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酪酸梭菌培养上清液通过下调TLR4/NF-κB信号通路抑制SW-480细胞增殖

基础医学与临床 2016年第8期36卷 1080-1086页

作者：李世超张德纯杨金梅杨晓容郭亚楠重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究酪酸梭菌培养上清液(*** culture supernatant;***)对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制作用,并探讨***中可能的活性成分及相关分子机制。方法用***处理后SW-480细胞,CCK-8及FCM检测细胞的增殖和凋亡。HPLC检测***中主要的有机酸含量... 详细信息

目的研究酪酸梭菌培养上清液(*** culture supernatant;***)对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制作用,并探讨***中可能的活性成分及相关分子机制。方法用***处理后SW-480细胞,CCK-8及FCM检测细胞的增殖和凋亡。HPLC检测***中主要的有机酸含量。Western blot及RT-q PCR检测经过***和丁酸处理后的TLR4的表达。用TLR4配体脂多糖(LPS)激活TLR4,再用***和丁酸处理细胞,观察TLR4和NF-κB的表达。结果 ***呈浓度依赖性地抑制SW-480增殖,并能诱导凋亡和G0/G1期阻滞。HPLC检测***中乙酸和丁酸的含量分别为9.27 g/L和4.53 g/L。***和丁酸可下调TLR4的表达(P<0.01),并下调TLR4的下游基因NF-κB的表达(P<0.05)。LPS激活TLR4的表达(P<0.01)后,***和丁酸下调TLR4和NF-κB的表达(P<0.05)。结论 ***通过下调TLR4/NF-κB通路抑制SW-480细胞增殖,丁酸可能是发挥抑制作用的活性成分之一。

关键词：酪酸梭菌结肠癌凋亡 Toll样受体4 丁酸

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Wnt3诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化

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第二军医大学学报 2013年第11期34卷 1166-1170页

作者：胡代曦张锡峰张超钟沁冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的探讨wnt3对小鼠肝前体细胞(14-19)发生上皮-间质转化的影响。方法分别将空载体Ad-GFP和表达wnt3的腺病毒Ad-GFP-wnt3转入小鼠肝前体细胞中,显微镜下观察细胞形态变化。细胞划痕实验和细胞迁移实验观察14-19细胞迁移能力。实时荧光定... 详细信息

目的探讨wnt3对小鼠肝前体细胞(14-19)发生上皮-间质转化的影响。方法分别将空载体Ad-GFP和表达wnt3的腺病毒Ad-GFP-wnt3转入小鼠肝前体细胞中,显微镜下观察细胞形态变化。细胞划痕实验和细胞迁移实验观察14-19细胞迁移能力。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹分析分别检测14-19细胞中上皮标记物和间质标记物的表达改变。结果显微镜下可见高表达wnt3的14-19细胞由不规则多边形变为长梭形。细胞划痕实验和细胞迁移实验结果显示,高表达wnt3的14-19细胞迁移能力明显提高,与空载体转染细胞相比差异具有统计学意义(P<0.01)。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,间质标记物N-cadherin、vimentin和twist1的mRNA和蛋白水平表达上调,相反上皮标记物E-cadherin的mRNA水平和蛋白水平表达下调,与空载体转染细胞相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Wnt3能够促使小鼠肝前体细胞发生上皮-间质转化,提示其可能参与了肝纤维化的发展进程。

关键词： wnt3 肝前体细胞上皮-间质转化肝硬化

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细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多肽特征及免疫定位研究

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中国人兽共患病学报 2021年第1期37卷 45-52,59页

作者：谭青青李锴张静高剑吴宏烨范俊杰陆合叶彬重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 新疆医科大学寄生虫学教研室乌鲁木齐830011

目的研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9(EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。方法根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以... 详细信息

