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链脲佐菌素致阿尔茨海默病模型大鼠脑内mTOR/P70S6K/IRS-1信号通路的变化

重庆医科大学学报 2015年第5期40卷 687-692页

作者：王华杨容余华荣重庆医科大学基础医学院生理学教研室重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016

目的:观察侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对大鼠脑内m TOR/P70S6K/IRS-1信号通路的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组,每组各15只,对照组于第1天和第3天ICV注射生理盐水,模... 详细信息

目的:观察侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对大鼠脑内m TOR/P70S6K/IRS-1信号通路的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组,每组各15只,对照组于第1天和第3天ICV注射生理盐水,模型组于第1天和第3天侧脑室注射STZ(ICV-STZ,3 mg/kg)建立AD模型。第1次注射后36 d采用Morris水迷宫检测2组大鼠空间学习和记忆能力的变化;Western blot检测2组大鼠大脑皮质和海马组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-m TORSer2448)、核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(P70 ribosomal S6 protein kinase,P70S6K)、磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(phosphorylated P70 ribosomal S6 protein kinase,p-P70S6KThr389)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substract-1,IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(phosphorylated insulin receptor substract-1,p-IRS-1Ser636)蛋白的表达;HE染色观察2组大鼠大脑皮质和海马组织形态学的改变;甲硫素S染色观察2组大鼠脑内Aβ的沉积。结果:Morris水迷宫结果显示ICV-STZ能明显降低大鼠目标象限停留时间[对照组:(55.945±9.447)s,模型组:(31.961±5.346)s,t=8.558,P=0.000]和穿越平台次数[对照组:(7.533±2.560)次,模型组:(2.867±1.506)次,t=6.086,P=0.000];HE染色可见:ICV-STZ大鼠大脑皮质和海马的部分细胞出现了明显的固缩和肿胀;甲硫素S染色发现:在ICV-STZ处理后,大鼠脑内出现Aβ的大量沉积。Western blot结果表明:ICV-STZ能同时增加大鼠大脑皮质p-P70S6KThr389[对照组:(0.268±0.066),模型组:(0.654±0.079),t=-8.409,P=0.000]、p-IRS-1Ser636[对照组:(0.710±0.092),模型组:(1.033±0.135),t=-4.417,P=0.002]和海马p-P70S6KThr389[对照组:(0.405±0.064),模型组:(0.732±0.077),t=-7.339,P=0.000]、p-IRS-1Ser636[对照组:(0.498±0.093),模型组:(0.836±0.102),t=-5.496,P=0.001]蛋白的表达,但不影响大鼠大脑皮质和海马P70S6K、m TOR、p-m TORSer2448、IRS-1蛋白的表达。结论:ICV-STZ能增加大鼠脑内m TOR/P70S6K/IRS-1信号通路的激活,提示异常活化的m TOR/P70S6K/IRS-1信号通路可能参与了AD的发生发展。

关键词：阿尔茨海默病哺乳动物雷帕霉素靶蛋白核糖体40S小亚基S6蛋白激酶胰岛素受体底物-1

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大鼠蛛网膜下腔出血致脑血管痉挛模型的建立

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重庆医科大学学报 2015年第1期40卷 27-31页

作者：李英博竹梅陈笛王莎莉重庆医科大学神经科学研究中心/生理学教研室重庆400016 泸州医学院生理教研室泸州646600

目的:应用改良的枕大池二次注血法建立大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后脑血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)模型。方法:成年雄性SD大鼠117只随机分为假手术组(n=52)和SAH(n=65)模型组,2组又随机分为1、3、5、10 d和1... 详细信息

目的:应用改良的枕大池二次注血法建立大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后脑血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)模型。方法:成年雄性SD大鼠117只随机分为假手术组(n=52)和SAH(n=65)模型组,2组又随机分为1、3、5、10 d和14 d组。SAH组经改良的枕大池二次注血法建立SAH模型。假手术组用等量灭菌生理盐水代替非抗凝自体血注入枕大池。观察各组动物自发活动、脑含水量、脑组织学及基底动脉组织学改变。结果:与假手术组相比,SAH各组大鼠自发活动评分在手术后第3天明显降低(P=0.001),脑含水量在SAH后1 d明显增加(P=0.000)。光镜下,SAH 1、3、5 d组基底动脉管径(P=0.001)、管腔面积明显减小(P=0.002),管壁厚度明显增大(P=0.000),差异均有统计学意义。结论:应用改良的枕大池二次注血法可以成功建立大鼠SAH后CVS模型。

