检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2013年第2期29卷 146-149页

作者：芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,经稻瘟菌素(blasticidin)筛选,获得稳定表达HBx的HP14.5细胞。观察其形态变化,通过实时定量PCR(real time-PCR)及Western blot法检测其间质细胞标志物和上皮标志物在mRNA和蛋白水平的表达量,并采用划痕实验检测其细胞迁移能力的变化。结果 HP14.5细胞稳定表达HBx蛋白后细胞由多角形变为长梭形;与对照组相比,神经钙黏素(N-cadherin)、Snail、vimentin的mRNA和蛋白水平表达均升高,具有统计学差异(P<0.05)而上皮性钙黏素(E-cadherin)、细胞角蛋白18(CK18)的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05;同时其迁移能力显著升高(P<0.05)。结论 HBx能诱导肝前体细胞发生EMT,并增强其迁移能力。

关键词：乙型肝炎病毒x蛋白肝前体细胞上皮-间质转化

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姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的抑制作用

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中国生物制品学杂志 2013年第11期26卷 1610-1616页

作者：李静曹友德江进重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究姜黄素对侵袭相关因子中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)表达的调控,初步探讨姜黄素在防治乳腺癌侵袭转移中可能存在的新的作用机制。方法以高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231... 详细信息

目的研究姜黄素对侵袭相关因子中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)表达的调控,初步探讨姜黄素在防治乳腺癌侵袭转移中可能存在的新的作用机制。方法以高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,采用不同剂量姜黄素处理,并使用核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)特异性抑制剂Bay-117082(20μmol/L)对比观察。MTT法检测5、10、15、20、25、30、35、40、50μmol/L姜黄素作用24、48、72 h对细胞的毒性作用;Transwell小室侵袭试验法检测5、10、15μmol/L姜黄素对细胞的侵袭能力,黏附试验法检测对细胞的黏附能力;Western blot法检测5、10、15μmol/L姜黄素、20μmol/L Bay-117082及15μmol/L姜黄素+20μmol/L Bay-117082对细胞中核转录因子κB抑制剂α(inhibitorαofκB,IκBα)磷酸化的IκBα(phosphorylated-IκBα,p-IκBα)及NGAL蛋白表达水平的影响,RT-PCR法检测对细胞中NGAL基因mRNA转录水平的影响。结果姜黄素浓度>15μmol/L,作用时间>24 h时,对细胞的生长抑制呈时间和剂量依赖性(P<0.001),当姜黄素浓度≤15μmol/L,作用时间为24 h时,对细胞无明显毒性作用,细胞存活率>90%;随着姜黄素浓度的增加,细胞侵袭能力和黏附能力逐渐降低,以15μmol/L姜黄素作用效果最明显(P<0.05);姜黄素对p-IκBα、NGAL蛋白表达的抑制作用与NF-κB特异性抑制剂Bay-117082相似,且呈剂量依赖性(P<0.05),而对IκBα蛋白的表达无明显影响;姜黄素可明显抑制NGAL基因mRNA转录水平,其抑制作用呈剂量依赖性(P<0.05),且Bay-117082抑制NGAL基因mRNA转录水平的作用与15μmol/L姜黄素相似。结论姜黄素可通过抑制NF-κB信号通路的活化及此信号通路靶基因NGAL的表达降低乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭性。

关键词：姜黄素脂质运载蛋白乳腺癌核转录因子-κB 侵袭

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稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第3期29卷 256-260页

作者：芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰胡斌冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学细胞生物学遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组... 详细信息

目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组。MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达。结果 RT-PCR和Westernblot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P<0.05);G1细胞比例明显减少(P<0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P<0.05);cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P<0.05);GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P>0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖。

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞细胞增殖 wnt β-catenin信号途径

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乳腺癌B7-H4的表达与FOXP3＋Treg细胞浸润及淋巴结转移的相关性研究

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重庆医科大学学报 2013年第11期38卷 1330-1334页

作者：黄文炼徐曼陈瑜王婷婷耿卫朴张燕重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:研究B7同源体4(B7 homolog 4,B7-H4)在人乳腺癌组织的表达及其与肿瘤内FOXP3+调节性T细胞(Treg)浸润数量和淋巴结转移的相关性。方法:应用SP免疫组织化学法检测B7-H4蛋白在16例正常乳腺组织和79例乳腺癌组织的表达;间接免疫荧光双... 详细信息

目的:研究B7同源体4(B7 homolog 4,B7-H4)在人乳腺癌组织的表达及其与肿瘤内FOXP3+调节性T细胞(Treg)浸润数量和淋巴结转移的相关性。方法:应用SP免疫组织化学法检测B7-H4蛋白在16例正常乳腺组织和79例乳腺癌组织的表达;间接免疫荧光双标染色法观察64例浸润性乳腺癌组织中CD3+T细胞和FOXP3+Treg的浸润情况;统计学分析B7-H4的表达与癌间质浸润的FOXP3+Treg数量和淋巴结转移的相关性。结果 :B7-H4在正常乳腺组织、导管内癌和浸润性乳腺癌的阳性表达率分别为6.3%、40.0%和78.1%,其在浸润性乳腺癌中的表达明显高于正常乳腺组织和导管内癌组(P=0.000,P=0.009),但在正常乳腺组织和导管内癌间未见明显差异(P=0.037);B7-H4的表达与乳腺癌间质浸润的FOXP3+Treg数量正相关(P=0.368,P=0.003),而与浸润的CD3+T细胞数量负相关(r s=-0.316,P=0.011);但B7-H4的表达与乳腺癌的淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:B7-H4在乳腺癌异常高表达且与肿瘤局部免疫抑制有关,但与淋巴结转移无明显相关性。

