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细胞原纤毛与骨相关疾病的研究进展

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分子影像学杂志 2015年第1期38卷 8-12页

作者：杨建波李飞龙胡宁汪长东湖北省老河口市中医医院湖北老河口441800 重庆医科大学基础医学院生物化学和分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院骨科重庆400016

纤毛广泛存在于体内的细胞表面,其中"9+0"型纤毛又被称为原纤毛。纤毛在机体发育和调节过程中必不可少,与许多疾病的发病有关,尤其是骨方面。本文就纤毛和原纤毛的结构、调控、作用,及原纤毛在骨发育、骨相关细胞中作用和原... 详细信息

纤毛广泛存在于体内的细胞表面,其中"9+0"型纤毛又被称为原纤毛。纤毛在机体发育和调节过程中必不可少,与许多疾病的发病有关,尤其是骨方面。本文就纤毛和原纤毛的结构、调控、作用,及原纤毛在骨发育、骨相关细胞中作用和原纤毛相关骨疾病进行综述。

关键词：原纤毛骨纤毛疾病

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结核分枝杆菌Zmp1基因原核表达载体的构建及表达鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第6期30卷 573-575,580页

作者：张继明杨春何永林穆柳青张春燕樊宇徐蕾重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-Zmp1;转化入大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot法鉴定。结果PCR法扩增出Zmp1基因;重组表达质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确;表达的重组Zmp1融合蛋白相对分子质量(Mr)约为94 000,大小与预期融合蛋白一致;重组Zmp1融合蛋白可与His标签单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了Zmp1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得重组Zmp1融合蛋白表达。

关键词：结核分枝杆菌 Zmp1 原核表达

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多重耐药纹带棒状杆菌的耐药机制研究

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中国抗生素杂志 2014年第5期39卷 361-364页

作者：李科张德纯张名均杨金梅杨晓容刘胜男重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究多重耐药纹带棒状杆菌(MDR-Cs)的耐药机制。方法用微量肉汤稀释法检测临床分离的48株MDR-Cs的最低抑菌浓度(MIC);聚合酶连反应检测菌株的核糖体甲基化酶基因(ermX)、核糖体保护蛋白基因(tet(W))、DNA螺旋酶A亚单位基因(gyrA)和... 详细信息

目的研究多重耐药纹带棒状杆菌(MDR-Cs)的耐药机制。方法用微量肉汤稀释法检测临床分离的48株MDR-Cs的最低抑菌浓度(MIC);聚合酶连反应检测菌株的核糖体甲基化酶基因(ermX)、核糖体保护蛋白基因(tet(W))、DNA螺旋酶A亚单位基因(gyrA)和接合型转座子Tn1545整合酶基因(intTn)、L,D-转肽酶基因(ldt1/2),并测序分析。结果根据2007年CLSI M45文件的标准检测14种抗菌药物的敏感性,所有被测菌株均表现出多重耐药;ermX、tet(W)和intTn基因检出率分别为93.8%、100%和100%;与标准菌株比对,所有菌株的gyrA基因序列均表现为以间隔3个氨基酸的丝氨酸和天冬氨酸分别突变为苯丙氨酸和丙氨酸的双点突变;未检出ldt1/2。结论中国重庆地区的MDR-Cs对青霉素、Ⅲ、Ⅳ代头孢菌素、四环素、喹诺酮类和复方磺胺甲噁唑表现出全耐药,对万古霉素、利奈唑胺表现为全敏感;菌株介导ermX和tet(W)基因分别对红霉素和四环素耐药,介导gyrA基因双位点突变对喹诺酮类高水平耐药,所有菌株均携带转座子Tn1545整合酶intTn基因。

关键词：多重耐药纹带棒状杆菌耐药机制

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MIBG对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

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基础医学与临床 2014年第9期34卷 1221-1225页

作者：刘逢秋管小琴王娅兰苏晏重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探究间碘苄胍(MIBG)对肝癌细胞HepG2增殖的影响及其可能机制。方法细胞免疫荧光法检测HepG2细胞中精氨酸特异性单腺苷二磷酸核糖基化转移酶1(ART1)的表达。MTT比色实验检测肝癌细胞HepG2的生存率。流式细胞计数法检测细胞周期。West... 详细信息

