检索结果-内蒙古大学图书馆

四川大学学报（医学版） 2020年第3期51卷 325-330页

作者：许琳婉张潞渝苟茜邱伊波刘智敏重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的观察泛素样含PDH和环指域1(UHRF1)对雌激素受体(ER)α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。方法应用Western blot、实时荧光定量(qRT)-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳... 详细信息

目的观察泛素样含PDH和环指域1(UHRF1)对雌激素受体(ER)α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。方法应用Western blot、实时荧光定量(qRT)-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳头状癌细胞BCPAP中UHRF1、ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达。分别用Scrambled siRNA、UHRF1 siRNA处理BCPAP细胞,qRT-PCR检测各组细胞中ERα和ERβ的mRNA表达;MTT、Transwell分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移。结果与Nthy-ori3-1细胞相比,BCPAP细胞中UHRF1和ERα蛋白及mRNA表达水平上调(P<0.05),而ERβ蛋白和mRNA表达水平下调(P<0.05)。与空白对照组和Scrambled siRNA组相比,转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞中ERαmRNA表达降低(P<0.05),ERβmRNA表达升高(P<0.05);转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移降低(P<0.05)。结论UHRF1可上调ERα/ERβ的表达比率,促进甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移。

关键词： UHRF1 ERα ERβ 甲状腺乳头状癌

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NO信号通过I-kappaB磷酸化激活人肝细胞内源凝血因子Ⅷ重表达的调控作用

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吉林大学学报（医学版） 2014年第6期40卷 1155-1160页

作者：温泉何玉霞周云飞王娟张军重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:建立一氧化氮(NO)前体化合物L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子Ⅷ(FⅧ)重表达的分子细胞生物学模型,探讨NO信号激活L02中内源FⅧ重表达的调控通路及分子基础。方法:取对数生长期L02细胞随机分为对照组、加药组(L-精氨酸)、抑制... 详细信息

目的:建立一氧化氮(NO)前体化合物L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子Ⅷ(FⅧ)重表达的分子细胞生物学模型,探讨NO信号激活L02中内源FⅧ重表达的调控通路及分子基础。方法:取对数生长期L02细胞随机分为对照组、加药组(L-精氨酸)、抑制剂组(L-NAME和L-精氨酸)和抑制剂对照组(L-NAME),分别培养12、24、36、48和60h,采用流式细胞术检测作用48h后L02中人FⅧ蛋白的表达,Griess法检测不同时间点L02细胞内NO水平,RT-PCR法检测L02中人FⅧ基因、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因、核转录因子(NF-κB1)基因和核因子κB(免疫球蛋白κ轻链基因增强子)抑制蛋白α亚基(I-κB alpha)基因的转录水平,Western blotting法检测L02中人磷酸化I-kappaB(磷酸化I-κB)表达水平。结果:流式细胞术检测,加L-精氨酸培养48h后L02中出现人FⅧ蛋白的表达。Griess法检测,加药组L02在3、6和12h内NO表达水平显著增加(P<0.05),随后又基本恢复到正常水平,正常组、抑制剂组和抑制剂对照组L02细胞内NO水平无变化;RT-PCR检测,加药组L02中人FⅧmRNA转录;对照组、抑制剂组和抑制剂对照组均无人FⅧmRNA的转录,加药组iNOS、NF-κB1和I-κB alpha转录水平均上升(P<0.05),对照组、抑制剂组和抑制剂对照组上述基因转录水平均无明显变化。Western blotting法检测,加入L-精氨酸后,磷酸化I-κB表达水平明显增加(P<0.05),其他组则无此变化。结论:L-精氨酸通过NO信号通路进而激活I-κB磷酸化,导致人FⅧ基因启动子上游调控相关的转录因子NF-κB1进入胞核从而激活人离体肝细胞L02中内源人FⅧ的表达。

关键词：人凝血因子Ⅷ L-精氨酸一氧化氮信号通路磷酸化 human coagulation factor Ⅷ

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细粒棘球绦虫蛋白激酶A的生物信息学特征及免疫反应性

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第6期38卷 682-687页

作者：范俊杰韩秀敏 Nur Fazleen Binti Idris 李锴谭青青曹纹侨李想廖鹏叶彬重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 青海省人民医院西宁810007