关键词：蛛网膜下腔出血脑血管痉挛动物模型

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白藜芦醇通过Sirtuins 1通路促进自噬减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

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基础医学与临床 2015年第4期35卷 496-501页

作者：石瑶郭倩周也涵万丹叶秀峰重庆医科大学基础医学院病理学教研室神经科学研究中心重庆400016

目的观察白藜芦醇(Res)在大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤中脑保护作用与自噬的关系。方法随机将大鼠分成假手术组(S组)、脑缺血/再灌注模型组(I/R组)、低和高剂量(15和40 mg/kg)Res处理组(R1和R2组),其中将R2组另设2个亚组:R2+3-甲... 详细信息

目的观察白藜芦醇(Res)在大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤中脑保护作用与自噬的关系。方法随机将大鼠分成假手术组(S组)、脑缺血/再灌注模型组(I/R组)、低和高剂量(15和40 mg/kg)Res处理组(R1和R2组),其中将R2组另设2个亚组:R2+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和R2+Sirt1抑制剂Sirtinol组。线栓法构建大鼠I/R模型。缺血2 h,再灌注24 h后,用尼氏染色观察皮质区的组织学形态;用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑组织的梗死体积;用real-time QPCR和Western blot检测脑组织中Sirt1和LC3的mRNA和蛋白表达。结果与S组相比,I/R组大鼠可见明显的脑梗死灶,显微镜下见病理损伤改变,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Sirt1表达均有上升。Res预处理后,能明显减轻I/R大鼠皮质区的病理损伤,减少脑梗死体积(P<0.01),显著增加I/R大鼠脑组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Sirt1的表达(P<0.01);而Sirt1抑制剂及3-MA能削弱Res的作用。结论 Res减轻大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的脑保护作用可能与Res通过提高Sirt1的表达进而促进自噬来完成的。

关键词：脑缺血/再灌注损伤白藜芦醇自噬沉默信息调控因子1

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Sulfiredoxin-1对星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用

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第三军医大学学报 2014年第21期36卷 2173-2177页

作者：周云川周杨巫静娴喻姗姗赵涌重庆医科大学基础医学院病理学教研室神经科学研究中心重庆400016

目的探讨Sulfiredoxin-1(Srxn1)对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的星形胶质细胞损伤的保护作用。方法 1应用RNAi技术将Srxn1干扰小发夹RNA(shRNA)及阴性载体(negative control)转染至星形胶质细胞,Real-time quantitative PCR(QPCR)和Western blot检测转染后Srxn1的基因和蛋白表达水平;2实验分为control组、control+OGD/R组、negative control(NC)+OGD/R组、sh-Srxn1+OGD/R组(n=3),细胞转染72 h后建立OGD模型,6 h后予以复氧,模拟再灌注模型;3复氧12 h后,MTS法检测细胞活性,Hoechst 33342检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果 1shRNA-Srxn1转染细胞后,与空白组和阴性组比较,干扰组Srxn1 mRNA及蛋白表达水平明显降低,分别降低47%和58.5%;2MTS结果显示,干扰sh-Srxn1+OGD/R组细胞活性较control+OGD/R组显著下降[(38.79±2.14)vs(69.35±10.54),P<0.05];Hoechst 33342结果显示,干扰sh-Srxn1+OGD/R组细胞凋亡较control+OGD/R组明显增加[(51.67±7.64)vs(25.00±5.00),P<0.01];3Western blot结果显示,与control+OGD/R组比较,干扰sh-Srxn1+OGD/R组细胞Bcl-2的表达明显降低(P<0.05),Bax的表达明显上调(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01)。结论 Srxn1对OGD/R引起的星形胶质细胞的氧化损伤具有重要的保护作用,这种保护可能与其抗凋亡作用相关。

