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中国医药指南 2012年第9期10卷 319-321页

作者：石中全周裕珍杨致邦戴维尚金川邓西川何东平重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 海南裕昌龙实业有限公司大昌养猪场海南海口570125 重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 重庆医科大学重庆医科大学药学院重庆400016

目的探讨废水中地塞米松污染的状况,为治理水环境污染提供依据。方法采集医院、养猪场、城市废水厂废水、街道地表水及江水,采用固相萃取-高效液相色谱法检测其地塞米松含量。结果医院、废水厂处理前后的废水、养猪场的废水、医院旁的... 详细信息

目的探讨废水中地塞米松污染的状况,为治理水环境污染提供依据。方法采集医院、养猪场、城市废水厂废水、街道地表水及江水,采用固相萃取-高效液相色谱法检测其地塞米松含量。结果医院、废水厂处理前后的废水、养猪场的废水、医院旁的街道地表水中含有一定浓度的地塞米松,以养猪场废水池的废水中含量最高,为(1050.90±11.67)ng/L,其次为专科医院处理前的废水,为(452.05±8.10)ng/L,废水中含量的不同可能与地塞米松的应用量有关。结论城市废水中存在不同量的地塞米松,废水处理中应引起重视,并采取相应的措施。

关键词：废水地塞米松污染固相萃取-高效液相色谱法

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HpaA-VacA IgY对小鼠胃内感染幽门螺杆菌的预防作用

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中国生物制品学杂志 2011年第1期24卷 34-36,40页

作者：夏丽君杨致邦黄伟张任飞蒋仁举蒋英重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 西南大学荣昌校区动物医学系重庆402460

目的研究HpaA-VacA IgY对小鼠幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)胃内定植及引起炎症的预防作用,为制备集预防和治疗***感染为一体的IgY制剂奠定基础。方法将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组、阴性对照组、感染预防组和炎症预防组,阳... 详细信息

目的研究HpaA-VacA IgY对小鼠幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)胃内定植及引起炎症的预防作用,为制备集预防和治疗***感染为一体的IgY制剂奠定基础。方法将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组、阴性对照组、感染预防组和炎症预防组,阳性对照组灌喂含108 cfu/ml ***的菌液;阴性对照组灌喂布氏肉汤代替***菌液;感染预防组灌喂不同剂量的IgY后,再灌喂同等剂量的菌液;炎症预防组灌喂同等剂量的菌液后,再灌喂不同剂量的IgY。通过胃黏膜***培养和组织切片染色镜检观察***定植及炎症反应程度。结果 HpaA-VacA IgY剂量为6 mg/只时,对***感染的预防率为88.9%,预防效果较好,当HpaA-VacA IgY的剂量为8 mg/只时,能完全预防***感染及其所引起的胃黏膜炎症。结论小鼠口服HpaA-VacA IgY具有预防和治疗***感染的作用,可用于制备防治***感染的口服制剂。

关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素黏附素卵黄抗体体内试验

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幽门螺杆菌NCTC11637株Hp1501蛋白的原核表达与纯化

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中国生物制品学杂志 2011年第12期24卷 1421-1424页

作者：杨继文杨致邦敬保迁于拽拽熊玉霞王朝丽冯莉重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室神经科学研究中心重庆400016 川北医学院分子生物学研究所四川南充637007

目的原核表达并纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)NCTC11637株Hp1501蛋白。方法 PCR扩增*** NCTC11637株Hp1501基因编码功能区序列Hp1501a,定向克隆至pQE30载体,构建重组原核表达质粒pQE30-Hp1501a,转化*** XL1-blue,IPTG诱导表达,并分析重组蛋白的表达形式。用Ni-NTA His柱对重组蛋白进行纯化。结果重组表达质粒pQE30-Hp1501a经双酶切鉴定构建正确,测序分析表明插入基因序列完全正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为37 000,表达量约占菌体总蛋白的21%,主要以包涵体形式存在,可与兔抗His单克隆抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度达91%。结论成功原核表达并纯化了*** NCTC11637株Hp1501蛋白,为***外膜蛋白的生物学功能和疫苗的研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌 Hp1501基因生物信息学原核细胞基因表达纯化

