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RNA编辑酶ADAR1在Huh7.5.1细胞中抑制HCV复制的研究

重庆医科大学学报 2018年第5期43卷 640-645页

作者：袁琳杨生永胡源胡接力段晓琼林温育黄爱龙涂增重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心基础医学院病原生物学教研室重庆400016 哈佛大学医学院麻省总医院肝病和胃肠病研究中心美国马萨诸塞州02114

目的:探究干扰素在Huh7.5.1细胞中对RNA编辑酶(adenosine deaminases acting on RNA 1,ADAR1)表达的影响,以及ADAR1对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)复制的调控作用。方法:干扰素(IFN-α,30 IU/m L)刺激Huh7.5.1细胞后,利用real-time PCR和Western blot检测ADAR1表达水平的变化,同时HCV以一定滴度(0.2 MOI)感染Huh7.5.1细胞,观察IFN-α对HCV复制的影响;利用si RNA降低ADAR1表达,过表达质粒(ADAR1 p110和p150)增加ADAR1表达,并进一步利用基因编辑技术建立ADAR1稳定敲除细胞株,明确ADAR1与HCV的复制关系。结果:IFN-α诱导Huh7.5.1细胞ADAR1 p150表达(48 h:t=10.400,P=0.007;72 h:t=19.390,P=0.002),而不影响ADAR1 p110表达(48 h:t=0.806,P=0.472;72 h:t=1.929,P=0.133),同时IFN-α可显著抑制HCV复制(48 h:t=10.170,P=0.001;72 h:t=35.810,P=0.000)。ADAR1 p110和p150过表达48 h后,HCV病毒核酸和蛋白水平均明显低于空白对照(P=0.004,P=0.015);ADAR1 si RNA干扰后,HCV复制增加了2倍以上,差异显著(t=13.530,P=0.000);利用Crispr-cas9技术敲除掉Huh7.5.1中的ADAR1后,HCV复制也明显增加(t=5.259,P=0.023);ADAR1干扰后IFN-α仍然存在对HCV明显的抑制作用(t=9.146,P=0.001)。结论:IFN诱导蛋白ADAR1可以抑制HCV复制,且ADAR1部分介导了IFN-α对HCV复制的抑制。

关键词：丙型肝炎病毒 RNA腺苷脱氨酶(ADAR1) Huh7.5.1细胞干扰素

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大鼠、豚鼠和金黄地鼠的尿液蛋白质组比较

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生物工程学报 2018年第4期34卷 578-585页

作者：倪娜吴建强李梨高友鹤重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院病理生理学系北京100005 北京师范大学生物化学与分子生物学系北京基因工程与生物技术重点实验室北京100875

生物标志物是指与生理或病理变化相关的可监测的变化。尿液作为机体的一种排泄物,不受稳态机制的调节,可以反映机体的多种变化。动物模型可以模拟人类疾病过程,监测疾病的变化,并为早期诊断提供线索。大鼠作为常用的模型动物并非所有疾... 详细信息

生物标志物是指与生理或病理变化相关的可监测的变化。尿液作为机体的一种排泄物,不受稳态机制的调节,可以反映机体的多种变化。动物模型可以模拟人类疾病过程,监测疾病的变化,并为早期诊断提供线索。大鼠作为常用的模型动物并非所有疾病的优势模型动物,因此比较大鼠与其他动物的尿液蛋白质组,从而为其他疾病选择优势模型动物提供线索。文中通过膜上酶切切成肽段再通过液相色谱与串联质谱偶联技术(LC-MS/MS)分析肽段信息,比较大鼠、豚鼠和金黄地鼠的尿液蛋白,结果显示3种鼠的尿蛋白数量不同,在机体不同系统中表达情况不同,参与的生物功能也不同。这为不同疾病选择不同的优势模型动物提供了依据。

关键词：尿液蛋白质组学液相色谱与串联质谱偶联技术动物模型大鼠豚鼠金黄地鼠

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阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶抗泡球蚴的效果

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中国人兽共患病学报 2017年第8期33卷 690-693,709页

作者：冯祎王芬刘许诺王昕叶彬重庆医科大学病原生物学教研室重庆医科大学分子生物学与肿瘤研究中心重庆400016 成都医学院病原生物学教研室成都610083

目的探索阿苯达唑亚砜(albendazole sulfoxide,ABZSO)与聚丙交酯乙交酯-聚乙二醇-聚丙交酯乙交酯(PLGA-PEG-PLGA)制备的阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶(ABZSO/PLGA-PEG-PLGA)抗泡球蚴的效果。方法应用ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL)、ABZSO(40μg/mL)、PLGA-PEG-PLGA处理体外培养泡球蚴并统计原头节的存活率,采用扫描电镜观察各处理组泡球蚴或原头节形态变化;以各药物组治疗泡球蚴病大鼠动物模型后检查泡球蚴体积大小。结果药物处理体外培养泡球蚴18d时,ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(40μg/mL)原头节存活率显著低于ABZSO(40μg/mL)组;扫描电镜结果显示ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(80μg/mL)组的原头节结构被显著破坏;动物体内实验表明ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(4mg/mL)组对抗泡球蚴效果比其他各药物组显著。结论 ABZSO/PLGA-PEG-PLGA具有抗泡球蚴的效果。

