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带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用

重庆医科大学学报 2013年第5期38卷 512-516页

作者：符少月焦庆昉黄启彬刘潇淇易发平宋方洲重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的:探索带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用。方法:体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(immature DC,imDC),将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillom... 详细信息

目的:探索带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用。方法:体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(immature DC,imDC),将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)-16 E6/E7基因的重组腺病毒感染imDC,Western blot检测E7蛋白的表达;构建裸鼠的人宫颈癌CaSki细胞移植瘤模型,应用DC疫苗诱导的BALB/c小鼠脾脏的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)处理后,观察裸鼠肿瘤体积变化,肿瘤长出第28天后处死裸鼠,小心剥下肿瘤组织,石蜡包埋,HE染色观察各组肿瘤的细胞形态,免疫组织化学技术法检测肿瘤组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果:成功培养出DC并制备出DC疫苗;第28天各组裸鼠肿瘤体积pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组与pAd-mock-DC-CTL-CaSki组、DC-CTL-CaSki组、CaSki组相比较,pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组裸鼠肿瘤体积最小(P<0.05);免疫组化检测肿瘤组织中Bax蛋白的表达结果显示pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组最高,而CaSki组表达最低;免疫组化检测肿瘤组织中Bcl-2蛋白的表达结果显示pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组最低,而CaSki组表达最高。结论:带有HPV-16 E6/E7DC疫苗能够诱导CTL抑制裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的生长。

关键词：树突状细胞人乳头瘤病毒16 T淋巴细胞 CaSki细胞

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纳米细菌促进乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡

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第三军医大学学报 2013年第16期35卷 1688-1691页

作者：刘胜男张德纯张名均郭亚楠杨晓容许舸重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室生命科学院电镜组重庆400016

目的观察纳米细菌(nanobacteria,NB)与纳米羟基磷灰石颗粒(nano hydroxyapatite,nHAP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响。方法实验分为NB组、nHAP组和正常对照组,其中NB组和nHAP组悬液的浓度均为2麦氏浊度(M),正常对照组仅加培养基,与乳腺... 详细信息

目的观察纳米细菌(nanobacteria,NB)与纳米羟基磷灰石颗粒(nano hydroxyapatite,nHAP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响。方法实验分为NB组、nHAP组和正常对照组,其中NB组和nHAP组悬液的浓度均为2麦氏浊度(M),正常对照组仅加培养基,与乳腺癌MDA-MB-231细胞共同培养24、48、72 h,通过CCK-8检测其对细胞的毒性作用;培养12、24、48、72 h,取上清,经全自动生化分析仪测定LDH活性;作用72 h,经流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定其凋亡率,透射电镜观察其超微结构的变化情况。结果 CCK-8显示,NB组24、48、72 h对细胞的抑制作用均强于nHAP组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);NB组LDH含量在24、48、72 h时均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);24、48、72 h均高于nHA组,但仅24、48 h有统计学差异(P<0.05)。nHAP组LDH活性仅在72 h与正常对照组比较有统计学差异(P<0.01);72 h后NB组细胞凋亡率高于nHAP组,差异有统计学意义(P<0.01);透射电镜下观察,NB组可以看到胞质空泡样变,核固缩以及明显的凋亡小体,nHAP组未见明显异常。结论 NB可以抑制乳腺癌细胞的生长,促进其发生凋亡,其导致细胞凋亡的成分不仅仅是NB羟基磷灰石的外壳,也可能与NB的其他组分或代谢产物有关。

关键词：纳米细菌纳米羟基磷灰石凋亡乳腺癌

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人核糖核苷酸酶抑制因子表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化的影响

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中国生物制品学杂志 2013年第8期26卷 1088-1093页

作者：熊冬梅姚雪李林舒静陈俊霞重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤医学研究中心重庆400016

