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第三军医大学学报 2020年第6期42卷 568-575页

作者：李晓栩黄缄矫力崔宇杨诚忠魏铭陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系:高原生理学与病理学教研室重庆4400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系:极端环境医学教育部重点实验室重庆4400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系:全军高原医学重点实验室重庆4400038 重庆医科大学基础医学院干细胞与组织工程研究室病理生理学教研室重庆400016

目的研究缺氧对大鼠肺成纤维细胞甲酰肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)表达的影响。方法分离大鼠肺成纤维细胞,用48孔Boyden趋化小室观察大鼠成纤维细胞在不同浓度(0、10、100、1000 nmol/L组)的FPR激动剂(fMLF)作用下的趋化能... 详细信息

目的研究缺氧对大鼠肺成纤维细胞甲酰肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)表达的影响。方法分离大鼠肺成纤维细胞,用48孔Boyden趋化小室观察大鼠成纤维细胞在不同浓度(0、10、100、1000 nmol/L组)的FPR激动剂(fMLF)作用下的趋化能力。将细胞置于低氧培养箱中培养(1%O2,5%CO2,94%N2,37℃)24 h,取细胞培养上清,结合FPR特异性拮抗剂tBoc处理,检测缺氧培养上清中FPR介导的趋化活性。将细胞分为常氧组[普通培养箱(5%CO2,95%空气,37℃)]和缺氧组[置低氧培养箱中培养(1%O2,5%CO2,94%N2,37℃)2、12、24 h],用免疫印迹、PCR检测大鼠肺成纤维细胞FPR1和FPR激活物膜联蛋白A1(annexin A1,AnxA1)的蛋白、mRNA水平。不同浓度fMLF作用下细胞中FPR1、AnxA1的蛋白水平。使用tBoc预处理细胞并缺氧24 h后,检测FPR1、AnxA1的蛋白水平。结果fMLF可明显引起大鼠肺成纤维细胞趋化100 nmol/L组引起趋化至膜下侧的细胞数增多最为显著(P<0.05)。缺氧后的细胞培养上清趋化活性显著高于常氧组(P<0.05),加入tBoc后其趋化活性显著降低(P<0.05),降低程度显著高于常氧组。缺氧12 h,肺成纤维细胞的FPR1蛋白水平显著增加(P<0.05)。缺氧12、24 h与缺氧0 h组相比较,AnxA1的蛋白水平显著增加(P<0.05)。与常氧组相比较肺成纤维细胞的FPR1、AnxA1的mRNA水平显著增加(P<0.05);随着fMLF浓度的升高,FPR1和AnxA1的蛋白表达水平逐渐增加,100、1000 nmol/L组与0 nmol/L组相比,具有显著性差异(P<0.05)。甲酰肽受体拮抗剂tBoc可以显著削弱此效应。结论原代培养的大鼠肺成纤维细胞表达FPR1,缺氧促进大鼠肺成纤维细胞FPR1及其激活物表达与分泌,FPR1激活可进一步增强受体及其激活物的表达与分泌。

关键词：成纤维细胞缺氧趋化甲酰酞受体

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蛋白激酶B2慢病毒载体的构建及其沉默效果的验证

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解剖学杂志 2021年第2期44卷 118-122页

作者：戴研平高晓勤贵州医科大学基础医学院病理学与病理生理学教研室贵阳550004 遵义医药高等专科学校基础医学院遵义563006 岳阳市岳阳楼区人民医院岳阳414000

目的:利用RNA干扰技术,以蛋白激酶B 2(AKT2)的mRNA为靶点,设计、构建AKT-2的RNA干扰慢病毒载体,并对其沉默效果进行验证。方法:根据目的基因设计3个小干扰RNA(siRNA)靶点,进行引物合成。将单链的引物退火成双链oligo序列,连接入双酶切... 详细信息

