检索结果-内蒙古大学图书馆

重庆医科大学学报 2017年第2期42卷 219-224页

作者：赵运胜卜友泉廖飞秦皇岛市第一医院检验科秦皇岛066000 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物... 详细信息

目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物进行PCR扩增;将所得片段连接到T载体,转化后筛选阳性克隆测序。结果:据密码子偏好性调整简并引物,获得该尿酸酶从第六位氨基酸到终止密码子之间的编码序列;此尿酸酶共含322个氨基酸残基,原核尿酸酶靠近N端的保守序列ATDSMKNFI从该尿酸酶第70位氨基酸残基左右开始,另一保守序列GKVYTEPR从该尿酸酶第290位氨基酸残基开始但变为GAVFTEPR。结论:用简并引物PCR快速克隆获得了苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列。

关键词：苛求芽孢杆菌尿酸酶简并引物PCR 基因测序

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

K14和CMV启动子驱动裸鼠体内HPV16 E6/E7基因表达的差异

引用

中国生物化学与分子生物学报 2009年第7期25卷 620-626页

作者：潘巍巍徐营曹利仙沈忠飞李平郭连军邬维娅宋方洲嘉兴学院医学院生物教研室浙江嘉兴314001 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性.为探讨不同启动子驱动HPVE6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒(CMV)启动子的E... 详细信息

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性.为探讨不同启动子驱动HPVE6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒(CMV)启动子的E6/E7腺病毒载体(pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7),pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7、以及作为对照的重组腺病毒空载体pAdtrack-K14和pAd-CMV同源重组后,分别在293细胞中包装,收集重组病毒Ad-K14-E6/E7、Ad-CMV-E6/E7、Adtrack-K14和Ad-CMV,通过尾缘静脉注射到随机分组的裸鼠体内,并每d向裸鼠腹腔注射0.05 mg雌激素.采用RT-PCR和Western免疫印迹检测不同实验组E6/E7 mRNA和蛋白表达水平,免疫组化法检测P53和Bcl-2蛋白表达.结果显示,注射病毒Ad-K14-E6/E7(实验组1)裸鼠子宫体中E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白高表达,而其它组织中低表达;注射病毒Ad-CMV-E6/E7(实验组2)裸鼠各组织E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白均低表达.研究表明,在裸鼠体内角蛋白K14启动子可以调控E6/E7在子宫体中表达,CMV启动子未能诱导E6/E7在子宫体中表达.

关键词：人乳头瘤病毒腺病毒 E6/E7基因裸鼠 CMV启动子角蛋白K14启动子

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人乳头瘤病毒关键基因在裸鼠体内表达的初步研究

引用

中国病理生理杂志 2009年第2期25卷 209-214页

作者：潘巍巍徐营易发平曹利仙卜友泉赖国旗宋方洲重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 嘉兴学院医学院浙江嘉兴314001 教育部临床检验诊断学重点实验室重庆400016 重庆医科大学动物实验中心重庆400016

目的:初步研究HPV16E6/E7基因在裸鼠体内不同组织引起的病变。方法:将重组腺病毒Ad-CMV-E6/E7、Ad-K14-E6/E7病毒上清以及作为对照的重组腺病毒空载体pAd-CMV和pAdtrack的上清液,经过纯化后,通过裸鼠的尾缘静脉注射到裸鼠体内,并每天注... 详细信息

目的:初步研究HPV16E6/E7基因在裸鼠体内不同组织引起的病变。方法:将重组腺病毒Ad-CMV-E6/E7、Ad-K14-E6/E7病毒上清以及作为对照的重组腺病毒空载体pAd-CMV和pAdtrack的上清液,经过纯化后,通过裸鼠的尾缘静脉注射到裸鼠体内,并每天注射0.05mg雌激素到注射病毒的裸鼠,同时做阴性对照。12周后给裸鼠注射2.5%阿佛丁进行麻醉,并将其耳朵、头颈部皮肤、口腔黏膜、结肠、直肠、子宫颈-阴道移行区等组织取出,浸泡在3.75%多聚甲醛中4℃固定过夜,然后做石蜡包埋切片、HE染色、免疫组化检测P53蛋白和Bcl-2的表达,取裸鼠的各个组织提取DNA、RNA和蛋白质,然后分别检测有无重组腺病毒的感染、病毒表达的情况及E6蛋白的表达。结果:实验组1注射腺病毒Ad-K14-E6/E7的裸鼠组织HE染色结果显示裸鼠子宫颈-阴道移行处的增生较明显。SP法免疫组化发现突变型P53和Bcl-2在该组裸鼠的子宫颈-阴道移行处表达都增加(P<0.05),并且RT-PCR检测子宫颈-阴道移行处组织也有E6/E7的表达,Western blotting检测该组织也有E6蛋白的表达。结论:K14启动子增加了E6/E7在裸鼠子宫颈-阴道移行处的表达,并且使子宫颈-阴道移行处的上皮组织发生病变。

关键词：乳头状瘤病毒人腺病毒基因 E6/E7 小鼠裸

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

敲减人MCHR2基因抑制CHO细胞的放射性配体受体结合能力及Ca^2＋释放

引用

中国生物化学与分子生物学报 2008年第1期24卷 60-68页

作者：袁成福杨俊霞刘革力卜友泉张琴易发平马永平宋方洲重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室教育部临床检验诊断学重点实验室重庆400016 湖北民族学院医学院恩施445000