关键词： Sulfiredoxin-1 干扰星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧凋亡

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多克隆及单克隆P24抗体在石蜡组织切片上检测BDV-P24蛋白质的应用

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重庆医科大学学报 2014年第7期39卷 1005-1009页

作者：张鸿志李丹雷阳邓婧陈世刚黄华李文娟陈建军王啸张亮黄荣忠刘霞谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科、重庆医科大学神经科学研究中心、重庆市神经生物学重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的:验证本课题组前期制备的多克隆及单克隆P24抗体能否在石蜡组织切片上检测博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24蛋白质)以及探索其运用的条件。方法:选择出生24 h内的SD大鼠20只为实验组颅内注射BDV病毒液,对照组大鼠2... 详细信息

目的:验证本课题组前期制备的多克隆及单克隆P24抗体能否在石蜡组织切片上检测博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24蛋白质)以及探索其运用的条件。方法:选择出生24 h内的SD大鼠20只为实验组颅内注射BDV病毒液,对照组大鼠20只在相同部位注射磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS),未经注射的SD大鼠和C57小鼠各40只作为阴性实验对照,饲养到60 d取脑石蜡包埋制片;免疫组化染色用Envision两步法,一抗为多克隆或单克隆P24抗体,以PBS代替一抗作为空白对照,P24抗体的稀释浓度分别从1∶50、1∶100、1∶200、1∶400直到1∶5 000;以高倍镜下神经细胞细胞质呈棕黄色或棕褐色颗粒为阳性,将每张切片阳性细胞比例评分乘以阳性强度评分计算总分。结果:多克隆P24和单克隆P24抗体分别在BDV感染大鼠实验组与阴性对照组的染色评分差异有统计学意义(多克隆抗体Z=-3.108,P=0.000;单克隆抗体Z=-4.605,P=0.000);在多克隆P24抗体稀释度中,1∶200、1∶400的敏感性好而背景着色较轻,在单克隆P24抗体稀释度中,1∶100、1∶200、1∶400的敏感性好而无背景着色。结论:多克隆及单克隆P24抗体在石蜡组织切片上能检测出BDV P24蛋白质;并且多克隆P24抗体推荐的浓度为1∶200和1∶400,单克隆P24抗体的推荐浓度为1∶100、1∶200和1∶400。

关键词：多克隆P24抗体单克隆P24抗体博尔纳病病毒免疫组化染色

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表皮神经嵴干细胞移植对大鼠损伤脊髓组织中脑源性神经营养因子表达的影响

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重庆医科大学学报 2014年第4期39卷 433-437页

作者：刘争张洁元陈魁君李兵仓段朝霞张路余华荣重庆医科大学基础医学院生理学教研室、神经科学研究中心重庆400016 第三军医大学大坪医院野战外科研究所重庆400042 西南大学淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室重庆400715

目的:观察表皮神经嵴干细胞(epidermal neural crest stem cells,EPI-NCSCs)移植治疗大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的作用以及SCI组织中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophical factor,BDNF)表达的变化,从神经营养因子的角度探讨EPI-NCSCs移植修复SCI的机制。方法:分离培养绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因大鼠的EPINCSCs,备移植用。60只SD大鼠均暴露T10脊髓并在NYU-Ⅱ撞击机(10 g 25 mm致伤力)挫伤脊髓制作SCI模型,随机分为空白损伤组(A组)、培养基移植组(B组)、EPI-NCSCs移植组(C组)。SCI模型大鼠损伤1周后将EPI-NCSCs细胞悬液移植入C组大鼠SCI处,B组用单纯DMEM/F12培养基代替,空白损伤组不做处理。伤后每周进行一次运动功能评分,移植后1、3、6周取材行酶联免疫分析、免疫组织化学染色、免疫荧光染色以及Western blot检测BDNF蛋白的表达。结果:移植术后第2周起C组运动功能评分高于同期A组(2、3、4、5、6周,P值分别为0.003、0.000、0.000、0.000、0.000)和B组(2、3、4、5、6周,P值分别为0.044、0.000、0.006、0.000、0.008)。酶联免疫分析显示C组BDNF蛋白在移植后3周表达高于A组(P=0.009)和B组(P=0.013),移植后6周表达量显著高于A组(P=0.003)和B组(P=0.003)。免疫组化和免疫荧光结果显示移植后3周和6周,C组BDNF表达高于同期A组和B组。Western blot结果显示移植后6周,C组BDNF表达高于同期A组(P=0.000)和B组(P=0.000)。结论:EPI-NCSCs移植能促进SCI内BDNF的表达,改善局部微环境,从而有助于大鼠损伤脊髓的修复。