目的:利用RNA干扰技术,以蛋白激酶B 2(AKT2)的mRNA为靶点,设计、构建AKT-2的RNA干扰慢病毒载体,并对其沉默效果进行验证。方法:根据目的基因设计3个小干扰RNA(siRNA)靶点,进行引物合成。将单链的引物退火成双链oligo序列,连接入双酶切线性化的RNA干扰载体。测序验证正确的转化子,进行高纯度质粒抽提。提取3种阳性克隆质粒测序,转染HEK293-T细胞后产生慢病毒质粒。实验大鼠被随机分为5组,每组10只,空白对照组不注射慢病毒,NC-shRNA阴性感染组、PL-AKT2-shRNA-1感染组、PL-AKT2-shRNA-2感染组、PL-AKT2-shRNA-3感染组。大鼠附睾分别被注射200μL含有NC-shRNA、PL-AKT2-shRNA-1、PLAKT2-shRNA-2、PL-AKT2-shRNA-3的病毒液;免疫印迹检测大鼠附睾AKT2的蛋白沉默效果。结果:测序结果证明3种慢病毒载体被包装成功。感染大鼠附睾后,AKT2的蛋白表达量均较阴性感染组和正常对照组明显降低,其中以PL-AKT2-shRNA-3质粒组干扰效果更为有效。结论:成功设计了AKT-2基因的RNA干扰靶点和制备了AKT-2基因的慢病毒载体,基因沉默效果明显。

关键词：蛋白激酶B2 慢病毒干扰基因沉默附睾

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家兔SO低位中枢NOS阳性神经元的分布及其在急性重症胆管炎时表达的改变

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河北医科大学学报 2007年第2期28卷 81-84,161页

作者：张敏张连珊张景坤曹敏杨天祝杨思禹河北医科大学基础医学院病理生理学教研室河北石家庄050017 河北医科大学基础医学院病理学教研室河北石家庄050017 河北医科大学组织部河北石家庄050017 河北医科大学基础医学研究所神经生物室河北石家庄050017

目的探讨家兔胆道口括约肌(sphincter of Oddi,SO)低位中枢一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)阳性神经元及神经纤维的分布特征及其在急性重症胆管炎时表达的改变。方法将10只家兔随机分为2组,①正常对照组;②急性重症胆管炎组。... 详细信息

目的探讨家兔胆道口括约肌(sphincter of Oddi,SO)低位中枢一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)阳性神经元及神经纤维的分布特征及其在急性重症胆管炎时表达的改变。方法将10只家兔随机分为2组,①正常对照组;②急性重症胆管炎组。经灌注固定后,取材腹腔神经节、胸髓及其相应脊神经节、迷走神经下神经节和延髓。以NADPH-d组织化学染色显示NOS阳性神经元及神经纤维。结果对照组结果如下,①腹腔神经节内未见NOS阳性神经元胞体。②迷走神经下神经节和脊神经节内有极少量NOS阳性神经元胞体。③胸髓内,NOS阳性神经元主要分布在整个灰质中间带及后角固有核,NOS阳性神经纤维主要分布在后角胶状质,后角内、外侧边缘,中央管周围区,背外侧索和前索沟缘束。④延髓内,NOS阳性神经元主要分布在孤束外侧核、迷走神经背核、疑核、延髓中缝核及网状结构。急性重症胆管炎组与对照组相比可见阳性标记物显著增多、着色加深。结论①急性重症胆管炎时,SO低位神经中枢的NOS活性上调;②在SO的阳性纤维中,不包括交感性节后纤维。

关键词：一氧化氮合酶奥狄括约肌胆管炎兔

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白细胞介素1通过JNK信号通路调控Schlafen2基因的表达

白细胞介素1通过JNK信号通路调控Schlafen2基因的表达

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中国毒理学会放射毒理专业委员会第七次、中国毒理学会免疫毒理专业委员会第五次、中国环境诱变剂学会致突专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致畸专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致癌专业委员会第二次全国学术会议

