测miR-29b在HGC-27内的表达水平,Western blot检测其靶基因MCL-1的表达。划痕实验和细胞增殖实验分别观察在HGC-27细胞中过表达miR-29b后细胞迁移能力及增殖能力的变化。结果成功构建了miR-29b重组慢病毒的表达载体,感染胃癌细胞HGC-27后,能够成功过表达miR-29b。在HGC-27细胞中过表达miR-29b,其靶基因MCL-1的表达明显被抑制,并且Lenti-29b组与对照组Untreat组和Lenti-vector组相比,Lenti-29b组的迁移能力显著降低(P<0.01);Lenti-29b组与Lenti-vector组相比,Lenti-29b组在48、72及96 h 3个时间点的增殖能力均显著下降(P<0.01)。结论成功获得过表达miR-29b的重组慢病毒颗粒,miR-29b能够抑制其靶基因MCL-1的表达,并对HGC-27细胞的迁移和增殖有明显的抑制作用。

关键词： miR-29b 胃癌细胞慢病毒细胞迁移细胞增殖

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人乳头瘤病毒引起裸鼠生殖系统病变的研究

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病毒学报 2009年第1期25卷 35-40页

作者：潘巍巍曹利仙易发平徐营卜友泉赖国旗马永平宋方洲重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 嘉兴学院医学院浙江嘉兴314001 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心 400016 重庆医科大学动物实验中心重庆400016

重组的腺病毒Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7在293细胞中包装后得到上清液,将Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7病毒上清液以及做为对照的重组腺病毒空载体pAd-CMV和pAdtrack-K14的上清液,经过纯化后,通过裸鼠的尾缘静脉注射到裸鼠体内,每天注射0... 详细信息

重组的腺病毒Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7在293细胞中包装后得到上清液,将Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7病毒上清液以及做为对照的重组腺病毒空载体pAd-CMV和pAdtrack-K14的上清液,经过纯化后,通过裸鼠的尾缘静脉注射到裸鼠体内,每天注射0.05 mg雌激素给注射病毒的裸鼠,同时做对照。12周后给裸鼠注射2.5%的阿佛丁进行麻醉,取其子宫、阴道、卵巢、乳腺等组织,浸泡在3.75%的多聚甲醛中4℃固定过夜,做石蜡包埋切片、HE染色、免疫组化检测P53蛋白和Bcl-2蛋白的表达,取裸鼠的各个组织提取DNA、RNA和蛋白质,然后分别检测有无重组腺病毒的感染、病毒表达的情况及E6蛋白的表达。HE染色结果显示注射腺病毒Ad-K14-E6/E7的裸鼠(实验组2)子宫颈-子宫体移行组织增生明显。SP法免疫组化检测突变型P53和Bcl-2在该组裸鼠的子宫基质细胞表达增加,并且RT-PCR检测该组裸鼠子宫组织也有E6/E7的表达,Western Blot检测该组子宫组织也有E6蛋白的表达。动物实验结果表明K14启动子增加了E6/E7在裸鼠子宫组织的表达,同时也发现该组裸鼠的子宫颈-子宫体移行组织有增生改变。

关键词：人乳头瘤病毒腺病毒 E6/E7基因裸鼠

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GW3965在Raji细胞中对BLyS表达的影响

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第三军医大学学报 2011年第13期33卷 1342-1345页

作者：黄艳黄刚胡长江曾益军许志臻陈岺曦何凤田宋方洲重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXRs)的特异性激动剂GW3965在Raji细胞中对B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)表达的影响。方法 MTT法检测不同浓度的GW3965(浓度分别为0.5、5、10μmol/L)对Raji细胞活性的影响,观察时间为加入GW3965共孵育后24 h。用LXR的特异性激动剂GW3965刺激人B细胞淋巴瘤株Raji细胞,经RT-PCR检测LXR特异性靶基因三磷酸腺苷结合盒A1(ATP-binding cassette,ABCA1)mRNA的表达;经RT-PCR和Western blot检测BLyS的表达。结果对照组1‰DMSO D(492)为(0.632±0.055),0.5、5μmol/L和10μmol/L的GW3965 D(492)为(0.609±0.073)、(0.612±0.052)和(0.628±0.055)。LXR的特异性配体GW3965对细胞活性无影响(P>0.05)。GW3965作用于Raji细胞后,ABCA1 mRNA表达剂量依赖性上调,LXR活化后可在转录和翻译水平剂量依赖性下调抑制BLyS的表达。结论 LXR在Raji细胞中可抑制BLyS的表达。