目的探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平;HE染色检测细胞形态的变化;Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平;将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重;免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平。结果荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功;实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31%和64.11%、49.6%和49.5%(P<0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大;与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76%和46.93%(P<0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49%和54.63%、43.74%和51.55%、60.35%和53.77%(P<0.001);两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91%和80.89%(P<0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加。结论沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力。

关键词：核糖核苷酸抑制因子膀胱癌 T24细胞上皮间质转化

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沉默整合素连接激酶基因抑制TCA8113舌癌细胞生长和侵袭

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第三军医大学学报 2013年第15期35卷 1552-1557页

作者：幸宇邓世雄陈俊霞重庆医科大学基础医学院法医生物信息学研究室 400016 重庆医科大学基础医学院:细胞生物学及遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心 400016

目的研究沉默整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因表达,对人舌鳞癌细胞生长、侵袭和转移能力的影响。方法通过用ILK mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA811... 详细信息

目的研究沉默整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因表达,对人舌鳞癌细胞生长、侵袭和转移能力的影响。方法通过用ILK mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,通过筛选鉴定后,用MTT法、划痕试验和Transwell法分别检测细胞生长、迁移和侵袭能力,用Western blot分析细胞中ILK、p-Akt、p-GSK3β及Snail等的表达。结果沉默ILK基因表达显著抑制了细胞的生长、迁移和侵袭能力,接种的第48、72、96、120小时,TCA8113 siILK组的抑制率分别为17%、29%、25%、42%,迁移能力较TCA8113组和TCA8113 vector组分别下降67%和66%,侵袭能力则较两个对照组下降了67%和68%,p-Akt、p-GSK3β及Snail的表达较TCA8113组和TCA8113 vector组分别降低了45%和53%,57%和61%,74%和73%。结论抑制ILK基因的表达可通过Akt/GSK3β/Snail途径,显著抑制人舌鳞癌TCA8113细胞的生长、迁移和侵袭潜能,可作为治疗人舌鳞癌的靶蛋白。

关键词：整合素连接激酶人舌鳞癌细胞肿瘤生长转移侵袭

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钙化胎盘及脐带血中纳米细菌的形态学观察

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临床检验杂志 2013年第3期31卷 215-217页

作者：刘胜男张德纯张名均郭亚楠杨晓容杨顺杰重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学生命科学院电镜组重庆400016

目的研究纳米细菌(nanobacteria,NB)的分布,寻求检测胎盘钙化NB感染的更好组织来源。方法收集孕妇胎盘钙化组织和脐带血20例,并以20例正常胎盘组织作对照,分离培养NB;用革兰染色和茜素红染色法、扫描电镜和透射电镜进行形态学鉴定。结... 详细信息

目的研究纳米细菌(nanobacteria,NB)的分布,寻求检测胎盘钙化NB感染的更好组织来源。方法收集孕妇胎盘钙化组织和脐带血20例,并以20例正常胎盘组织作对照,分离培养NB;用革兰染色和茜素红染色法、扫描电镜和透射电镜进行形态学鉴定。结果培养沉淀物符合NB的特性。脐带血NB分离率为80%(16/20),钙化胎盘组织为65%(13/20),均明显高于正常胎盘组织的10%(2/20),χ2分别为12.07、9.09,P均<0.01;脐带血与钙化胎盘组织比较,差异无统计学意义(χ2=1.33,P>0.05)。油镜下脐带血和钙化胎盘组织分离的NB为球状或球杆状,形态相似;茜素红染色脐带血中NB较多且聚集成簇;透射电镜和扫描电镜下NB呈球形,大小为80～500 nm,并可见毛刺结构。结论胎盘钙化与NB感染有关,脐带血适用于检测钙化胎盘的NB感染。

关键词：纳米细菌胎盘钙化脐带血

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梯度信号对背根神经节轴突生长的影响

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中华实验外科杂志 2013年第12期30卷 2677-2679页

作者：喻岚李皓莘林强陈全重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆医科大学基础医学院免疫学教研室 400016 广东省中医院骨二科