作者：胡迎春方玲周乔丹陈忠民李刚吴德昌霍艳英军事医学科学院放射与辐射医学研究所兰州大学基础医学院病理生理教研室重庆医科大学病理学教研室

目的在多效生长因子(pleiotrophin,Ptn)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞 Ptn-siRNA B/MEF241中,研究白细胞介素1(Interleukin-1,IL-1)调控 Schlafen2(Slfn2) 基因表达的机制。方法(1)应用 Northern blot 检测 Ptn 沉默细胞 Ptn-siRNA B/MEF241 处于不同生长密度时 Slfn2基因的表达变化以确定 Pm 沉默细胞中 Slfn2基因的表达是否受到某种分泌性细胞因子的调控;(2)用不同浓度的 IL-1α中和抗体及 IL-1受体拮抗剂处理 Pm 沉默细胞,通过 Northern blot 检测细胞内 Slfn2表达的抑制情况;(3)用不同浓度的 IL-1α中和抗体及 IL-I受体拮抗剂处理 Ptn 沉默细胞不同时间,通过 Western blot 检测细胞中 JNK 磷酸化水平;(4)Northern blot 检测20μM SP600125(JNK/MAPK 通路抑制剂) 对 Ptn 沉默细胞中 Slfn2基因表达的影响。结果 ptn 沉默细胞中 Slfn2基因的表达水平同细胞密度相关;用中和抗体和受体拮抗剂阻断 IL-1通路,Slfn2表达受到显著抑制:IL-1 受到抑制会影响 JNK 通路的活化;阻断 JNK 通路,Slfn2的表达受到显著抑制。结论 IL-1 可以通过 JNK 通路诱导 Slfn2的表达。

关键词：多效生长因子白细胞介素1 JNK通路 Schlafen2 基因表达

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血管内皮细胞生长因子及其受体2在慢性砷染毒大鼠睾丸中的表达及其意义

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解剖学杂志 2020年第3期43卷 186-189,F0002页

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体2(VEGFR2)在慢性砷中毒大鼠睾丸中的表达及意义。方法:健康清洁级雄性SD大鼠随机分为高、中、低剂量砷染毒组和对照(蒸馏水)组,采用经口自由饮用方式进行染毒,连续染毒6个月。H-E染色观察... 详细信息

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体2(VEGFR2)在慢性砷中毒大鼠睾丸中的表达及意义。方法:健康清洁级雄性SD大鼠随机分为高、中、低剂量砷染毒组和对照(蒸馏水)组,采用经口自由饮用方式进行染毒,连续染毒6个月。H-E染色观察睾丸一般形态学变化,免疫荧光化学法对睾丸组织VEGF和VEGFR2的表达进行定位,采用实时荧光定量PCR法检测睾丸组织VEGF和VEGFR2的mRNA表达变化,流式细胞术观察精子的凋亡率。结果:与对照组比较,中、高剂量砷组大鼠体质量明显降低,睾丸组织质量也明显降低,而低剂量砷组大鼠体质量、睾丸质量、睾丸脏器系数差异无统计学意义。对照组睾丸结构正常,染砷组大鼠睾丸组织上皮结构疏松,层次排列紊乱,层次逐渐减少,精原细胞出现空泡样改变,睾丸间质充血、渗出等,尤其中、高剂量砷组有较明显的变化。与对照组比较,各染毒组VEGF和VEGFR2的mRNA表达水平均较低,砷染毒组大鼠精子凋亡率较高,差异均有统计学意义。结论:慢性砷中毒时,VEGF可能通过旁分泌-自分泌的方式参与调控大鼠睾丸的功能,VEGF及其受体2在砷中毒大鼠精子发生和发育过程中起重要作用。

关键词：血管内皮细胞生长因子血管内皮细胞生长因子受体2 砷中毒睾丸

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过氧化物酶6在慢性砷中毒大鼠附睾的表达及意义

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解剖学杂志 2019年第4期42卷 350-353页

目的:研究过氧化物酶6(Prdx6)在慢性砷中毒大鼠附睾中的表达及意义,为砷中毒导致的男性不育提供理论依据.方法:健康清洁级雄性SD大鼠随机分为高(60 mg/L)、中(12 mg/L)、低(2.4 mg/L)剂量砷染毒组和对照(蒸馏水)组,采用经口自由饮用方... 详细信息