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申克孢子丝菌菌丝相和酵母相cDNA消减文库的构建及差异表达基因的筛选

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中国人兽共患病学报 2011年第5期27卷 427-431页

作者：周汛杨致邦肖异珠重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆400016 重庆医科大学基础医学院基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学附属儿童医院重庆400014

目的构建申克孢子丝菌双相cDNA消减文库,筛选与双相转换相关的差异表达基因。方法运用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信息学分析。结果 M+Y... 详细信息

目的构建申克孢子丝菌双相cDNA消减文库,筛选与双相转换相关的差异表达基因。方法运用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信息学分析。结果 M+Y文库获得751条表达序列标签(Expressed Sequence Tags,ESTs),经拼接后获得101条uni-genes;Y+M文库获得875条ESTs,拼接获得249条unigenes。申克孢子丝菌酵母相菌丝相的转换伴随着不同菌相细胞差异基因的高表达,这些高表达的差异基因可分为结构基因类、代谢酶类、细胞表面分子类及功能不明的细胞分子。结论成功构建了申克孢子丝菌双相转换相关的cDNA消减文库基础上,筛选出部分差异表达基因,为进一步研究申克孢子丝菌致病相关基因奠定了基础。

关键词：申克孢子丝菌抑制性消减杂交 cDNA消减文库生物信息学分析

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IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031基因多态性与幽门螺杆菌感染相关性胃溃疡及胃癌易感性的关系

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中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 517-520页

作者：苏善平杨致邦田一玲向瑜吴敏马小京重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室基础医学院病原生物学教研室神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016

目的分析人群中IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031基因多态性与幽门螺杆菌(***)感染相关性胃溃疡及胃癌易感性之间的关系,为临床诊断及预防该病提供新的思路和方法。方法选取***阳性的51例胃溃疡患者、43例胃癌患者和100例健康对照者,... 详细信息

目的分析人群中IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031基因多态性与幽门螺杆菌(***)感染相关性胃溃疡及胃癌易感性之间的关系,为临床诊断及预防该病提供新的思路和方法。方法选取***阳性的51例胃溃疡患者、43例胃癌患者和100例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态法和多重引物特异PCR法,检测其IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031位点,分析其多态性。结果在胃溃疡组中TNF-α-1031各基因型的频率分布与健康对照组比较,差异有统计学意义。在胃癌组中TNF-α-1031各基因型的频率分布与健康对照组比较,差异有统计学意义;Logistic回归分析表明,与携带TNF-α-1031T/T者相比,携带TNF-α-1031C/C者发生胃溃疡的危险性为OR=5.84(95%CI:1.00～33.84),发生胃癌的危险性为OR=6.95(95%CI:1.19～40.63)。在疾病组和健康对照组中,IL-10-819和IL-1β-31各基因型频率的分布差异无统计学意义。结论 TNF-α-1031基因多态性与胃溃疡、胃癌的易感性相关。

关键词： IL-1β IL-10 肿瘤坏死因子-α 基因多态性幽门螺杆菌胃溃疡胃癌

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幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达

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重庆医科大学学报 2010年第6期35卷 822-825页

作者：韩飞杨致邦重庆三峡中心医院微免科重庆404000 重庆医科大学基础医学院:病原生物学教研室神经科学研究中心基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016

目的:重组表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)hp1188基因,为研究该基因所编码蛋白在***的黏附过程中的作用奠定基础。方法:以***标准株NCTC11637基因组DNA为模板,PCR扩增hp1188基因片段,克隆至质粒pQE-30中获得重组质粒pQE30-hp11... 详细信息

目的:重组表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)hp1188基因,为研究该基因所编码蛋白在***的黏附过程中的作用奠定基础。方法:以***标准株NCTC11637基因组DNA为模板,PCR扩增hp1188基因片段,克隆至质粒pQE-30中获得重组质粒pQE30-hp1188,经DNA测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。Ni2+-NTA树脂亲和层析纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测表达,Westernblot鉴定相应抗原表位。结果:扩增的hp1188基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子量约为30600Dalton,与预期相符;大肠杆菌裂解液中表达产物接近可溶性蛋白总量的一半,但沉淀中仍能检测到表达蛋白。目标蛋白纯化后均一性接近90%,Westernblot证实与多克隆抗体有良好结合能力。结论:成功克隆了hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。