目的研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9(EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。方法根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测多肽抗体滴度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定多肽抗体免疫活性,免疫荧光实验分析EgAQP9的亚细胞定位,免疫组化实验分析EgAQP9组织定位。结果免疫新西兰兔成功制备出多肽抗体;间接ELISA检测其多肽抗体效价高达1∶256000;Western blot结果显示多肽抗体能够特异识别细粒棘球绦虫中36 kDa处的条带,与EgAQP9预测的相对分子量大小相符;免疫荧光实验结果显示EgAQP9分布于棘球蚴生发细胞的胞质、胞膜中;免疫组化实验显示该蛋白主要分布在原头蚴表面及棘球蚴囊泡生发层。结论本研究以制备的EgAQP9兔源多克隆抗体定位了AQP9在棘球蚴生发细胞、原头蚴及棘球蚴囊壁中的分布状况。

关键词：细粒棘球绦虫水通道蛋白多肽抗体亚细胞定位组织定位

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基于生物信息学分析的肝癌核心基因的筛选及验证

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基因组学与应用生物学 2021年第2期40卷 867-877页

作者：李怡敏汪洋袁琳 Nur Fazleen Binti Idris 黄国旺涂增重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 西安市第一医院西安710000

本研究基于GEO数据库,选取由慢性乙型肝炎诱导的肝细胞癌芯片数据GSE121248为研究对象,利用GEO_(2)R软件分析数据,筛选出差异表达基因,利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG pathway富集分析。利用STRING数据库构建PPI网络,分析筛选核心基... 详细信息

本研究基于GEO数据库,选取由慢性乙型肝炎诱导的肝细胞癌芯片数据GSE121248为研究对象,利用GEO_(2)R软件分析数据,筛选出差异表达基因,利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG pathway富集分析。利用STRING数据库构建PPI网络,分析筛选核心基因。利用GEPIA对核心基因的表达进行验证,Kaplan Meier Plotter在线分析工具对核心基因与患者生存情况的相关性进行验证。通过上述方法筛选出309个DEGs,其中上调基因94个,下调基因215个。差异基因功能分析显示上调的DEGs主要参与细胞周期和卵母细胞减数分裂通路等途径,下调的DEGs则在补体和凝血级联、代谢途径以及咖啡因代谢途径富集。筛选出15个具有高度关联性的核心基因(BUB1,BUB1B,BIRC5,CCNB1,CCNB2,CDC20,CDK1,KIF-20A,MAD2L1,NCAPG,ZWINT,PBK,BTL,TTK和NUSAP1),它们与肝癌患者的总体生存率具有明显相关性,并为其构建了miRNA调控网络。本研究通过生物信息学方法有效分析了肝细胞癌发生、发展相关的差异表达基因,筛选出15个核心基因,分析其生物学相关功能,以期探索肝细胞癌发病机制,并为临床诊断标志物的改进以及筛选提供一定的理论基础。

关键词：肝癌差异表达基因生物信息学

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阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶抗泡球蚴的效果

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中国人兽共患病学报 2017年第8期33卷 690-693,709页

作者：冯祎王芬刘许诺王昕叶彬重庆医科大学病原生物学教研室重庆医科大学分子生物学与肿瘤研究中心重庆400016 成都医学院病原生物学教研室成都610083

目的探索阿苯达唑亚砜(albendazole sulfoxide,ABZSO)与聚丙交酯乙交酯-聚乙二醇-聚丙交酯乙交酯(PLGA-PEG-PLGA)制备的阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶(ABZSO/PLGA-PEG-PLGA)抗泡球蚴的效果。方法应用ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL)、ABZSO(40μg/mL)、PLGA-PEG-PLGA处理体外培养泡球蚴并统计原头节的存活率,采用扫描电镜观察各处理组泡球蚴或原头节形态变化;以各药物组治疗泡球蚴病大鼠动物模型后检查泡球蚴体积大小。结果药物处理体外培养泡球蚴18d时,ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(40μg/mL)原头节存活率显著低于ABZSO(40μg/mL)组;扫描电镜结果显示ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(80μg/mL)组的原头节结构被显著破坏;动物体内实验表明ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(4mg/mL)组对抗泡球蚴效果比其他各药物组显著。结论 ABZSO/PLGA-PEG-PLGA具有抗泡球蚴的效果。

关键词：多房棘球绦虫泡球蚴病阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶

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miR-449a通过Trim11影响高糖培养的肾小球系膜细胞增殖