关键词：脊髓损伤表皮神经嵴干细胞细胞移植脑源性神经营养因子

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姜黄素对髓母细胞瘤PI3K/Akt信号通路的作用

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第三军医大学学报 2013年第6期35卷 518-522页

作者：毛蜀何密斯刘桂元张雄李昱唐俐重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的探讨姜黄素对髓母细胞瘤PI3K/Akt信号通路的作用。方法细胞培养至对数生长期后设对照组(Ct组)和姜黄素处理组(Cur组)。Cur组用20、40、60、80、100μmol/L姜黄素处理24、48、72 h。采用MTT法检测姜黄素对髓母细胞瘤Daoy细胞的生长... 详细信息

目的探讨姜黄素对髓母细胞瘤PI3K/Akt信号通路的作用。方法细胞培养至对数生长期后设对照组(Ct组)和姜黄素处理组(Cur组)。Cur组用20、40、60、80、100μmol/L姜黄素处理24、48、72 h。采用MTT法检测姜黄素对髓母细胞瘤Daoy细胞的生长抑制作用。流式细胞术分析Daoy细胞凋亡率;免疫细胞化学染色检测PI3K、p-Akt和Akt在细胞中表达情况;Western blot和RT-PCR分别检测PI3K、p-Akt和Akt蛋白及mRNA的表达水平。结果不同浓度姜黄素作用不同时间后,细胞受到不同程度的抑制,呈时间-剂量依赖关系(P<0.05)。姜黄素作用48 h抑制作用显著,差异有统计学意义(F=131.829,P<0.05),且IC50为35μmol/L,细胞凋亡也最明显(29.7%)。PI3K、Akt和p-Akt蛋白在Ct组中的阳性表达率分别为80.7%、84.8%和87.5%;Cur组阳性表达率均明显下降,分别为25.3%、58.8%和26.7%。两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot显示Ct组PI3K、Akt和p-Akt蛋白灰度比值分别为(1.141±0.032)、(1.047±0.174)、(1.173±0.013);Cur组PI3K和p-Akt蛋白灰度比值降低,分别为(0.875±0.029)、(0.958±0.150)。两组比较,差异有统计学意义(t=15.530,33.482,P<0.05)。RT-PCR显示Ct组PI3K mRNA灰度比值显著高于Cur组[(1.166±0.031)vs(0.833±0.033),t=12.468,P<0.05]。结论姜黄素可能通过抑制PI3k/Akt信号通路,阻碍髓母细胞瘤Daoy细胞的增殖、诱导凋亡。

关键词：髓母细胞瘤姜黄素 PI3K/Akt信号通路

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罗格列酮调节IDE和GSK-3β的活性改善阿尔茨海默病动物认知能力

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重庆医科大学学报 2013年第6期38卷 620-625页