目的研究细粒棘球绦虫cAMP依赖性蛋白激酶A(EgPKA)基因的生物信息学特征,分析其重组蛋白的免疫反应性。方法利用细粒棘球绦虫全基因组测序数据设计特异性引物扩增EgPKA基因的编码区序列,并通过生物信息学方法综合分析EgPKA蛋白的理化性... 详细信息

目的研究细粒棘球绦虫cAMP依赖性蛋白激酶A(EgPKA)基因的生物信息学特征,分析其重组蛋白的免疫反应性。方法利用细粒棘球绦虫全基因组测序数据设计特异性引物扩增EgPKA基因的编码区序列,并通过生物信息学方法综合分析EgPKA蛋白的理化性质、亚细胞定位、三维结构。构建GS115/EgPKA-pPIC9K重组酵母工程菌并用甲醇诱导表达,抗His标签镍柱亲和层析柱纯化EgPKA重组蛋白,用细粒棘球蚴病患者血清、细粒棘球蚴感染的BALB/c小鼠血清作为一抗,蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析纯化的EgPKA重组蛋白的免疫反应性。结果EgPKA基因编码区全长1053 bp,编码350个氨基酸残基,发生了48 bp的缺失突变(417~464 bp),突变后EgPKA编码区碱基A415、G416和T465重新结合形成新的氨基酸Ser154。生物信息学分析结果显示,EgPKA理论等电点为8.63,不稳定性系数为29.04,脂肪系数为82.49,总平均亲水性为-0.374,不含信号肽,无跨膜区。Cell-Ploc 2.0软件分析结果显示,EgPKA蛋白可能定位于细胞膜、细胞质、线粒体和细胞核。Western blotting分析结果显示,1%甲醇诱导表达72 h时EgPKA重组蛋白的产量最高,纯化的EgPKA重组蛋白能与细粒棘球蚴病患者血清,细粒棘球蚴感染后4、8、12和16个月的小鼠血清发生特异性反应,出现两条分别为Mr 40000和35000蛋白条带,而与健康小鼠及健康人血清无特异性反应,无条带出现。结论EgPKA编码区序列存在基因缺失突变,EgPKA重组蛋白具有较好的免疫反应性,有望作为细粒棘球蚴病的早期诊断抗原。

关键词：细粒棘球绦虫蛋白激酶A 生物信息学分析真核表达

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纳米细菌促进乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡

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第三军医大学学报 2013年第16期35卷 1688-1691页

作者：刘胜男张德纯张名均郭亚楠杨晓容许舸重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室生命科学院电镜组重庆400016

目的观察纳米细菌(nanobacteria,NB)与纳米羟基磷灰石颗粒(nano hydroxyapatite,nHAP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响。方法实验分为NB组、nHAP组和正常对照组,其中NB组和nHAP组悬液的浓度均为2麦氏浊度(M),正常对照组仅加培养基,与乳腺... 详细信息

目的观察纳米细菌(nanobacteria,NB)与纳米羟基磷灰石颗粒(nano hydroxyapatite,nHAP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响。方法实验分为NB组、nHAP组和正常对照组,其中NB组和nHAP组悬液的浓度均为2麦氏浊度(M),正常对照组仅加培养基,与乳腺癌MDA-MB-231细胞共同培养24、48、72 h,通过CCK-8检测其对细胞的毒性作用;培养12、24、48、72 h,取上清,经全自动生化分析仪测定LDH活性;作用72 h,经流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定其凋亡率,透射电镜观察其超微结构的变化情况。结果 CCK-8显示,NB组24、48、72 h对细胞的抑制作用均强于nHAP组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);NB组LDH含量在24、48、72 h时均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);24、48、72 h均高于nHA组,但仅24、48 h有统计学差异(P<0.05)。nHAP组LDH活性仅在72 h与正常对照组比较有统计学差异(P<0.01);72 h后NB组细胞凋亡率高于nHAP组,差异有统计学意义(P<0.01);透射电镜下观察,NB组可以看到胞质空泡样变,核固缩以及明显的凋亡小体,nHAP组未见明显异常。结论 NB可以抑制乳腺癌细胞的生长,促进其发生凋亡,其导致细胞凋亡的成分不仅仅是NB羟基磷灰石的外壳,也可能与NB的其他组分或代谢产物有关。