关键词： B7同源体4 FOXP3fiN节性T细胞淋巴结转移乳腺癌

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Wnt/β-catenin信号途径抑制Raw264.7分化

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基础医学与临床 2013年第9期33卷 1155-1159页

作者：李红丽芦永良申利红冯涛黄佳祎重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组)。分别给... 详细信息

目的了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组)。分别给予上述4组处理因素后常规细胞培养3、6和9 d提取细胞总RNA,荧光定量real-time(RT-PCR)检测核因子受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)及金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,再于同样处理因素培养6 d通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察Raw264.7的分化情况;Western blot检测TRAP、Cathepsin K蛋白的表达。结果 RT-PCR检测Ad-β-catenin组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表达;TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导Raw264.7成多核细胞,空白组和Ad-GFP组有个别多核细胞,Ad-β-catenin组为单核细胞;Westernblot检测显示Ad-β-catenin组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号途径能抑制RAW264.7分化成熟为破骨细胞。

关键词： Wnt β-catenin Raw264 7 RANKL TRAP

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刚地弓形虫培养上清对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的作用

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激光杂志 2013年第1期34卷 98-99,101页

作者：黄开顺黄天利葛璞叶彬重庆医科大学实验教学中心重庆400016 重庆医科大学附一院老年科重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理教研室重庆400016 重庆医科大学病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:研究刚地弓形虫RH株培养上清对体外培养的肝癌细胞HepG2增值的影响,并探讨其可能的影响机制。方法:取对数生长期的HepG2细胞,分别接种于96孔细胞培养板及50mL培养瓶中,加入200μL不同数量(3×107/mL、6×107/mL、12×1... 详细信息

目的:研究刚地弓形虫RH株培养上清对体外培养的肝癌细胞HepG2增值的影响,并探讨其可能的影响机制。方法:取对数生长期的HepG2细胞,分别接种于96孔细胞培养板及50mL培养瓶中,加入200μL不同数量(3×107/mL、6×107/mL、12×107/mL)弓形虫RH株速殖子培养上清孵育24、48、36、72h后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测其对HepG2细胞增殖抑制作用;不同浓度弓形虫培养上清作用HepG2细胞48 h后,DAPI染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度(〔Ca2+〕i),Western-blot检测凋亡HepG2细胞内Caspase-3的表达。结果弓形虫培养上清能抑制HepG2细胞株增殖和诱导其凋亡,且呈时间剂量依赖性,各实验组与对照组比较有统计学意义(P<0.05);HepG2细胞凋亡率和〔Ca2+〕i随浓度增加逐渐增加,12×107/mL时凋亡率和〔Ca2+〕i分别达到41.46%、128.4(荧光计数单位);Caspase-3的表达随上清浓度增加表达增强。结论:刚地弓形虫培养上清能够抑制肝癌HepG2细胞增殖,其诱导HepG2细胞凋亡可能与细胞内钙离子浓度上调和Caspase-3的表达增强相关。

关键词：刚地弓形虫肝癌细胞HepG2 细胞凋亡细胞内钙离子浓度半胱氨酸蛋白酶-3

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PARG基因沉默对大肠癌CT26细胞移植瘤生长与转移的影响

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复旦学报（医学版） 2012年第4期39卷 348-352,359页

作者：盛永涛王娅兰杨怡王洁琼重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨聚腺苷二磷酸核糖水解酶[poly-(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]基因沉默经AKT途径对大肠癌细胞肝转移的影响及其可能机制。方法用未转染的CT26细胞、慢病毒空载体转染的CT26细胞和PARG-shRNA慢病毒载体转染的CT26细胞接种至BA... 详细信息

目的探讨聚腺苷二磷酸核糖水解酶[poly-(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]基因沉默经AKT途径对大肠癌细胞肝转移的影响及其可能机制。方法用未转染的CT26细胞、慢病毒空载体转染的CT26细胞和PARG-shRNA慢病毒载体转染的CT26细胞接种至BALB/c小鼠脾包膜下,建立相应的肝转移模型,比较各组脾脏移植瘤及肝脏转移瘤结节的差异。进一步用Western blot法检测各组脾脏移植瘤PARG、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1[poly-(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,即AKT)、P-AKT473、核转录因子-κB p65(nuclear factor-kappaB p65,NF-κB p65)、血管内皮细胞生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF,即FGF-2)的表达。结果与对照组相比,PARG沉默组脾脏移植瘤体积较小(P<0.05),肝转移瘤结节数量减少(P<0.05);脾脏移植瘤的PARG、PARP-1、NF-κB p65、VEGF、FGF-2蛋白表达显著减弱(P均<0.05),P-AKT473的表达明显增强(P<0.05)。结论 CT26细胞系的PARG表达抑制后,可以抑制大肠癌CT26细胞移植瘤的生长与转移,这可能与PARG抑制使AKT磷酸化增强,从而降低了VEGF、FGF-2等血管生成相关因子的表达有关。

