检索结果-内蒙古大学图书馆

热带医学杂志 2025年第2期25卷 282-288页

作者：冯文杰王芳应旗康古天乐董宇航张俊梅李冬静贺晓龙吴兴安延安大学生命科学学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710068 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

病毒感染性疾病一直是人类生命健康所面临的威胁之一,建立一个快速、精准的病毒核酸检测平台对于控制病毒的传播以及应对重大公共卫生安全事件具有重要意义。基于成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)以及CRISPR相关蛋白Cas13组成的CRISP... 详细信息

病毒感染性疾病一直是人类生命健康所面临的威胁之一,建立一个快速、精准的病毒核酸检测平台对于控制病毒的传播以及应对重大公共卫生安全事件具有重要意义。基于成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)以及CRISPR相关蛋白Cas13组成的CRISPR/Cas13系统开发出的核酸检测技术可以特异性识别特定的病毒核酸序列,激活Cas13蛋白活性,顺式切割靶标RNA的同时反式切割RNA检测探针实现检测结果的可视化,达到检测的目的。本文综述了基于CRISPR/Cas13开发出多种高特异性和高灵敏度的核酸检测技术,并且总结了这些检测技术在人类、动物以及植物感染性病毒中的应用;同时介绍了基于这些检测技术开发出的简便样品处理方法和高效的结果判读方法,实现在较短的时间内获得准确的结果。CRISPR/Cas13检测技术的不断改进和完善有助于在病毒大流行期间提供可行方案遏制病毒传播。

关键词：基于成簇规律间隔短回文重复序列 Cas13 切割活性病毒核酸检测

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肠道病毒D68型感染前后转录组分析及差异表达基因的验证

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第三军医大学学报 2021年第4期43卷 275-282页

作者：唐霞司俊卓卢楠何永林徐蕾包嘉佳唐佳玲杨春重庆医科大学基础医学院病原微生物学教研室重庆400016

目的探讨肠道病毒D68型(enterovirus D68, EV-D68)感染前后宿主细胞转录组的表达变化,寻找与EV-D68感染的相关基因及信号通路,为初步探索EV-D68的感染机制奠定基础。方法将病毒以感染复数(multiplicity of infection,MOI)0.01接种于人... 详细信息

目的探讨肠道病毒D68型(enterovirus D68, EV-D68)感染前后宿主细胞转录组的表达变化,寻找与EV-D68感染的相关基因及信号通路,为初步探索EV-D68的感染机制奠定基础。方法将病毒以感染复数(multiplicity of infection,MOI)0.01接种于人横纹肌瘤(rhabdomyosarcoma, RD)细胞,24 h后提取感染组和对照组细胞总RNA进行转录组测序,筛选差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs),对其进行GO和KEGG富集分析,并用RT-qPCR验证8个主要差异表达的基因(EGR1、c-fos、ZNF625、ARRDC3、c-jun、ASNS、CHAC1、ADM2)。结果从测序结果中共筛选出差异表达两倍以上的基因140个,其中上调基因71个,下调基因69个。GO功能富集分析结果主要涉及离子的调控与应答;KEGG富集分析结果主要与甲状旁腺激素的合成分泌和作用、GnRH信号通路、Toll样受体信号通路、IL-17信号通路和MAPK信号通路等有关。RT-qPCR验证结果表明选取的8个基因上调或下调的差异表达倍数趋势与测序结果基本一致,c-fos和c-jun的表达量随病毒MOI及感染时长的增加而增加。结论通过对差异表达基因的功能和信号通路富集分析及验证,EV-D68加重哮喘的机制可能与c-fos上调有关;而MAPK信号通路可能在EV-D68感染期间发挥促炎作用和抗病毒作用。

关键词： EV-D68 转录组测序差异表达基因

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幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的体外活性

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世界华人消化杂志 2006年第8期14卷 789-794页

作者：毛小琴杨致邦张绍兰田一玲黄进重庆医科大学基础医学院微生物学教研室重庆400016

目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylon)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY),了解其理化特性和生物学活性,评价其抗H pylori感染的作用．方法:以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡,水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY),硫酸铵沉淀法纯化IgY．将一... 详细信息

目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylon)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY),了解其理化特性和生物学活性,评价其抗H pylori感染的作用．方法:以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡,水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY),硫酸铵沉淀法纯化IgY．将一定浓度的VacA-IgY在不同温度的水浴中维持一定时间,评价其耐热性;在不同 pH的Tris-HCI中孵育一定时间,评价其耐酸性;加入胃蛋白酶并作用一定时间后,评价其对酶消化的耐受作用．以上评价均采用ELISA 法测定抗体效价变化．采用Hela细胞体外培养 MTT法分析VacA-IgY对H pylori细胞毒活性的中和作用．结果:本实验制备的VacA-IgY在70℃水浴 15 min后活性保持约50％;在pH≥5时,抗体活性几乎无改变,pH<5时,抗体活性下降较快,pH2．0左右,抗体活性几乎丧失;pH4．0时, 60 kU／L胃蛋白酶作用1 h,抗体活性几乎无变化,2 h后活性仍保持50％以上．VacA-IgY能浓度依赖性地中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性．20 mg／L超声提取物即可降低1／2的 Hela细胞增殖能力,80-320 mg／L的VacA-IgY 能完全中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性(P<0．01)．结论:成功制备了重组VacA的IgY,且具有较好的耐热性、耐胃酶消化和一定的耐酸性; 在其体外具有中和H pylori细胞毒活性的作用．