关键词：纳米细菌纳米羟基磷灰石凋亡乳腺癌

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细粒棘球绦虫囊化原头蚴AQP基因转录动态及异源表达实验研究

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第三军医大学学报 2020年第21期42卷 2081-2092页

作者：谭青青吴宏烨高剑李锴范俊杰李想廖鹏曹纹侨叶彬重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 新疆医科大学寄生虫学教研室乌鲁木齐830011 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探索细粒棘球蚴水通道蛋白(Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs)在棘球蚴液形成过程中的作用。方法收集体外培养不同时期的棘球蚴标本和BALB/c小鼠体内接种的继发棘球蚴标本,RT-qPCR方法检测12个EgAQPs基因在体内、体外培... 详细信息

目的探索细粒棘球蚴水通道蛋白(Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs)在棘球蚴液形成过程中的作用。方法收集体外培养不同时期的棘球蚴标本和BALB/c小鼠体内接种的继发棘球蚴标本,RT-qPCR方法检测12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时期的转录表达。以细粒棘球蚴cDNA为模板,扩增EgAQP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-1、EgAQP4-4和EgAQP9-16个基因编码区片段,同时,通过化学合成方法扩增另外6个EgAQPs(EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP4-2、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-2)基因编码区片段,并在非洲爪蟾卵母细胞中检测这12个EgAQPs基因的透水功能,Western blot检测EgAQPs在卵母细胞膜上的表达。结果体外培养的原头蚴及感染小鼠的继发棘球蚴体积均随培养时间的延长而逐渐增大,棘球蚴囊内透明液体增多。RT-qPCR结果显示12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时间的转录表达水平均较低。注射EgAQPs基因的非洲爪蟾卵母细胞的体积变化率和透水系数与阴性对照组差异无统计学意义,这12个EgAQPs基因在卵母细胞中未表现出水通道功能。Western blot检测12个EgAQPs基因在卵母细胞总蛋白、胞质蛋白与胞膜蛋白上的表达,结果均未观察到蛋白在预期的水通道蛋白理论分子量处表达。结论12个EgAQPs基因在原头蚴囊化形成棘球蚴过程中转录表达水平均较低,这些基因在爪蟾卵母细胞的异源表达均未表现出通透水的功能。

关键词：细粒棘球绦虫水通道蛋白原头蚴棘球蚴转录谱异源表达

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细胞原纤毛与人类疾病

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生理学报 2021年第6期73卷 999-1016页

作者：刘杰许洁陈茜汪长东重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心基础医学院重庆400016

细胞原纤毛定位于绝大多数哺乳动物细胞表面,属于非常保守的细胞器,调节细胞增殖、分化、迁移、极性、信号级联等生命活动来调控细胞生命进程和维持细胞稳态。原纤毛结构蛋白或附属蛋白编码基因突变所导致的疾病统称为"纤毛类疾病&... 详细信息

细胞原纤毛定位于绝大多数哺乳动物细胞表面,属于非常保守的细胞器,调节细胞增殖、分化、迁移、极性、信号级联等生命活动来调控细胞生命进程和维持细胞稳态。原纤毛结构蛋白或附属蛋白编码基因突变所导致的疾病统称为"纤毛类疾病",发生在胚胎期、婴儿期甚至成人期。纤毛类疾病不仅累及单一器官,也涉及多器官多系统,表现出多变表型和重叠表型。本文主要综述原纤毛相关基因突变对骨骼、牙齿、皮肤、肝胆、肾脏、大脑、视网膜、心脏等器官的影响,揭示其致病机制,并对当前一些纤毛类疾病新型治疗方法进行探讨。

关键词：细胞原纤毛纤毛类疾病器官治疗

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KIAA0753减缓糖尿病抑制的成骨细胞糖代谢和能量代谢