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第三军医大学学报 2019年第16期41卷 1520-1526页

作者：陈雯韵孙艳彭睿彭惠民张政重庆医科大学基础医学院:细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院:分子肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨在高糖培养的系膜细胞中miR-449a与Trim11结合对细胞增殖的调控作用。方法 RT-qPCR检测miR-449a在高糖(25 mmol/L)和低糖(5.5 mmol/L)培养的系膜细胞中的表达;EdU检测miR-449a及Trim11对系膜细胞增殖的影响;生物信息学预测miR-4... 详细信息

目的探讨在高糖培养的系膜细胞中miR-449a与Trim11结合对细胞增殖的调控作用。方法 RT-qPCR检测miR-449a在高糖(25 mmol/L)和低糖(5.5 mmol/L)培养的系膜细胞中的表达;EdU检测miR-449a及Trim11对系膜细胞增殖的影响;生物信息学预测miR-449a与Trim11的结合位点;双荧光素酶验证miR-449a与Trim11靶向作用;Western blot检测上调、下调miR-449a后Trim11蛋白的变化。结果与低糖组比较,miR-449a在高糖培养的系膜细胞中的表达显著降低(P<0.01);双荧光素酶证实miR-449a直接靶向Trim11,过表达miR-449a后,细胞增殖减少,Trim11蛋白水平显著降低(P<0.01);沉默miR-449a,细胞增殖增加,Trim11蛋白水平显著上调(P<0.01);沉默Trim11后,抑制miR-449a对于细胞增殖促进作用被阻止。结论 miR-449a可抑制系膜细胞增殖,其机制可能与抑制靶基因Trim11的表达有关,可能是糖尿病肾病的重要保护性因子。

关键词：肾小球系膜细胞 miR-449a Trim11 细胞增殖

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稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第3期29卷 256-260页

作者：芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰胡斌冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学细胞生物学遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组... 详细信息

目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组。MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达。结果 RT-PCR和Westernblot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P<0.05);G1细胞比例明显减少(P<0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P<0.05);cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P<0.05);GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P>0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖。

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞细胞增殖 wnt β-catenin信号途径

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高强度聚焦超声诱导阿苯达唑热敏脂质体杀伤原头蚴的实验研究

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第三军医大学学报 2014年第23期36卷 2358-2362页

作者：王梦莹张静叶彬张潞渝赵毅峰赵海龙重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 青海大学附属医院介入科西宁810001 青海大学医学院病原生物学教研室西宁810001

目的探索高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)诱导阿苯达唑热敏脂质体(Albendazolethermosensitive liposomes,TSL-ABZ)杀伤原头蚴的效果。方法采用薄膜分散法制备阿苯达唑热敏脂质体。设立假照超声组,单纯HIFU组,HIFU+ABZ水剂100μL组,HIFU+TSL-ABZ 100μL组,HIFU+TSL-ABZ 200μL组,HIFU+TSL-ABZ 300μL组,HIFU+TSL-ABZ 600μL组,HIFU+TSL-ABZ 1 000μL组,实验组为原头蚴悬液1 m L加入含不同浓度的脂质体PBS缓冲液1 m L,每组均予以HIFU 75W×12 s进行照射,处理后悬液行伊红染色,光镜下观察原头蚴形态改变并计数死亡率;琼脂糖固定原头蚴切片,HE染色观察。结果制备的阿苯达唑热敏脂质体形态规则且分散性良好,与高强度聚焦超声联合使用后,对原头蚴的杀伤有很好的效果。其中HIFU+TSL-ABZ 1 000μL组杀伤效果最为显著,形态观察可见皮层破坏严重,钙颗粒消失,空泡化明显,头钩脱落,部分结构甚至消失,死亡率较其他各组更高[(88.25±0.01),(P<0.01)]。结论 HIFU联合TSL-ABZ对原头蚴的杀伤效果均优于单纯使用HIFU照射。HIFU功率一定时,在一定TSL-ABZ浓度范围内,原头蚴的死亡率随药物浓度的增加而升高。