目的探究间碘苄胍(MIBG)对肝癌细胞HepG2增殖的影响及其可能机制。方法细胞免疫荧光法检测HepG2细胞中精氨酸特异性单腺苷二磷酸核糖基化转移酶1(ART1)的表达。MTT比色实验检测肝癌细胞HepG2的生存率。流式细胞计数法检测细胞周期。Westrenblot检测ART1、RhoA、c-myc和cyclinA1的表达。结果ART1在HepG2细胞有表达。MIBG对HepG2细胞增殖抑制呈剂量依赖性(P<0.05),主要是将细胞阻滞在S期(P<0.05)。MIBG能降低ART1、RhoA、c-myc和cyclinA1的表达水平(P<0.05)。结论MIBG通过影响RhoA信号通路,下调c-myc蛋白和cyclinA1蛋白的表达,将细胞阻滞在S期,而抑制HepG2细胞的增殖。

关键词：肝癌细胞增殖单腺苷二磷酸核糖基化间碘苄胍

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NO信号通过I-kappaB磷酸化激活人肝细胞内源凝血因子Ⅷ重表达的调控作用

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吉林大学学报（医学版） 2014年第6期40卷 1155-1160页

作者：温泉何玉霞周云飞王娟张军重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:建立一氧化氮(NO)前体化合物L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子Ⅷ(FⅧ)重表达的分子细胞生物学模型,探讨NO信号激活L02中内源FⅧ重表达的调控通路及分子基础。方法:取对数生长期L02细胞随机分为对照组、加药组(L-精氨酸)、抑制... 详细信息

目的:建立一氧化氮(NO)前体化合物L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子Ⅷ(FⅧ)重表达的分子细胞生物学模型,探讨NO信号激活L02中内源FⅧ重表达的调控通路及分子基础。方法:取对数生长期L02细胞随机分为对照组、加药组(L-精氨酸)、抑制剂组(L-NAME和L-精氨酸)和抑制剂对照组(L-NAME),分别培养12、24、36、48和60h,采用流式细胞术检测作用48h后L02中人FⅧ蛋白的表达,Griess法检测不同时间点L02细胞内NO水平,RT-PCR法检测L02中人FⅧ基因、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因、核转录因子(NF-κB1)基因和核因子κB(免疫球蛋白κ轻链基因增强子)抑制蛋白α亚基(I-κB alpha)基因的转录水平,Western blotting法检测L02中人磷酸化I-kappaB(磷酸化I-κB)表达水平。结果:流式细胞术检测,加L-精氨酸培养48h后L02中出现人FⅧ蛋白的表达。Griess法检测,加药组L02在3、6和12h内NO表达水平显著增加(P<0.05),随后又基本恢复到正常水平,正常组、抑制剂组和抑制剂对照组L02细胞内NO水平无变化;RT-PCR检测,加药组L02中人FⅧmRNA转录;对照组、抑制剂组和抑制剂对照组均无人FⅧmRNA的转录,加药组iNOS、NF-κB1和I-κB alpha转录水平均上升(P<0.05),对照组、抑制剂组和抑制剂对照组上述基因转录水平均无明显变化。Western blotting法检测,加入L-精氨酸后,磷酸化I-κB表达水平明显增加(P<0.05),其他组则无此变化。结论:L-精氨酸通过NO信号通路进而激活I-κB磷酸化,导致人FⅧ基因启动子上游调控相关的转录因子NF-κB1进入胞核从而激活人离体肝细胞L02中内源人FⅧ的表达。

关键词：人凝血因子Ⅷ L-精氨酸一氧化氮信号通路磷酸化 human coagulation factor Ⅷ

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滑膜软骨瘤病研究进展

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骨科 2015年第6期6卷 332-336页

作者：杨先甲汪亚玲蔡秀华李飞龙周鹏飞胡宁汪长东恩施市中心医院创伤外科湖北恩施445000 重庆医科大学附属第一医院骨科重庆医科大学附属口腔医院口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室重庆医科大学基础医学院生物化学和分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心