关键词：聚腺苷二磷酸核糖水解酶(PARG) 蛋白激酶B(AKT)磷酸化结肠癌肝转移

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RNA干扰ART1表达对小鼠结肠癌细胞增殖的影响及其机制探讨

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肿瘤 2012年第12期32卷 949-954页

作者：徐剑侠王娅兰唐怡熊薇重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰精氨酸特异性腺苷二磷酸核糖基化转移酶1(arginine-specific adenosinediphosphate-ribosyltransferase 1,ART1)基因的表达,研究沉默ART1基因对小鼠结肠癌CT26细胞增殖的影响及可能的机制。方法:细胞免疫荧光法检测ART1水平,以证实CT26细胞中有ART1的表达。用ART1-shRNA和阴性对照shRNA(negative control-shRNA,NC-shRNA)慢病毒感染CT26细胞后,分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中ART1mRNA和ART1、RhoA、c-myc及c-fos蛋白的表达;CCK-8(cell countingkit-8)法分析各组细胞增殖情况。结果:CT26细胞中有ART1的表达。ART1-shRNA和NC-shRNA慢病毒成功感染细胞,获得稳定低表达ART1基因的CT26细胞株。与感染NC-shRNA慢病毒和未感染的CT26细胞相比,感染ART1-shRNA慢病毒的CT26细胞中ART1mRNA表达水平及ART1、RhoA、c-myc和c-fos的蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),而细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01)。结论:干扰ART1表达可抑制CT26细胞增殖,提示ART1在肿瘤生长、增殖过程中发挥重要作用,其机制可能与ART1基因沉默后RhoA及其下游因子c-myc和c-fos的表达被抑制有关。

关键词：结肠肿瘤糖基转移酶类 RNA干扰细胞增殖 Rho因子 ART1

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姜黄素对转化生长因子-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9表达及其侵袭能力的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1329-1335页

作者：磨娜曹友德蒋金李静重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究姜黄素对转化生长因子-β1(Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9,MMP-9)表达及其侵袭能力的影响,探讨姜黄素在防治TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测姜黄素对MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用。将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(无血清RPMI1640培养基/DMSO)、TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基/DMSO+10 ng/ml TGF-β1),姜黄素+TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基+5、7.5、10μmol/L姜黄素+10 ng/ml TGF-β1)。处理24 h后,采用侵袭小室试验观察细胞的侵袭能力;处理不同时间后,采用Western blot法检测细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2以及p-p38的表达,明胶酶谱法检测各组细胞上清液中MMP-9的活性变化;以ERK特异性抑制剂PD98059、p38特异性抑制剂SB202580、姜黄素和/或TGF-β1处理细胞48 h,采用Western blot和明胶酶谱法检测MMP-9的表达。结果低浓度姜黄素(≤10μmol/L)对MDA-MB-231细胞无明显的细胞毒性作用;姜黄素呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量(P<0.001);姜黄素可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2及p-p38蛋白的表达,且呈浓度、时间依赖性(P<0.05);姜黄素随浓度的增加,对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9活性的抑制作用明显增强(P<0.05);PD98059抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素相似,而SB202580对MMP-9无明显影响。结论姜黄素可能通过TGF-β/Smad、TGF-β/ERK信号通路下调TGF-β1诱导的MMP-9的表达及其活性,从而抑制肿瘤的侵袭能力。

关键词：姜黄素乳腺癌转化生长因子-β1 基质金属蛋白酶-9 绝裂原活化的蛋白激酶肿瘤侵润

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靶向SATB1基因的短发夹RNA诱导肺癌A549细胞凋亡

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肿瘤 2012年第7期32卷 501-506页

作者：蒋金曹友德磨娜莫显刚重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 贵阳医学院附属医院综合病房贵阳550004

目的:探讨靶向SATB1(special AT-rich sequence-binding protein-1)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肺癌A549细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:构建靶向SATB1基因的shRNA重组质粒SATB1-shRNA,采用脂质体法将其转染至A549细胞;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测A549细胞中SATB1、Bcl-2、BaxmRNA和SATB1、Bcl-2、Bax、caspase3蛋白的表达水平;FCM检测A549细胞的凋亡率。结果:成功构建了SATB1-shRNA重组质粒;SATB1-shRNA转染A549细胞后,SATB1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达下调,Bax mRNA和Bax、caspase3蛋白表达上调(P<0.05)。SATB1-shRNA转染组细胞凋亡率[(14.18±1.59)%]较对照组[(1.84±0.57)%]明显增加(P<0.01)。结论:SATB1-shRNA可显著下调肺癌A549细胞中SATB1基因的表达水平并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2基因表达所引起的级联效应有关。

关键词：肺肿瘤 RNA,小分子干扰细胞凋亡基因,SATB1

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