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陆军军医大学学报 2024年第20期46卷 2291-2300页

作者：李梦雪王吉春李乐泰汪长东重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆2400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆2400016

目的探讨KIAA0753对成骨细胞MC3T3-E1糖代谢及能量代谢的影响。方法由基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)获取Joubert综合征患者基因表达数据集GSE182286并对其进行分析。构建KIAA0753过表达载体,实验分为对照组、高糖组... 详细信息

目的探讨KIAA0753对成骨细胞MC3T3-E1糖代谢及能量代谢的影响。方法由基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)获取Joubert综合征患者基因表达数据集GSE182286并对其进行分析。构建KIAA0753过表达载体,实验分为对照组、高糖组和高糖+过表达KIAA0753组,采用Western blot检测在高糖条件下KIAA0753对MC3T3-E1细胞糖代谢相关蛋白糖原合酶1(glycogen synthase 1,GYS1)、糖原磷酸化酶L(glycogen phosphorylase L,PYGL)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter type 4,GluT4)、磷酸果糖激酶(phosphofructokinase muscle,PFKM)、丙酮酸脱氢酶磷酸酶1(pyruvate dehydrogenase phosphatase 1,PDP1)、乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-CoA carboxylaseα,ACACA),以及线粒体相关蛋白过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator-1α,PGC-1α)、核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF1)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)的影响;通过检测细胞培养基中葡萄糖含量、细胞内的糖原含量和乳酸含量评估KIAA0753对糖代谢中间产物的影响;采用细胞免疫荧光和ATP含量检测KIAA0753对线粒体活性及功能的影响;采用EdU染色检测KIAA0753对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响。结果KIAA0753在Joubert综合症患者和高糖条件下表达下调(P<0.05)。高糖抑制蛋白GYS1、ACACA、PFKM、GluT4、PGC-1α、TFAM和NRF1的表达,促进蛋白PDP1和PYGL的表达,减少糖原生成和细胞外葡萄糖的消耗,促进乳酸生成,而过表达KIAA0753后减缓了高糖的作用,促进蛋白GYS1、ACACA、PFKM、GluT4、PGC-1α、TFAM和NRF1的表达,抑制蛋白PDP1和PYGL的表达,增加糖原生成和细胞外葡萄糖的消耗,抑制乳酸生成(P<0.05)。与高糖组相比,过表达KIAA0753在高糖条件下显著提升MC3T3-E1细胞线粒体的活性和膜电位,促进ATP的合成(P<0.05),促进MC3T3-E1细胞的增殖(P<0.05)。结论KIAA0753能够促进成骨细胞的糖代谢并提升线粒体活性和功能,从而为机体提供更多能量。

关键词： Joubert综合征成骨细胞 KIAA0753 糖代谢线粒体 ATP

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酪酸梭菌通过调节长链非编码RNAs的表达变化促进结肠癌细胞SW480的凋亡

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第三军医大学学报 2015年第21期37卷 2126-2130页

作者：杨晓容张德纯杨金梅李世超刘胜男郭亚楠重庆医科大学基础医学部分子医学与肿瘤研究中心病原生物学教研室重庆400016

目的人结肠癌细胞SW480与酪酸梭菌(Clostridium butyricum,CB)共培养后,检测SW480细胞lncRNAs和mRNAs的应答变化及诱导凋亡的机制。方法 1.5×107CFU/m L酪酸梭菌处理结肠癌细胞48 h后,提取总RNA,对其逆转录RNA并作荧光标记,与安捷... 详细信息