滑膜软骨瘤(synovial chondromatosis,SC)又称滑膜软骨化生(synovial chodrometaplasia),是一种发病机制不明确的关节滑膜或滑膜囊、腱鞘发生异常增殖的疾病,与软骨、成骨和血管形成异常有关。其多在关节内形成软骨结节,主要发生在膝关... 详细信息

滑膜软骨瘤(synovial chondromatosis,SC)又称滑膜软骨化生(synovial chodrometaplasia),是一种发病机制不明确的关节滑膜或滑膜囊、腱鞘发生异常增殖的疾病,与软骨、成骨和血管形成异常有关。其多在关节内形成软骨结节,主要发生在膝关节,临床上多使用MRI等进行诊断,SC多采用手术治疗,其在非手术治疗方面进展不大。本文就其发病机制、临床表现、诊断及鉴别诊断,以及治疗进行综述。

关键词：滑膜软骨肿瘤

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过表达Bmi-1基因对乳腺癌细胞株BT474侵袭转移能力的影响

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第三军医大学学报 2014年第21期36卷 2187-2190页

作者：李海玉宋方洲卜友泉易发平朱慧芳汪长东刘革力武向梅重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院生理学教研室重庆400016

目的建立过表达Bmi-1的乳腺癌稳定细胞株,检测过表达Bmi-1对该肿瘤细胞株侵袭转移能力的影响,探讨Bmi-1与乳腺癌转移的相关性。方法根据GenBank中人源Bmi-1的mRNA序列,设计引物,构建Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,将其转染乳腺癌细胞株B... 详细信息

目的建立过表达Bmi-1的乳腺癌稳定细胞株,检测过表达Bmi-1对该肿瘤细胞株侵袭转移能力的影响,探讨Bmi-1与乳腺癌转移的相关性。方法根据GenBank中人源Bmi-1的mRNA序列,设计引物,构建Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,将其转染乳腺癌细胞株BT474,G418筛选建立过表达Bmi-1的稳定细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot检测Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平,Matrigel和Transwell侵袭小室模型检测转染和未转染BT474细胞体外侵袭和转移能力的变化,荧光定量PCR和Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的变化。结果成功构建人源Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,转染BT474细胞后,获得稳定转染细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,与空载体组相比,实验组Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。Bmi-1过表达后,迁移能力明显增强、穿膜细胞数明显增多,MMP-2、MM-9 mRNA和蛋白表达水平显著增强(P<0.05)。结论过表达Bmi-1稳定细胞株构建成功,Bmi-1表达上调可显著提高乳腺癌细胞的体外侵袭转移能力。

关键词：乳腺癌 Bmi-1 BT474 过表达侵袭转移

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shRNA抑制高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ基因的表达对胃癌细胞侵袭力的影响及机制

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重庆医科大学学报 2014年第3期39卷 310-317页

作者：张璐杨雅莹黄子洋易永芬重庆医科大学基础医学院病理学教研室、分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院老年科重庆400016

目的:初步分析高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi alpha-mannosidaseⅡ,GMⅡ)在低中不同分化人胃癌细胞系中的差异表达,以探讨GMⅡ在胃癌发生发展中的作用。方法:应用阳离子脂质体法将合成的靶向GMⅡ基因的pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ-1406质粒载体... 详细信息