关键词：幽门螺杆菌 hp1188基因表达

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肺炎链球菌pbp2b和pbp1a基因突变与青霉素耐药的相关性研究

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中国微生态学杂志 2010年第8期22卷 726-729页

作者：周侠杨致邦栗俊杰苏善平熊玉霞于拽拽重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016

目的探讨耐青霉素肺炎链球菌pbp2b和pbp1 a基因的突变与青霉素耐药的关系,为明了肺炎链球菌的耐药性变异机制,防治其感染提供实验依据。方法从呼吸道感染患儿痰标本中分离肺炎链球菌163株,液体培养基连续稀释法测定其对青霉素的最小抑... 详细信息

目的探讨耐青霉素肺炎链球菌pbp2b和pbp1 a基因的突变与青霉素耐药的关系,为明了肺炎链球菌的耐药性变异机制,防治其感染提供实验依据。方法从呼吸道感染患儿痰标本中分离肺炎链球菌163株,液体培养基连续稀释法测定其对青霉素的最小抑菌浓度(M IC),套式聚合酶链反应(nPCR)扩增pbp2b和pbp1 a基因,扩增产物直接DNA测序,所测序列与青霉素敏感株(SPN R6)的基因序列进行比较,并分析其氨基酸结构的改变。结果 163株肺炎链球菌中检出青霉素敏感菌75株,中度敏感17株,青霉素耐药菌71株(44%)。耐药菌中58株存在pbp2b突变(81.7%),其中,56株为点突变,2株为CCT插入突变;在27株有pbp2b基因突变的B型和C型耐药菌中,21株出现了不同程度的pbp1 a基因突变。PBP2B氨基酸结构改变以苏氨酸变为丙氨酸、精氨酸变为赖氨酸为主,PBP1A以丙氨酸变为苏氨酸、谷氨酸变为天门冬氨酸为主。结论肺炎链球菌的pbp2b和pbp1 a基因突变与对青霉素的耐药性密切相关,PBP2b突变导致低水平耐药;PBP2b和PBP1A突变导致高水平耐药。

关键词：肺炎链球菌 pbp1a基因 pbp2b基因突变青霉素耐药性

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健康人群肿瘤坏死因子-α基因多态性的分析

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生物学杂志 2010年第1期27卷 24-26页

作者：向瑜杨致邦李永国韩飞苏善平郭丽媛重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室神经科学研究中心基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016

了解汉族健康人群中TNF-A基因多态性的分布,研究TNF-α表达与相关疾病之间的联系。采用PCR-限制性长度片段多态分析法检测140名重庆地区汉族健康人群的TNF-A-308,TNF-A-857位点基因多态性,计算其基因型和等位基因频率,结果显示TNF-A-308... 详细信息

了解汉族健康人群中TNF-A基因多态性的分布,研究TNF-α表达与相关疾病之间的联系。采用PCR-限制性长度片段多态分析法检测140名重庆地区汉族健康人群的TNF-A-308,TNF-A-857位点基因多态性,计算其基因型和等位基因频率,结果显示TNF-A-308 G/G、G/A、A/A基因型的频率分别为89%、11%、1%,其等位基因的发生频率以G等位基因最常见(93%),其次为A等位基因(7%)。TNF-A-857 C/C、C/T、T/T基因型的频率分别为68%、36%、8%,其等位基因发生频率以C等位基因最常见(81%),其次为T等位基因(19%)。由结果可以得出重庆地区汉族健康人群TNF-A-308位点存在G/A多态性,TNF-A-857位点存在C/T多态性。

关键词：基因多态性肿瘤坏死因子-α

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白介素-10-819 C/C和肿瘤坏死因子-α-1031 C/C/基因型与胃十二指肠疾病易感性的关系

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中国微生态学杂志 2010年第9期22卷 811-815页

目的分析人群中IL-10-819 C/C和TNF-α-1031 C/C基因型与胃十二指肠疾病的关系,确定携带以上该基因型的的人群罹患胃十二指肠疾病易感性的风险性。为临床诊断和预防这些疾病提供新的思路和方法。方法选取***阳性的48例慢性胃炎患者,46... 详细信息