作者：杨文青马晶宋晓征余华荣重庆医科大学基础医学院生理教研室神经科学研究中心重庆400016 三六三医院神经内科成都610041

目的:研究作为胰岛素增敏剂的过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorsγ,PPARγ)激动剂-罗格列酮对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)动物模型的认知水平、β淀粉样蛋白(amyloidβ-peptide,Aβ)和Tau的影响,并探讨其改善AD模型认知能力的可能机制。方法:通过侧脑室注射链脲佐菌素建立AD动物模型,并用罗格列酮处理动物,第1次手术后21 d用Morris水迷宫检测动物的学习和记忆水平;采用Western blot检测胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,IDE)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β)、Tau、磷酸化Tau(phosphoTau,pTau)的表达;通过免疫组化检测Aβ40和Aβ42在大脑的沉积。结果:Morris水迷宫结果显示罗格列酮可以明显改善AD大鼠的认知能力(P<0.001);Western blot结果显示罗格列酮能增加IDE的表达(P=0.028)、降低GSK-3β的活性(P=0.012)、减少Tau的磷酸化水平(P=0.001);免疫组化结果显示罗格列酮处理的大鼠,其大脑皮质Aβ40和Aβ42的沉积量均较模型组减少。结论:罗格列酮可以明显改善AD动物的认知能力、Aβ的沉积和Tau的磷酸化,机制可能与其调节胰岛素信号通路相关的IDE和GSK-3β的表达有关。

关键词：阿尔茨海默病罗格列酮 β淀粉样蛋白 Tau 胰岛素降解酶糖原合成酶激酶-3β

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肿瘤坏死因子α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用

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中华烧伤杂志 2012年第1期28卷 19-24页

作者：代卉黄宏王莎莉徐祥简宇崔文慧张猛张波蒋建新重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心 400016 重庆医科大学基础医学院生理教研室 400016 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的观察TNF-α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用,探讨纤维化疾病发生的机制. 方法取健康胎儿脐带,体外酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用免疫荧光法进行鉴定.取第3～5代对数生长期HUVEC分别接种于12孔板和6孔板中,... 详细信息

目的观察TNF-α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用,探讨纤维化疾病发生的机制. 方法取健康胎儿脐带,体外酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用免疫荧光法进行鉴定.取第3～5代对数生长期HUVEC分别接种于12孔板和6孔板中,均按随机数字表法分为6组：对照组,培养液中不加任何刺激因素；5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组,分别在培养液中添加相应终浓度TNF-α,每组3个样本.培养72 h后倒置相差显微镜下观察各组细胞形态；免疫荧光法检测12孔板中各组细胞凝血因子Ⅷ和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,计算2种因子双阳性细胞数比值及吸光度值比值；RT-PCR检测6孔板中各组细胞钙黏蛋白、α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA的表达（以灰度值比值表示）.对数据行单因素方差分析及LSD检验. 结果（1）原代培养HUVEC为圆形、短梭形或扁平形,传代后细胞呈铺路石样旺盛生长.经第1、2、3、4、5次传代后HUVEC凝血因子Ⅷ阳性表达率分别为（85.5±1.8）％、（88 1±5 0）％、（93.6±3.7）％、（92.9±4 8）％、（89.5±1.1）％,明显高于原代培养HUVEC的（81.4±3.8）％,F值均为7.481,P值均小于0.05.（2）对照组细胞呈圆形、短梭形或扁平形,细胞间连接紧密；5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组随着TNF-α浓度的增加,细胞形态逐渐向长梭形转变,细胞间连接减少、间隙变大.（3）对照组中凝血因子Ⅷ、α-SMA双阳性细胞数比值和吸光度值比值分别为0.055±0 015、0.078±0 017,均显著低于5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组的0 257±0.106、0 280±0.129、0.505±0 059、0.817±0.035、0.929±0.101和0.437±0 040、0 456±0.097、0 496±0.082、0.787±0 131、0.885±0 087,F值分别为45 009、50.099,P值均小于0.01.（4）5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组细胞中钙黏蛋白mRNA水平分别为0.70±0.05、0.63±0 06、0 60±0.10、0.45±0.16、0 26±0.14,后4组显著低于对照组的0 83±0.03,F值均为11.593,P ＜0.05或P＜0.01.5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA水平分别为0.45±0.10、0.51±0.16、0.49±0 12、0.60±0.09、0 76±0.03和0.38±0.18、0.45±0.15、0 52±0 12、0 66±0.17、0.76±0.20,后3组2项指标水平显著高于对照组的0.37±0.14、0 31±0 12,F值分别为7.839、2.898,P ＜0.05或P＜0.01. 结论 TNF-α呈明显浓度依赖性促进HUVEC向间质细胞转化,可能是瘢痕形成中纤维化组织内肌成纤维细胞的又一重要来源.