目的人结肠癌细胞SW480与酪酸梭菌(Clostridium butyricum,CB)共培养后,检测SW480细胞lncRNAs和mRNAs的应答变化及诱导凋亡的机制。方法 1.5×107CFU/m L酪酸梭菌处理结肠癌细胞48 h后,提取总RNA,对其逆转录RNA并作荧光标记,与安捷伦人lncRNAs/mRNAs芯片杂交。生物信息学预测表达差异的lncRNAs靶基因,并利用DAVID6.7对其进行信号通路富集度分析。双苯并咪唑Hoechst 33258(bisbenzimlde)和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡。结果与SW480对照组相比,共培养酪酸梭菌的结肠癌细胞SW480中的lncRNAs有50个表达上调和152个表达下调的基因,mRNAs中有738个表达上调和1 088个表达下调的基因。对差异表达的基因进行信号通路富集度分析,显示参与肿瘤相关的信号传导途径有MAPK信号通路、细胞因子-细胞因子、JAK-STAT信号、NF-κB的激活、VEGF信号通路和p53信号通路。酪酸梭菌能显著促进结肠癌细胞凋亡。结论酪酸梭菌通过调节lncRNAs的表达变化促进结肠癌细胞SW480凋亡。

关键词：酪酸梭菌结肠癌 SW480细胞长链非编码RNA

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hsa-mir-373对肿瘤细胞中E-钙黏蛋白表达的影响

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生物技术通报 2011年第8期27卷 167-171,180页

作者：武卫华孔璟叶彬重庆医科大学分子医学与肿瘤中心基础医学院病原生物学教研室重庆400016

旨在探讨hsa-mir-373重组真核表达载体对肿瘤细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。根据miR-Base数据库中hsa-mir-373序列,设计并构建hsa-mir-373重组表达质粒和对照质粒。采用脂质体转染技术将mir-373重组质粒和阴性对照质粒分... 详细信息

旨在探讨hsa-mir-373重组真核表达载体对肿瘤细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。根据miR-Base数据库中hsa-mir-373序列,设计并构建hsa-mir-373重组表达质粒和对照质粒。采用脂质体转染技术将mir-373重组质粒和阴性对照质粒分别转染BIU87细胞株。采用荧光显微镜观测转染效果。Western blotting检测细胞的E-钙黏蛋白表达量,免疫细胞化学方法检测细胞E-钙粘蛋白的分泌。结果显示,酶切和测序证明hsa-mir-373真核表达载体构建成功。E-钙黏蛋白在转染细胞中表达有明显增加。人工构建的hsa-mir-373载体经转染后可增加肿瘤细胞中E-钙黏蛋白的表达量。

关键词： has-mir-373 BIU87细胞 E-钙黏蛋白

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多药耐药纹带棒杆菌的重复序列PCR分型与耐药机制的研究

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中华医院感染学杂志 2015年第5期25卷 965-967,977页

作者：李科张德纯张名均杨金梅杨小容刘胜男李世超重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的对引起医院感染暴发的多药耐药纹带棒杆菌(MDRCs)进行重复序列PCR研究,为MDRCs的亲缘性分析提供可靠的方法,并对MDRCs的耐药机制进行初步研究。方法用基因外重复回文序列-PCR(REPPCR)和肠细菌基因间共有重复序列-PCR(ERIC-PCR)技术... 详细信息

目的对引起医院感染暴发的多药耐药纹带棒杆菌(MDRCs)进行重复序列PCR研究,为MDRCs的亲缘性分析提供可靠的方法,并对MDRCs的耐药机制进行初步研究。方法用基因外重复回文序列-PCR(REPPCR)和肠细菌基因间共有重复序列-PCR(ERIC-PCR)技术对临床分离的32株MDRCs进行分型研究,根据细菌的耐药表型选择对应的耐药基因进行检测。结果 REP-PCR和改良ERIC-PCR分型技术分别将32株MDRCs分为6型和8型,两种方法的分辨指数分别为0.585和0.696;所有菌株中与大环内酯类抗菌药物相关的核糖体甲基化酶基因(ermX)检出率为90.6%,与四环素耐药相关的核糖体保护蛋白基因(tetW)的检出率为100.0%,菌株耐药基因的检出与耐药表型完全相符。结论重复序列PCR(rep-PCR)分型方法可用于纹带棒杆菌的分型研究及医院感染MDRCs的亲缘性分析,ERIC-PCR的分辨能力优于REP-PCR;中国重庆地区的MDRCs分别介导ermX和tet(W)基因对大环内酯类和四环素类抗菌药物高水平耐药。

关键词：多药耐药纹带棒杆菌重复序列聚合酶链反应

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