研究人黑色素浓集激素受体2（MCHR2）基因特异的小发夹RNA（shRNA）真核表达载体pGenesil-1-MCHR2-shRNA对MCHR2表达及特征的影响．将pGenesil-1-MCHR2-shRNA转染到稳定表达人MCHR2基因的CHO细胞中，通过RT-PCR和Western印迹检测MCHR2表达的变化；放射性配体结合实验（RBA）检测受体最大结合容量Bmax及平衡解离常数Kd值的变化；钙流检测实验观察配体MCH刺激后单个细胞Ca^2＋释放及MCH半数有效浓度EC50的变化,与转染pGenesil-1空载体组比较，pGenesil-l-MCHR2-shRNA能使MCHR2基因mRNA表达减少45．8％～66．4％；蛋白表达减少44．2％～81．0％；Bmax减少39．4％～78．7％，Kd值升高40．9％～81．9％；EC50升高114．8％～822．4％．MCHR2基因shRNA真核表达载体能有效抑制MCHR2基因的表达，减少Bmax、升高虬值及EC50，从而对MCHR2生物活性等特征产生影响。

关键词： MCHR2 shRNA真核表达载体基因表达生物特征

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

麦尔多拉蓝作为电子介体的一次性血清酒精生物传感器

引用

分析化学 2007年第12期35卷 1801-1804页

作者：罗鹏谢国明宋方洲邓世雄徐华健重庆医科大学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学重庆市重点实验室重庆医科大学基础医学院法医研究所重庆医科大学附属第一医院

基于丝网印刷技术制备一次性碳电极,用Nafion固定麦尔多拉蓝(MS)作为电子介体,通过交联法用戊二醛将乙醇脱氢酶和氧化型辅酶Ⅰ固定于Nafion-MB修饰的电极上,制备一次性血酒精生物传感器。该传感器表现出良好的特异性、灵敏度和准确性。... 详细信息

基于丝网印刷技术制备一次性碳电极,用Nafion固定麦尔多拉蓝(MS)作为电子介体,通过交联法用戊二醛将乙醇脱氢酶和氧化型辅酶Ⅰ固定于Nafion-MB修饰的电极上,制备一次性血酒精生物传感器。该传感器表现出良好的特异性、灵敏度和准确性。传感器响应电流与血清酒精浓度在2.0×10-42.5×10-3mol/L之间呈现良好的线性关系;检出限为1.3×10-4mol/L,达到95%稳态响应时间不超过20 s。探讨了pH、缓冲液、温度及干扰物质等对一次性血酒精生物传感器的影响。将传感器用于血清酒精实际样品的测定,取得了满意的结果。

关键词：乙醇脱氢酶氧化型辅酶Ⅰ 血酒精检测麦尔多拉蓝

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立

引用

第三军医大学学报 2007年第1期29卷 32-35页

作者：袁成福杨俊霞魏丽丽石华陈济宋方洲重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室教育部临床检验诊断学重点实验室重庆400016

目的构建人MCHR2真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂... 详细信息

目的构建人MCHR2真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、W estern b lot及免疫荧光法检测MCHR2的表达。结果成功构建了pcDNA3.1(+)/MCHR2真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达目的基因。结论真核表达载体成功构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR2的功能奠定良好的实验基础。

关键词： MCHR2 真核表达载体稳定转染的CHO细胞系基因表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用

引用

第三军医大学学报 2007年第6期29卷 486-489页

作者：成海恩张溢张翠莉潘巍巍石华易发平郭风劲宋方洲重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学公共卫生学院生殖医学系遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室

目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫... 详细信息

目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变。结果成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P<0.05)。病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域。结论沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用。

关键词：宫颈肿瘤 RNA干扰 HPV16 E6基因

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人宫颈癌Ca Ski细胞IL-24基因的克隆鉴定与真核表达

引用

第四军医大学学报 2007年第5期28卷 469-471页

作者：石华成海恩易发平杨俊霞张溢马永平宋方洲重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆市生物化学与分子药理学重点实验室临床检验诊断学教育部重点实验室重庆医科大学基础医学研究所重庆400016

目的:克隆人IL-24基因并构建真核表达载体,转染Ca Ski细胞进行真核表达.方法:利用RT-PCR技术扩增出Ca Ski细胞中的IL-24基因.将IL-24基因克隆入pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24.将重组质粒转染入CaSki细胞,利用Wester... 详细信息

目的:克隆人IL-24基因并构建真核表达载体,转染Ca Ski细胞进行真核表达.方法:利用RT-PCR技术扩增出Ca Ski细胞中的IL-24基因.将IL-24基因克隆入pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24.将重组质粒转染入CaSki细胞,利用Western blot检测hIL-24的表达.结果:PCR及测序结果均证实成功克隆了人IL-24基因,构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24,该质粒被转染入Ca Ski细胞中能表达出hIL-24蛋白.结论:成功构建了hIL-24基因的真核表达载体.

关键词：白细胞介素24 克隆真核表达 Ca Ski细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：