目的观察梯度神经生长因子（NGF）对背根神经节（DRG）轴突生长的引导及促进作用.方法制备聚左旋丙交酯（PLLA）膜,再使NGF梯度负载于该膜.取孕14 d胎鼠DRG,随机分为两组,A组（n=10）种植于负载有均匀NGF的膜上;B组（n=10）种植于负... 详细信息

目的观察梯度神经生长因子（NGF）对背根神经节（DRG）轴突生长的引导及促进作用.方法制备聚左旋丙交酯（PLLA）膜,再使NGF梯度负载于该膜.取孕14 d胎鼠DRG,随机分为两组,A组（n=10）种植于负载有均匀NGF的膜上;B组（n=10）种植于负载有梯度NGF的膜上.培养5d后,测量轴突长度.结果梯度NGF组的DRG轴突长度为（1530±30）.μm,轴突转弯系数（TR）为0.49 ±0.10;而均匀NGF组的DRG轴突长度为（1210±20）μm,TR为0.10±0.08.两组间的轴突长度与TR比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 NGF梯度信号对背根神经节轴突生长具有引导及促进作用.

关键词：丝蛋白梯度信号背根神经节轴突再生

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刚地弓形虫培养上清对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的作用

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激光杂志 2013年第1期34卷 98-99,101页

作者：黄开顺黄天利葛璞叶彬重庆医科大学实验教学中心重庆400016 重庆医科大学附一院老年科重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理教研室重庆400016 重庆医科大学病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:研究刚地弓形虫RH株培养上清对体外培养的肝癌细胞HepG2增值的影响,并探讨其可能的影响机制。方法:取对数生长期的HepG2细胞,分别接种于96孔细胞培养板及50mL培养瓶中,加入200μL不同数量(3×107/mL、6×107/mL、12×1... 详细信息

目的:研究刚地弓形虫RH株培养上清对体外培养的肝癌细胞HepG2增值的影响,并探讨其可能的影响机制。方法:取对数生长期的HepG2细胞,分别接种于96孔细胞培养板及50mL培养瓶中,加入200μL不同数量(3×107/mL、6×107/mL、12×107/mL)弓形虫RH株速殖子培养上清孵育24、48、36、72h后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测其对HepG2细胞增殖抑制作用;不同浓度弓形虫培养上清作用HepG2细胞48 h后,DAPI染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度(〔Ca2+〕i),Western-blot检测凋亡HepG2细胞内Caspase-3的表达。结果弓形虫培养上清能抑制HepG2细胞株增殖和诱导其凋亡,且呈时间剂量依赖性,各实验组与对照组比较有统计学意义(P<0.05);HepG2细胞凋亡率和〔Ca2+〕i随浓度增加逐渐增加,12×107/mL时凋亡率和〔Ca2+〕i分别达到41.46%、128.4(荧光计数单位);Caspase-3的表达随上清浓度增加表达增强。结论:刚地弓形虫培养上清能够抑制肝癌HepG2细胞增殖,其诱导HepG2细胞凋亡可能与细胞内钙离子浓度上调和Caspase-3的表达增强相关。

关键词：刚地弓形虫肝癌细胞HepG2 细胞凋亡细胞内钙离子浓度半胱氨酸蛋白酶-3

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Pre-miR-10a重组腺病毒质粒的构建及其在K562细胞中的表达

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中国生物制品学杂志 2013年第5期26卷 657-660页

作者：齐杰玉陶崑王灿蔚李秋红邓一平重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆市妇幼保健院检验科重庆400013 重庆医科大学实验中心重庆400016

目的构建pre-miR-10a(miR-10a前体)重组腺病毒表达质粒,感染K562细胞,并检测其基因表达水平。方法化学合成pre-miR-10a基因序列,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,将构建正确的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV pre-miR-10a与腺病毒骨... 详细信息