关键词：原头蚴高强度聚焦超声阿苯达唑热敏脂质体

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长链非编码RNA Rpph1对高糖培养的肾小球系膜细胞炎症因子表达的影响

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第三军医大学学报 2019年第1期41卷 33-40页

作者：张攀扬孙艳彭睿彭惠民张政重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA) Rpph1对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾小球系膜细胞炎症因子的影响。方法采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测Rpph1细胞定位,实时定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测Rpph1在DN小鼠肾脏组织和系膜细胞中的水平;生物信息学技术预测Rpph1的编码蛋白能力。构建Rpph1的过表达质粒,并设计合成Rpph1的siRNAs,用qRT-PCR验证其转染效率。在高糖培养的肾小球系膜细胞中转染Rpph1-siRNA;在低糖培养的肾小球系膜细胞中转染Rpph1过表达质粒,通过Western blot检测转染Rpph1的siRNA和过表达Rpph1后肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)以及单核细胞趋化蛋白-1(macrophage cationic peptide 1,MCP-1)的表达情况。结果与正常小鼠比较,Rpph1在DN小鼠肾脏组织中显著上调(P <0. 01);同样,高糖培养的系膜细胞中Rpph1表达较低糖培养的系膜细胞显著上调(P <0. 01),其主要定位于系膜细胞的细胞质。此外,生物信息学证实Rpph1不具有编码蛋白的能力。且过表达Rpph1后炎症相关因子TNF-α和MCP-1的水平明显上调(P <0. 05);在下调Rpph1后,炎症相关因子TNF-α和MCP-1的表达也随之下降(P <0. 05)。结论在DN小鼠肾脏组织和高糖环境下的系膜细胞中lncRNA Rpph1显著高表达,且增强炎症相关因子的表达。Rpph1可能与糖尿病肾病炎症的发生相关。

关键词：糖尿病肾病长链非编码RNA Rpph1 肾小球系膜细胞炎症

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过表达人RI抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭、转移及EMT发生

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第三军医大学学报 2012年第23期34卷 2378-2383页

作者：姚雪熊冬梅舒静李林陈俊霞重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的检测过表达人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因的质粒pIRES2-EGFP-RI对人膀胱癌T24细胞侵袭转移及上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)现象的影响。方法将连有RI的质粒pIRES2-EGFP-RI稳定转染T24细胞后利用G418筛选出阳性克隆。根据转染的质粒不同分为3组:T24组(未转染组)、T24-0(转染pIRES2-EGFP质粒)和T24-RI组(转染pIRES2-EGFP-RI质粒)。RT-PCR检测T24细胞中RI的mRNA水平变化,细胞免疫荧光及Western blot检测RI蛋白的表达,利用HE染色观察其细胞形态的变化,Transwell方法检测细胞侵袭及转移能力的变化,Western blot检测侵袭转移及EMT相关蛋白Twist、MMP-9和Snail及E-cadherin的表达,构建移植瘤模型,利用HE染色观测肺组织切片癌细胞转移情况,组织免疫化学方法检测移植瘤中RI、Twist、Snail及E-cadherin的表达。结果 T24-RI组人RI的mRNA水平及蛋白表达显著升高(P<0.05);HE染色结果表明细胞铺展良好,核质比明显减小,细胞由间质形态向上皮形态转变;Transwell方法显示T24-RI组细胞的侵袭及转移能力较T24组、T24-0组明显下降;Western blot结果表明T24-RI组Twist、MMP-9和Snail较T24组、T24-0组显著降低(P<0.01),E-cadherin较T24组、T24-0组显著升高(P<0.01);HE染色肺组织切片显示T24-RI组较其他两组癌细胞转移降低,组织免疫化学结果表明T24-RI组RI、E-cadherin蛋白明显升高,而Twist、Snail显著降低。结论过表达人RI载体提高了RI蛋白的表达水平,并抑制了人膀胱癌T24细胞EMT的发生,从而抑制了膀胱癌T24细胞的侵袭、转移。

关键词：人核糖核酸酶抑制因子 T24细胞细胞转移细胞侵袭 EMT

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