目的分析人群中IL-10-819 C/C和TNF-α-1031 C/C基因型与胃十二指肠疾病的关系,确定携带以上该基因型的的人群罹患胃十二指肠疾病易感性的风险性。为临床诊断和预防这些疾病提供新的思路和方法。方法选取***阳性的48例慢性胃炎患者,46例十二指肠溃疡患者,51例胃溃疡患者,43例胃癌患者和100例健康对照者,2种基因型分别采用普通PCR和多重引物特异PCR法检测。结果在胃炎组中TNF-A-1031各基因型的频率(T/T,50%;T/C,40%;C/C,10%)与对照组(T/T,73%;T/C,25%;C/C,2%)比较,分布差异有统计学意义(χ2=9.975,P<0.05)。在胃溃疡组中TNF-A-1031各基因型的频率(T/T,49%;T/C,43%;C/C,8%)与对照组(T/T,73%;T/C,25%;C/C,2%)比较,分布差异有统计学意义(χ2=9.464,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-1031各基因型的频率(T/T,72%;T/C,26%;C/C,2%)与对照组(T/T,73%;T/C,25%;C/C,2%)比较,分布差异有统计学意义(χ2=9.840,P<0.05)。在胃癌组中TNF-A-1031各基因型的频率(T/T,50%;T/C,41%;C/C,9%)与对照组(T/T,73%;T/C,25%;C/C,2%)比较,分布差异有统计学意义(χ2=9.335,P<0.001);Logistic回归分析与携带TNF-A-1031 T/T者比较,携带TNF-A-1031 C/C者发生胃炎的危险性为OR=7.60(95%CI:1.38-41.77);与携带TNF-A-1031 T/T者比较,携带TNF-A-1031 C/C者发生胃溃疡的危险性为OR=5.84(95%CI:1.00-33.84);与携带TNF-A-1031 T/T者比较,携带TNF-A-1031 C/C者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=7.94(95%CI:1.44-43.67);与携带TNF-A-1031 T/T者比较,携带TNF-A-1031 C/C者发生胃癌的危险性为OR=6.95(95%CI:1.19-40.63)。在疾病组和对照组中IL-10-819的各基因型频率的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TNF-α-1031基因多态性与胃炎、胃溃疡、十二指肠、胃癌的易感性相关。

关键词：胃十二指肠疾病基因多态性幽门螺杆菌 IL-10 TNF—α

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硫糖铝对幽门螺杆菌VacA IgY的保护作用的动物实验评价

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中国微生态学杂志 2010年第11期22卷 988-992页

作者：郭丽媛吴金英黄伟杨致邦吴敏马小京青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院山东烟台264000 西南大学荣昌校区动物医学系重庆402460 重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室

目的评价硫糖铝在胃内对*** IgY型抗体的保护作用,为制备*** IgY型抗体口服剂提供实验依据。方法大量诱导工程菌DH5α-vacA-pQE30,表达并纯化重组蛋白VacA。以VacA为抗原接种洛曼母鸡,制备纯化的IgY。建立***感染的小鼠模型,在不同浓度... 详细信息

目的评价硫糖铝在胃内对*** IgY型抗体的保护作用,为制备*** IgY型抗体口服剂提供实验依据。方法大量诱导工程菌DH5α-vacA-pQE30,表达并纯化重组蛋白VacA。以VacA为抗原接种洛曼母鸡,制备纯化的IgY。建立***感染的小鼠模型,在不同浓度的IgY液中分别加入30%硫糖铝,灌胃后观察胃黏膜慢性炎症反应以评价硫糖铝在胃内对VacA IgY的保护作用。结果在小鼠胃内,0.5mg IgY+30%硫糖铝/天灌胃小鼠即可有效防治***感染引起的胃黏膜损害,与不加硫糖铝比较,其效果提高了8倍。结论 30%以上的硫糖铝在小鼠胃内可增强VacA IgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的抗*** IgY型抗体保护剂。

关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素抗原卵黄抗体硫糖铝保护剂

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