目的构建pre-miR-10a(miR-10a前体)重组腺病毒表达质粒,感染K562细胞,并检测其基因表达水平。方法化学合成pre-miR-10a基因序列,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,将构建正确的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV pre-miR-10a与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183感受态细胞,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,经4轮扩增后检测病毒滴度。收集病毒后,以100 MOI感染K562细胞,RT-PCR法检测miR-10a基因的转录水平。结果重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a经PacⅠ酶切,证明带有目的基因的重组腺病毒穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中,4轮扩增后腺病毒滴度为1.5×1011pfu/ml,可高效感染K562细胞,感染效率达90%以上;重组腺病毒Ad-pre-miR-10a感染的K562细胞中miR-10a基因转录水平明显升高,过表达率为150.82%。结论已成功构建重组腺病毒表达质粒pAd-pre-miR-10a,并可在K562细胞中高效表达,为进一步从体内和体外水平研究其抗白血病效应奠定了基础。

关键词： pre-miR-10a 腺病毒科 K562细胞基因表达

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人表皮生长因子受体显性负性突变体诱导胃癌细胞发生G0／G1期阻滞

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中国病理生理杂志 2013年第3期29卷 430-435页

作者：廖刚王子卫张能董浦江汤为学重庆医科大学附属第一医院胃肠外科重庆400016 重庆医科大学云南省第一人民医院普通外科云南昆明650032 重庆医科大学附属第一医院实验研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的:探讨人表皮生长因子受体显性负性突变体(dominant negative epidermal growth factor recep-tor,DNEGFR)对胃癌细胞细胞周期的影响及其分子机制。方法:选用2株人胃癌细胞,分为如下6组:SGC-7901细胞未转染组(US组)、SGC-7901细胞pEG... 详细信息

目的:探讨人表皮生长因子受体显性负性突变体(dominant negative epidermal growth factor recep-tor,DNEGFR)对胃癌细胞细胞周期的影响及其分子机制。方法:选用2株人胃癌细胞,分为如下6组:SGC-7901细胞未转染组(US组)、SGC-7901细胞pEGFP-N1质粒转染组(ES组)、SGC-7901细胞pEGFPN1-DNEGFR质粒转染组(DS组)、NCI-N87细胞未转染组(UN组)、NCI-N87细胞pEGFP-N1质粒转染组(EN组)和NCI-N87细胞pEGF-PN1-DNEGFR质粒转染组(DN组)。采用流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测细胞周期素依赖性蛋白激酶2(CDK2)、cyclin D1、Ser9位点磷酸化糖原合成酶激酶3β[p-GSK-3β(Ser9)]、p21和p27蛋白水平。结果:转染pEGFPN1-DNEGFR质粒的人胃癌细胞株出现G0/G1期阻滞,CDK2、cyclin D1和p-GSK-3β(Ser9)蛋白水平降低,p21和p27蛋白水平则升高。结论:DNEGFR通过激活GSK-3β使cyclin D1蛋白水平降低,并降低CDK2蛋白水平,上调p21和p27蛋白水平,最终导致胃癌细胞发生G0/G1期阻滞。这一结果将为胃癌生物治疗研究提供新思路。

关键词：表皮生长因子受体显性负性突变体胃肿瘤细胞周期

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基于科研创新平台的研究生管理模式初探

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中华医学教育探索杂志 2013年第2期12卷 127-130页

作者：易发平卜友泉刘革力张潞渝王应雄宋方洲重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 400016 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心 400016

为了加强科研平台研究生的管理，保证培养质量，重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心通过设立虚拟党支部，建立健全日常管理制度、经费管理制度和学术管理制度等措施，在研究生思想道德教育、规范日常作息行为、维护研究生利益和保证培... 详细信息

为了加强科研平台研究生的管理，保证培养质量，重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心通过设立虚拟党支部，建立健全日常管理制度、经费管理制度和学术管理制度等措施，在研究生思想道德教育、规范日常作息行为、维护研究生利益和保证培养质量等方面进行探索，取得较好的成效。

关键词：科研平台研究生管理思想道德教育制度建设

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