目的:研究过氧化物酶6(Prdx6)在慢性砷中毒大鼠附睾中的表达及意义,为砷中毒导致的男性不育提供理论依据.方法:健康清洁级雄性SD大鼠随机分为高(60 mg/L)、中(12 mg/L)、低(2.4 mg/L)剂量砷染毒组和对照(蒸馏水)组,采用经口自由饮用方式进行染毒,连续染毒6个月.采用免疫印迹及实时荧光定量PCR法检测Prdx6的表达变化及意义,透射电镜观察精子超微结构变化.结果:免疫印迹及实时荧光定量PCR结果显示,与对照组比较,各染毒组Prdx6的蛋白及mRNA表达水平均显著较低.透射电镜结果显示对照组精子结构正常,砷染毒各组精子尾部中段线粒体均出现了病理损害.结论:慢性砷中毒对大鼠附睾中Prdx6的表达有影响,引起精子超微结构改变,说明其与男性不育有一定的关系.

关键词：过氧化物酶6 砷中毒附睾大鼠

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多效生长因子Pleiotrophin负调控Schlafen2表达的机制探讨

多效生长因子Pleiotrophin负调控Schlafen2表达的机制探讨

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中国环境诱变剂学会第13届学术交流会暨中国环境诱变剂学会青年学术交流会

作者：霍艳英胡迎春杨柳方玲李刚周平坤吴德昌军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京 100850 重庆医科大学病理学教研室重庆 400016 兰州大学医学院病理生理学教研室兰州730000

目的：多效生长因子(Pleiotrophin,PTN指蛋白,Ptn指基因)是一种可同肝素结合的分泌性生长/分化因子,具有刺激细胞粘附、迁移、存活、生长和分化等功能。我们前期建立了Ptn稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)模型,用小鼠表达谱芯片比较... 详细信息

目的：多效生长因子(Pleiotrophin,PTN指蛋白,Ptn指基因)是一种可同肝素结合的分泌性生长/分化因子,具有刺激细胞粘附、迁移、存活、生长和分化等功能。我们前期建立了Ptn稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)模型,用小鼠表达谱芯片比较了对照及Ptn沉默细胞的基因表达差异。发现,同DDK综合症相关的基因Schlafen 2(Slfn2)在Ptn沉默的MEFs细胞中表达显著上调;本研究通过Northern b1ot比较了外源性PTN细胞因子处理Ptn沉默细胞前后Slfn2表达的变化,进一步证实PTN对Slfn2表达的负性调控作用;通过通路抑制剂处理后检测发现,PTN可能通过AIK受体介导的JNK、P38等通路抑制Slfn2的表达;Western blot比较对照和Ptn沉默细胞内JNK、P38、ERKI/2等的磷酸化水平结果表明,Ptn沉默细胞中JNK、P38磷酸化水平最著下调,同时细胞内ALK下游信号途径相关转录因子NF-Kb、AP-1的活性也显著下调。本研究提示PTN可能直接或间接通过ALK介导的JNK、P38等通路对Slfn2的表达进行负性调控。

关键词：多效生长因子胚胎成纤维细胞表达谱芯片基因表达沉默细胞细胞粘附

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生长抑素对急性出血坏死性胰腺炎肝损伤的作用机制

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中国普通外科杂志 2008年第3期17卷 224-227页

作者：张昭赵刚王丹王春友华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科中心湖北武汉430022 河北医科大学基础医学院病理学与病理生理学教研室河北石家庄050017

目的探讨生长抑素对大鼠急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)时肝损伤的治疗作用及其机制。方法逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠(TAC)制备AHNP模型。动物分为假手术组(SO组),AHNP生理盐水处理组(AHNP组)和AHNP奥曲肽治疗组。各组动物术后3,6,12h剖杀,... 详细信息