关键词： GW3965 B淋巴细胞刺激因子 Raji细胞

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体内外高糖对血管生成素样蛋白3表达的影响

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天津医药 2010年第8期38卷 641-643页

作者：肖亚雄王继红孔渝菡重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心、基础医学院生物化学与分子生物学教研室 400016 重庆医科大学附属第一医院神经病学实验室

目的:观察人体血液中葡萄糖浓度对血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)基因及蛋白质表达的影响,探讨ANGPTL3与糖尿病发生的关系。方法:以人血清和L02细胞作为研究对象,从临床采集健康人(健康对照组)、高血糖组空腹血清各10例,各组男女比例均为5... 详细信息

目的:观察人体血液中葡萄糖浓度对血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)基因及蛋白质表达的影响,探讨ANGPTL3与糖尿病发生的关系。方法:以人血清和L02细胞作为研究对象,从临床采集健康人(健康对照组)、高血糖组空腹血清各10例,各组男女比例均为5∶5。用ELISA法测定血清ANGPTL3蛋白质浓度、全自动生化仪测定血糖浓度。将L02细胞置于含5.6、7.1、11.2及20.0mmol/L葡萄糖培养基中培养,以葡萄糖浓度5.6mmol/L为对照组,用RT-PCR方法检测L02细胞ANGPTL3的mRNA表达量,并用Western Blot方法检测其蛋白质表达量。结果:高血糖组血清ANGPTL3蛋白质含量较健康组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。体外培养基中高浓度葡萄糖可以促进L02细胞ANGPTL3基因和蛋白质表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体内外高糖环境均可以上调ANGPTL3的表达。ANGPTL3高表达可能与糖尿病发生存在一定关联。

关键词：血管生成素类糖尿病葡萄糖血液体外研究肝细胞 RNA,信使

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mIL-21-hIgGFc融合蛋白在293E细胞中的表达纯化及其对CD8^+T细胞表型的影响

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中国免疫学杂志 2014年第7期30卷 884-887,892页

作者：黄启彬刘明月符少月邢巧刘潇淇王盛典易发平重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国科学院生物物理研究所中国科学院感染与免疫重点实验室北京100101

目的:在293E细胞中表达小鼠IL-21-hIgGFc融合蛋白,并检测该蛋白对CD8+T细胞表型的影响。方法:运用RT-PCR方法从BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞扩增出IL-21基因,插入到PTT3-hIgGFc载体上,获得重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc;用磷酸钙瞬时转染293E细... 详细信息

目的:在293E细胞中表达小鼠IL-21-hIgGFc融合蛋白,并检测该蛋白对CD8+T细胞表型的影响。方法:运用RT-PCR方法从BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞扩增出IL-21基因,插入到PTT3-hIgGFc载体上,获得重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc;用磷酸钙瞬时转染293E细胞,48 h和72 h后分别收集培养上清。培养上清经MOLLIPORE LabscaleTMTFF system浓缩后,Protein G琼脂糖柱纯化获得mIL-21-hIgGFc融合蛋白,再用ELISA和SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的含量和纯度。mIL-21-hIgGFc刺激P1A小鼠的CD8+T细胞,72 h后,运用流式细胞术检测其表型改变情况。结果:重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc经酶切和测序确定载体构建成功,ELISA检测表明293E细胞上清中含有787 ng/ml,SDS-PAGE结果显示得到了较纯的融合蛋白,纯化后获得500μg融合蛋白mIL-21-hIgGFc。融合蛋白mIL-21-hIgGFc处理P1A小鼠CD8+T细胞后,CD44lowCD62Lhi CD8+T细胞明显增多。结论:我们成功构建了PTT3-mIL21-hIgGFc重组质粒,在293E细胞中表达并纯化出mIL21-hIgGFc融合蛋白。mIL21-hIgGFc能促进CD8+T细胞向CD44lowCD62LhiCD8+记忆干细胞表型分化,这对于肿瘤过继免疫治疗方案的改进具有重要的参考意义。

关键词：白细胞介素21(IL-21) 293E细胞表达纯化 CD8^+T细胞

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