目的:初步分析高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi alpha-mannosidaseⅡ,GMⅡ)在低中不同分化人胃癌细胞系中的差异表达,以探讨GMⅡ在胃癌发生发展中的作用。方法:应用阳离子脂质体法将合成的靶向GMⅡ基因的pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ-1406质粒载体,分别转染至低分化胃癌细胞MGC-803和中分化胃癌细胞SGC-7901中,然后荧光倒置显微镜观察并计算转染率,最后经过G418筛选出稳定转染的细胞株。应用RT-PCR和Western blot检测转染后GMⅡ和E-cadherin、α-catenin的mRNA及蛋白表达变化情况,同时利用细胞划痕实验和Transwell体外侵袭实验来测定GMⅡ被沉默后两株细胞侵袭能力的变化。结果:GMⅡ短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染胃癌MGC-803和SGC-7901细胞后GMⅡ的mRNA和蛋白表达明显抑制,而E-cadherin和α-catenin的2种因子检测结果明显升高(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,转染重组质粒pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ-1406组(GMⅡshRNA组)与对照组(空白对照组,阴性对照组)相比,GMⅡ被沉默后的胃癌细胞的侵袭能力降低(P<0.05);Transwell体外侵袭实验中GMⅡshRNA组胃癌细胞较空白对照组、阴性对照组细胞侵袭能力都明显降低,18 h穿过小室的细胞数分别为:(65±5)、(197±6)、(186±5),(72±4)、(178±4)、(184±5)个与对照组相比差别具有统计学意义(MGC-803:P=0.000,SGC-7901:P=0.000)。结论 :GMⅡ基因沉默后的胃癌细胞的侵袭能力下降,可能与上调E-cadherin、α-catenin的表达有关。

关键词：高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ 短发卡RNA 胃癌侵袭

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表达HBx的肝前体细胞的小鼠肝内移植模型的构建

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第三军医大学学报 2014年第24期36卷 2451-2454页

作者：钟沁张超何雪梅胡代曦张锡峰黄佳祎冯涛重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆3400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物研究中心重庆3400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆3400016

目的构建表达乙肝病毒X基因(HBx)的肝前体细胞,并经小鼠门静脉注射建立肝内移植模型,为进一步研究HBx对肝前体细胞的作用和影响及其在原发性肝癌发病机制中的作用奠定了基础。方法分别将表达HBx基因的重组腺病毒Ad-HBx-GFP和空载体Ad-GF... 详细信息

目的构建表达乙肝病毒X基因(HBx)的肝前体细胞,并经小鼠门静脉注射建立肝内移植模型,为进一步研究HBx对肝前体细胞的作用和影响及其在原发性肝癌发病机制中的作用奠定了基础。方法分别将表达HBx基因的重组腺病毒Ad-HBx-GFP和空载体Ad-GFP转染小鼠肝前体细胞,再经小鼠门静脉注射后3、7、14 d取血清和肝组织,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)变化情况,观察绿色荧光蛋白表达情况,免疫组织化学法观察HBx阳性染色,并取表达高峰在第7天的肝组织,进行Western blot法和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法分别检测HBx的蛋白及mRNA表达。结果成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,绿色荧光蛋白表达量、免疫组化阳性细胞数量及血清ALT均在注射后第7天达到高峰,RT-PCR及Western blot均检测到第7天14-19/Ad-HBx-GFP组小鼠肝组织目的基因及蛋白的特异性表达,与14-19/Ad-GFP组及生理盐水注射组相比结果具有统计学差异。结论成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,操作可靠,重复性好,效果稳定,不仅对探讨原发性肝癌的发生机制奠定了基础,也为肿瘤动物模型的构建提供了新的思路。

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞绿色荧光蛋白门静脉小鼠模型

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RNAi干扰Shp2基因对K562细胞增殖的抑制效应

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中国细胞生物学学报 2014年第1期36卷 75-80页

作者：王灿蔚陶崑齐杰玉邓一平重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆40016 重庆医科大学实验中心重庆40016

通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因,构建重组质粒,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化... 详细信息

通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因,构建重组质粒,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化及细胞凋亡率,探索该基因的沉默表达对K562细胞的抑制作用。结果表明,该实验成功构建出能明显下调Shp2基因及其蛋白表达的重组质粒,转染K562细胞后,其bcr/abl融合基因及融合蛋白水平均明显降低、K562细胞增殖活力被抑制(P<0.05)、细胞凋亡水平上升(P<0.05)。与对照组相比,其差异具有统计学意义。提示,重组质粒可显著降低bcr/abl基因及蛋白的表达,抑制K562细胞的生物学效应,表明在细胞水平沉默Shp2有可能成为治疗慢性粒细胞白血病的有效靶点。

关键词：慢性粒细胞白血病(CML) bcr abl Shp2 K562细胞

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