关键词：多房棘球绦虫泡球蚴病阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶

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17β-雌二醇促进甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及三叶草因子1分泌

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第三军医大学学报 2017年第17期39卷 1715-1719页

作者：廖凌瑶戴宇婕赵婷婷刘智敏重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究17β-雌二醇(estradiol,E_2)刺激甲状腺乳头状癌K-1细胞增殖、迁移及生长因子类似物人三叶草因子1(trefoil factor family 1,TFF1)分泌及分子机制。方法 ELISA检测E_2、ERβ激动剂(propylpyrazoletriol,PPT)、ERβ激动剂(diarylpropionitrile,DPN)对K-1细胞TFF1分泌的影响,Western blot检测细胞中雌激素受体ERα、ERβ的表达量;设计合成ERαsiRNA、ERβsiRNA后,转染K-1细胞,采用ELISA观察其对E_2诱导的TFF1分泌的影响。染色体免疫共沉淀检测ERα、ERβ与TFF1基因启动子的相互作用;MTT检测E_2对K-1细胞增殖的影响;Transwell检测E_2对K-1细胞迁移的作用。结果 E_2处理后K-1细胞上清TFF1含量逐渐升高,24 h达到峰值,随后降低;PPT处理K-1细胞后TFF1含量增多,而DPN处理降低TFF1含量;转染ERαsiRNA后细胞TFF1分泌量减少;而转染ERβsiRNA后分泌量升高。Western blot检测结果显示,K-1细胞中雌激素受体ERα表达高于ERβ。染色体免疫共沉淀结果显示,ERα能与TFF1基因启动子区域结合;MTT结果显示,E_2处理促进K-1细胞增殖;Transwell检测结果显示,E_2处理增强K-1细胞迁移。结论 E_2可以通过ERα促进K-1细胞中TFF1的表达及分泌,促进细胞增殖和迁移。

关键词： 17β-雌二醇甲状腺乳头状癌三叶草因子1 雌激素受体

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地方医学院校新进教师进行生物化学课程备课的体会

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教育教学论坛 2017年第9期 194-195页

作者：陈全梅刘先俊卜友泉重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

生物化学课程是医学专业学生必修的基础主干课程之一,在学生学习基础理论知识过程中具有重要的地位。由于生物化学课程涉及的内容多、概念抽象,因此想要取得良好的教学质量和教学效果,需要做好教学前的准备工作。尤其是对于教学经验尚... 详细信息

生物化学课程是医学专业学生必修的基础主干课程之一,在学生学习基础理论知识过程中具有重要的地位。由于生物化学课程涉及的内容多、概念抽象,因此想要取得良好的教学质量和教学效果,需要做好教学前的准备工作。尤其是对于教学经验尚缺的新进教师,备好课就显得尤为重要。本文详述了地方医学院校青年教师可从树立教师责任感、了解教学对象的专业和课时数、充分利用教学团队资源、搜集教学资源并深入掌握教学内容和学习并掌握现代化教学技术等五个方面开展教学前的准备工作。

关键词：生物化学备课教学改革

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锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第10期32卷 1317-1320,1326页

作者：方陈城张继明卢楠李鹏樊宇康月茜杨春何永林重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心病原生物学教研室重庆400016

目的观察卡介苗（BCG）的锌离子依赖金属蛋白酶1（Zmp1）对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21（DE3）中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测（0... 详细信息

目的观察卡介苗（BCG）的锌离子依赖金属蛋白酶1（Zmp1）对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21（DE3）中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测（0、24、48、72、96）h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期分布;用减毒沙门菌感染RAW264.7细胞诱导吞噬体形成后,用Zmp1处理细胞,在吞噬体内的减毒沙门菌和溶酶体的溶酶体相关膜蛋白1（LAMP1）分别用相应Alexa Fluor（R）350抗沙门菌抗体（蓝色荧光）和Cy5抗LAMP1抗体（红色荧光）标记,通过荧光显微镜观察RAW264.7细胞内两种荧光,将其重合分析吞噬体与溶酶体融合情况。结果用Zmp1蛋白处理细胞48 h后,细胞增殖活性明显降低;处理48 h后,细胞周期中G1期细胞比例下降,S期比例增高;采用双荧光标记感染沙门菌的RAW264.7细胞,Zmp1处理后显示紫色荧光的吞噬溶酶体融合减少。结论 Zmp1抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖,抑制吞噬体-溶酶体融合。