关键词：肿瘤坏死因子α 内皮细胞间质细胞细胞转分化肌成纤维细胞

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粒细胞巨噬细胞刺激因子对大鼠创面哺乳动物西罗莫司靶蛋白信号通路的作用

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中华烧伤杂志 2012年第1期28卷 36-41页

作者：崔文慧黄宏徐祥郭敏代卉简宇郭韡邢伟蒋建新杨戎重庆医科大学基础医学院生理教研室 400016 重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心 400016 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的了解应用粒细胞巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）对大鼠创面愈合的影响及对哺乳动物西罗莫司（雷帕霉素）靶蛋白（mTOR）信号通路的作用. 方法将50只SD大鼠按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组25只,于其背部制作约2 cm×2 cm... 详细信息

目的了解应用粒细胞巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）对大鼠创面愈合的影响及对哺乳动物西罗莫司（雷帕霉素）靶蛋白（mTOR）信号通路的作用. 方法将50只SD大鼠按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组25只,于其背部制作约2 cm×2 cm全层皮肤缺损创面.治疗组大鼠创面外涂重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子（ rhGM-CSF）凝胶,10 μg/cm2,rhGM-CSF实际作用量为1×10-4 μg/cm2；对照组创面涂抹不含任何药物的凝胶基质,10 μg/cm2.2组每日给药1次直至创面愈合.于致伤后1、3、5、7、14 d,每组每时相点处死5只大鼠：（1）观察并计算创面愈合率.（2）于前4个时相点取创面组织标本,行HE染色观察组织病理学改变,ELISA法检测GM-CSF含量,蛋白质印迹法检测GM-CSF、CD31及mTOR信号通路相关分子P70S6K、磷酸化（p-）P70S6K、4E-BP1、p-4E-BP1、mTOR、p-mTOR表达量.对数据行t检验. 结果（1）伤后1d,2组大鼠创面愈合率接近（t=0.307,P＞0.05）；伤后3～ 14 d,治疗组创面愈合率明显高于对照组（t值为2.704～ 4.030,P ＜0.05或P ＜0.01）.（2）HE染色可见,与对照组同时相点相比,治疗组创面肉芽组织及微血管数量明显增多,创缘角化上皮细胞增殖明显.（3）ELISA法和蛋白质印迹检测结果显示,2组大鼠创面GM-CSF含量及蛋白表达量均在伤后3d达到峰值,对照组分别为（720.9±0.9）pg/mL、2.45±0.10,治疗组分别为（910.5±1.3）pg/mL、2 80±0.48.治疗组各时相点GM-CSF含量均明显高于对照组（t值为105.743～298.971,P值均为0.000）,治疗组伤后1、5、7 d GM-CSF蛋白表达量明显高于对照组（t值为4.070～5.275,P值均小于0.01）.（4）治疗组伤后1、3、7d创面组织中CD31表达量均明显高于对照组（t值为7.237～26.401,P值均小于0.01）.（5）治疗组伤后各时相点创面组织中mTOR和p-mTOR表达量均高于对照组（t值为2.921 ～23.143,P ＜0.05或P＜0.01）.治疗组P70S6K表达量伤后3、5、7d高于对照组（t值为2.950～5.275,P＜0 05或P＜0.01）,p-P70S6K表达量于伤后1、3、7d高于对照组（t值为3.307 ～22.793,P＜0.05或P＜0.01）.治疗组伤后1、3、5 d 4E-BP1表达量均明显低于对照组（t值为2.449～6.431,P＜0.05或P＜0.01）,p-4E-BP1表达量于伤后1、3、7 d高于对照组（t值为5.522～11.613,P值均小于0.01）. 结论 GM-CSF能促进大鼠创面组织mTOR蛋白及其下游信号分子P70S6K、4E-BP1的磷酸化,从而激活mTOR信号通路,促进创面愈合.

关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子信号传导哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白创面愈合

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