关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素重组蛋白蛋黄抗体活性细胞毒性

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幽门螺杆菌napA-ctxB融合蛋白的基因克隆与表达

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 172-175页

作者：邓颖杨致邦王勇黄进张绍兰叶翠莲重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室重庆400016

目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防***感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQ... 详细信息

目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防***感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE30-napA-ctxB(pQE30-nctB),经测序分析确认后转化***5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB,融合蛋白NCTB经镍离子柱纯化。结果PCR扩增出807bp的目的基因片段nctB。工程菌pQE30-nctB-DH5α经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr为30000,与预期的一致,约占菌体总蛋白的27%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯,纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图象软件分析表明纯度可达94%以上。Westernblot显示重组蛋白质有良好的抗原性。结论构建含双基因的表达质粒pQE30-nctB成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达。

关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白霍乱毒素B亚单位融合基因

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幽门螺杆菌vacA毒性片段与hpaA融合基因的原核表达

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世界华人消化杂志 2004年第5期12卷 1096-1099页

作者：刘淼杨致邦林珊珊吴利先重庆医科大学基础医学院微生物学教研室重庆市400016

目的:构建幽门螺杆菌vacA毒性片段(v)与hpaA融合基因的原核表达载体,并诱导表达,为制备具有治疗与预防作用的疫苗奠定基础. 方法:通过设计带有编码IL-3N端12个氨基酸引物,用PCR技术从pQE30-V质粒扩增出有接头的v基因,克隆至质粒pTrc99A-... 详细信息

目的:构建幽门螺杆菌vacA毒性片段(v)与hpaA融合基因的原核表达载体,并诱导表达,为制备具有治疗与预防作用的疫苗奠定基础. 方法:通过设计带有编码IL-3N端12个氨基酸引物,用PCR技术从pQE30-V质粒扩增出有接头的v基因,克隆至质粒pTrc99A-HpaA中与hpaA融合.将融合基因插入原核表达载体pQE30,再将pQE30-V-HpaA转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果, Western blotting鉴定其抗原性. 结果:融合蛋白的相对分子量约为65 000,能与幽门螺杆菌感染的人阳性血清发生抗原抗体反应. 结论:重组表达质粒pQE30-V-HpaA表达成功,为进一步研究其免疫学活性及制备疫苗提供了材料.

关键词：幽门螺杆菌 vacA毒性 hpaA融合基因原核表达氨基酸

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重组人可溶性补体受体1型SCR15-18片段表达纯化及生物活性鉴定

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第三军医大学学报 2007年第10期29卷 892-895页

作者：谭兵张德纯汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室

目的获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18(sCR1-SCR15-18)蛋白。方法重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2+-NTA亲和层析后,选... 详细信息

目的获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18(sCR1-SCR15-18)蛋白。方法重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2+-NTA亲和层析后,选择不同氧化还原条件进行复性,进而检测其生物学活性。结果得到了有较高表达量、较高纯度和较好生物学活性的sCR1-SCR-15-18蛋白。结论优化了sCR1-SCR15-18蛋白的表达、纯化和复性的参数,所获结果为进一步动物体内保护实验研究奠定了基础。

关键词：可溶性补体1型受体表达包含体纯化复性

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医学微生物学大型课堂教学中辅助教学方法的比较研究

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微生物学杂志 2024年

作者：黎志东古天乐应旗康空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室重庆医科大学基础医学院病原生物学系

为比较医学微生物学大型课堂教学过程中两种不同辅助教学方法所取得的教学效果的差异，在针对三部分教学内容的4个课时的教学过程中，教师对两班本科生(人数分别为215人和204人)首先均采用“依据幻灯片进行讲授法”为主要教学方法、然... 详细信息

为比较医学微生物学大型课堂教学过程中两种不同辅助教学方法所取得的教学效果的差异，在针对三部分教学内容的4个课时的教学过程中，教师对两班本科生(人数分别为215人和204人)首先均采用“依据幻灯片进行讲授法”为主要教学方法、然后分别采用“教学视频法”或“同伴讨论法”为辅助教学方法开展教学活动。随后，就教学内容中7个重点知识对学生进行评估测试，以量化比较两种辅助教学方法在教学效果上的差别。发现采用教学视频法为辅助教学方法的班级学生平均成绩高于采用同伴讨论法。问卷调查显示，学生课堂以外的学习习惯对学习成绩无显著影响，说明课堂学习仍是学生学习医学微生物学知识的主渠道，教学方法对提高教学效果有重要影响。

关键词：医学微生物学大型课堂教学辅助教学方法教学视频法同伴讨论法比较研究

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幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中水通道蛋白4的表达变化及内化