目的探讨生长抑素对大鼠急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)时肝损伤的治疗作用及其机制。方法逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠(TAC)制备AHNP模型。动物分为假手术组(SO组),AHNP生理盐水处理组(AHNP组)和AHNP奥曲肽治疗组。各组动物术后3,6,12h剖杀,检测肝组织中Toll-样受体(TLR)2,4mRNA和细胞核转录因子(NF-κB)的表达情况。结果与SO组比较,胰腺炎组大鼠TLR2,4mRNA于3h开始升高,于12h达高峰(均P<0.01);肝组织中NF-κB于3h开始表达增强,6h达高峰。奥曲肽组肝组织中的TLR2,4mRNA及NF-κB各时点表达均较AHNP组降低(P<0.05)。结论生长抑素对AHNP有显著的保护作用。其机制可能是通过抑制胰弹性蛋白酶的分泌与激活,抑制Toll受体和NF-κB表达,降低炎症反应,从而减轻肝损伤。

关键词：胰腺炎急性坏死性肝/病理学生长抑素受体 Toll NF—κB

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砷对大鼠附睾转化生长因子β1表达及精子顶体蛋白酶的影响

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中国现代医学杂志 2019年第23期29卷 7-12页

作者：戴研平高晓勤秦海霞贵州医科大学基础医学院病理学与病理生理学教研室贵州贵阳550004 遵义医药高等专科学校基础医学院贵州遵义563006 乌兰察布医学高等专科学校内蒙古乌兰察布012000

目的研究慢性砷中毒对大鼠附睾转化生长因子β1(TGF-β1)及精子顶体蛋白酶的影响,为砷中毒导致的男性不育提供理论依据。方法健康清洁级雄性SD大鼠40只,体重160~200 g,随机分为高(60.0 mg/L)、中(12.0 mg/L)、低(2.4 mg/L)剂量砷染毒组... 详细信息

目的研究慢性砷中毒对大鼠附睾转化生长因子β1(TGF-β1)及精子顶体蛋白酶的影响,为砷中毒导致的男性不育提供理论依据。方法健康清洁级雄性SD大鼠40只,体重160~200 g,随机分为高(60.0 mg/L)、中(12.0 mg/L)、低(2.4 mg/L)剂量砷染毒组及对照组(蒸馏水),采用经口自由饮用方式进行染毒,连续6个月。染毒结束后,采用免疫组织化学法、Western blotting及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TGF-β1的表达变化,改良底物膜法观察精子顶体蛋白酶活性(阳性率和活性强度)。结果各组TGF-β1表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同剂量砷染毒组与对照组两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,不同剂量砷染毒组TGF-β1的蛋白及mRNA表达水平下调(P<0.05)。与对照组比较,低剂量组精子顶体蛋白酶活性差异无统计学意义(P>0.05);中、高剂量组精子顶体蛋白酶活性均下调(P<0.05)。结论慢性砷中毒对大鼠附睾TGF-β1的表达有影响,引起精子顶体酶活性下降,可能与男性不育有关。TGF-β1有望成为治疗慢性砷中毒引起男性不育的新靶点。

关键词：砷中毒附睾 TGF-β1 顶体蛋白酶

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更正"ERO1α介导同型半胱氨酸诱导的肝细胞内质网应激"[世界华人消化杂志2014;22(34):5228-5234]

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世界华人消化杂志 2019年第16期27卷 1041-1042页

作者：周龙霞杨安宁陈久凯赵丽王艳华刘现梅蔡欣张鸣号姜怡邓曹军宁夏医科大学基础医学院病理学与病理生理学系宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学检验学院临床检验诊断学教研室宁夏回族自治区银川市750004

1更正《世界华人消化杂志》2014年12月第22卷第34期第5228-5234页《ERO1α介导同型半胱氨酸诱导的肝细胞内质网应激》一文做出如下更正:第5231页图3中的B图应为图1.

关键词：同型半胱氨酸内质网应激肝细胞杂志消化华人世界介导

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