关键词：锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1) 细胞增殖吞噬体溶酶体

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酪酸梭菌培养上清液通过下调TLR4/NF-κB信号通路抑制SW-480细胞增殖

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基础医学与临床 2016年第8期36卷 1080-1086页

作者：李世超张德纯杨金梅杨晓容郭亚楠重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究酪酸梭菌培养上清液(*** culture supernatant;***)对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制作用,并探讨***中可能的活性成分及相关分子机制。方法用***处理后SW-480细胞,CCK-8及FCM检测细胞的增殖和凋亡。HPLC检测***中主要的有机酸含量... 详细信息

目的研究酪酸梭菌培养上清液(*** culture supernatant;***)对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制作用,并探讨***中可能的活性成分及相关分子机制。方法用***处理后SW-480细胞,CCK-8及FCM检测细胞的增殖和凋亡。HPLC检测***中主要的有机酸含量。Western blot及RT-q PCR检测经过***和丁酸处理后的TLR4的表达。用TLR4配体脂多糖(LPS)激活TLR4,再用***和丁酸处理细胞,观察TLR4和NF-κB的表达。结果 ***呈浓度依赖性地抑制SW-480增殖,并能诱导凋亡和G0/G1期阻滞。HPLC检测***中乙酸和丁酸的含量分别为9.27 g/L和4.53 g/L。***和丁酸可下调TLR4的表达(P<0.01),并下调TLR4的下游基因NF-κB的表达(P<0.05)。LPS激活TLR4的表达(P<0.01)后,***和丁酸下调TLR4和NF-κB的表达(P<0.05)。结论 ***通过下调TLR4/NF-κB通路抑制SW-480细胞增殖,丁酸可能是发挥抑制作用的活性成分之一。

关键词：酪酸梭菌结肠癌凋亡 Toll样受体4 丁酸

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17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制

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基础医学与临床 2016年第10期36卷 1348-1353页

作者：莫小梅朱平刘智敏李梨重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制。方法用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理不同时间BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;分别用E2、PPT和DPN处理BCPAP细胞,Western blot检测细... 详细信息

目的探讨17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制。方法用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理不同时间BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;分别用E2、PPT和DPN处理BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;设计合成ERαsiRNA、ERβsiRNA并转染BCPAP细胞,Western blot检测细胞中ERα、ERβ和Hsp27蛋白的表达;CHIP检测ERα、ERβ对Hsp27基因启动子的影响。结果用10-8mol/L的E2处理不同时间BCPAP细胞,随着E2处理时间增加,E2对BCPAP细胞中Hsp27蛋白的表达水平逐渐增高,在24 h达到峰值(P<0.05);E2作用转染ERαsiRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平降低(P<0.05);E2作用转染ERβsiRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平升高(P<0.05);Ch IP结果显示ERα能够与Hsp27基因启动子区域结合。结论 E2可以通过ERα促进BCPAP细胞中Hsp27蛋白水平的增高。

关键词： 17β-雌二醇 Hsp27 雌激素受体甲状腺乳头状癌

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微课在医学生物化学教学中的应用探讨

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医学理论与实践 2016年第3期29卷 414-415,420页

作者：雷云龙张莹张春冬朱慧芳李轶卜友泉重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆市400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心

微课作为一种典型的泛在式网络学习资源形式,以其短而精的授课方式,受到越来越多的人喜爱和关注。而多年以来医学生物化学受其交叉学科知识点繁多、逻辑联系差、理论和临床实践操作脱节等学科特点所影响,学生的学习积极性和成绩一直难... 详细信息

微课作为一种典型的泛在式网络学习资源形式,以其短而精的授课方式,受到越来越多的人喜爱和关注。而多年以来医学生物化学受其交叉学科知识点繁多、逻辑联系差、理论和临床实践操作脱节等学科特点所影响,学生的学习积极性和成绩一直难以有效提高,而微课改变了传统医学生物化学的自主学习形式,为医学生物化学的教学改革带来了新的契机。

关键词：微课医学生物化学翻转课堂教学改革

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锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第12期31卷 1585-1587,1592页

作者：李鹏何永林张继明方陈城重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW2... 详细信息

目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW264.7细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测zmp1 mRNA的水平;藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测Zmp1蛋白对细胞凋亡影响。结果扩增出zmp1基因;真核表达质粒经过XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切及基因测序鉴定构建成功;转染细胞24 h后,经荧光倒置显微镜观察到绿色荧光;qRT-PCR结果显示转染p EGFP-N1-zmp1的RAW264.7细胞zmp1 mRNA的表达显著升高;转染后48 h,细胞早期凋亡率有所增加。结论在RAW264.7细胞中成功表达了Zmp1并能促进巨噬细胞凋亡。

关键词：卡介苗锌依赖的金属蛋白酶1(Zmp1) 真核表达 RAW264.7细胞细胞凋亡

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