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第三军医大学学报 2014年第16期36卷 1647-1650页

作者：黄娟陆蔚天杨致邦徐进甘胜伟邱国平孙善全重庆医科大学基础医学院重庆400016 重庆医科大学人体解剖学教研室重庆400016 重庆医科大学病原微生物与免疫学实验室重庆400016

目的观察在幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)的表达变化及内化现象,探讨AQP4及其内化在脑膜炎脑水肿发生中的作用。方法采用幼鼠延髓小脑池注入B族溶血性链球菌建立细菌性脑膜炎模型,采用干湿质量法、伊文思蓝... 详细信息

目的观察在幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)的表达变化及内化现象,探讨AQP4及其内化在脑膜炎脑水肿发生中的作用。方法采用幼鼠延髓小脑池注入B族溶血性链球菌建立细菌性脑膜炎模型,采用干湿质量法、伊文思蓝含量测定法、免疫印迹法分别检测脑膜炎幼年大鼠脑含水量、血脑屏障通透性以及AQP4的表达水平,运用免疫荧光双标的方法检测AQP4分别与早期内涵体标记物EEA1和晚期内涵体标记物MPR的共表达。结果 1实验组脑含水量(81.4±2.3)%较对照组(77.3±1.6)%明显增加(P<0.05);2实验组AQP4表达水平(57.41±7.00)%较对照组(44.50±7.45)%明显增加(P<0.05);3实验组依文思蓝含量(4.35±0.21)μg/g较对照组(4.27±0.33)μg/g无统计学差异(P>0.05);4脑膜炎模型中,AQP4分别与EEA1和MPR共表达。结论在幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中,脑内AQP4表达上调,同时存在AQP4内化的现象。

关键词：脑膜炎脑水肿水通道蛋白4 内化内涵体

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茯苓菌丝发酵液粗多糖对肠道益生菌的影响

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中国微生态学杂志 2021年第10期33卷 1147-1150页

作者：于洪梁刘磊曹婧宁安红黄敏钟民涛大连医科大学附属第二医院辽宁大连116044 大连医科大学病原微生物学实验室大连医科大学基础医学院微生物学教研室

目的探究茯苓菌丝发酵液中提取的粗多糖对肠道益生菌的影响。方法运用发酵工程相关技术获得茯苓菌丝发酵液,提纯分离以获取茯苓菌丝中分泌的粗多糖。将提取出的茯苓粗多糖以10.0%、5.0%、2.5%和空白对照(0.0%)的浓度对4种肠道益生菌—... 详细信息

目的探究茯苓菌丝发酵液中提取的粗多糖对肠道益生菌的影响。方法运用发酵工程相关技术获得茯苓菌丝发酵液,提纯分离以获取茯苓菌丝中分泌的粗多糖。将提取出的茯苓粗多糖以10.0%、5.0%、2.5%和空白对照(0.0%)的浓度对4种肠道益生菌——嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳杆菌MZ900、青春双歧杆菌的生长进行观察。结果在茯苓粗多糖含量10.0%以下的范围内,10.0%、5.0%、2.5%浓度下肠道益生菌数量均高于对照组,并且随着茯苓发酵液粗多糖浓度的含量增加,4种肠道益生菌数量呈正相关增长。结论茯苓菌丝发酵液粗多糖对以上4种肠道益生菌有增菌效果。实验结果为茯苓菌丝发酵液粗多糖有保护人类肠道的作用提供理论依据,并为后续的生化研究与动物实验提供理论基础。

关键词：茯苓菌丝发酵液粗多糖嗜酸乳杆菌青春双歧杆菌干酪乳杆菌乳杆菌MZ900

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APOBEC3B羧基端抗乙肝病毒位点的筛选和鉴定

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重庆医科大学学报 2017年第7期42卷 776-780页

作者：陈彦猛胡杰黄瑶袁琳周星胡源重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原微生物教研室重庆400016

目的:筛选参与APOBEC3B羧基端脱氨酶及抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)活性的重要区域和关键位点。方法:定点突变构建羧基端活性中心附近的3个螺旋区段(α2、α3、α4)的缺失突变体和α4螺旋区内(D316、K320、E321、R327、D328)位点... 详细信息

目的:筛选参与APOBEC3B羧基端脱氨酶及抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)活性的重要区域和关键位点。方法:定点突变构建羧基端活性中心附近的3个螺旋区段(α2、α3、α4)的缺失突变体和α4螺旋区内(D316、K320、E321、R327、D328)位点的突变体;Southern blot筛选APOBEC3B抑制HBV复制的重要区段和关键位点;不同DNA变性PCR(differential DNA denaturation PCR,3D-PCR)和克隆测序进行验证。结果:APOBEC3B羧基端脱氨酶活性中心周围的α3和α4螺旋区缺失后,其抗病毒活性消失;D316位点突变后APOBEC3B的脱氨酶活性和抗病毒活性消失。结论:APOBEC3B羧基端的D316位点是APOBEC3B脱氨酶和抗病毒的关键位点。

关键词： APOBEC3B 脱氨基 3D-PCR D316

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