检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2012年第7期25卷 829-833页

作者：李钒杨雅莹易永芬重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响。方法构建GMⅡ基因真核过表达质粒EX-E2372-M03,通过脂质体Lipofectamine 2000转染BGC-823细胞,用400 mg/LG418筛选稳定转染的细胞... 详细信息

目的探讨过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响。方法构建GMⅡ基因真核过表达质粒EX-E2372-M03,通过脂质体Lipofectamine 2000转染BGC-823细胞,用400 mg/LG418筛选稳定转染的细胞。采用RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞中GMⅡ基因mRNA的转录水平以及蛋白的表达水平,Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术(Annexin V/PI双染)检测过表达GMⅡ后细胞的凋亡情况。结果转染重组质粒EX-E2372-M03后,BGC-823细胞GMⅡ基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平明显增加(P<0.05);细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。结论过表达GMⅡ可能通过抑制胃癌细胞的凋亡,进而促进胃癌的发生发展。

关键词：高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ 胃癌细胞凋亡

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PARG基因沉默对肿瘤局部B220^＋DEC205^＋DC的影响

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重庆医科大学学报 2012年第4期37卷 293-297页

作者：王洁琼王娅兰杨怡盛永涛重庆医科大学基础医学院病理学教研室、分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:探讨聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[Poly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]基因沉默对肿瘤局部B220+DEC205+DC增殖分化的影响及其在大肠癌转移中的作用。方法:以PARG-shRNA慢病毒载体转染CT26细胞为实验组,未转染CT26细胞和空载体CT26... 详细信息

目的:探讨聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[Poly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]基因沉默对肿瘤局部B220+DEC205+DC增殖分化的影响及其在大肠癌转移中的作用。方法:以PARG-shRNA慢病毒载体转染CT26细胞为实验组,未转染CT26细胞和空载体CT26细胞为对照组,分别在小鼠脾包膜下接种形成肝转移模型;Western blot法检测脾脏移植瘤中PARG、PARP、NF-κB蛋白的表达;免疫荧光双标法检测脾脏中B220+DEC205+DC的表达;ELISA法检测各组小鼠血清中IL-10、TGF-β的表达。结果:PARG基因沉默后,脾脏移植瘤体积缩小,肝脏转移癌结节数目减少,差异有统计学意义(P<0.05);脾脏移植瘤中PARG、PARP、NF-κB蛋白的表达量明显较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05);脾脏组织中的B220+DEC205+DC较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);血清中IL-10、TGF-β的表达较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PARG基因沉默可抑制小鼠结肠癌CT26细胞肝转移,可能与PARG沉默后下调PARP,并下调NF-κB的活性,从而影响NF-κB依赖性因子IL-10、TGF-β的表达,进而影响B220+DEC205+DC的增殖分化有关。

关键词：聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶 B220+DEC205+DC 大肠癌免疫机能

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姜黄素诱导肺癌A549细胞凋亡

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激光杂志 2012年第4期33卷 58-60页

作者：蒋金曹友德磨娜李静莫显刚重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 贵阳医学院附属医院综合病房贵阳550004

目的:研究姜黄素对A549细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法:姜黄素处理A549细胞后,MTT法于不同时间点检测A549细胞的增殖情况;姜黄素处理A549细胞48h后,流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)检测A549细胞的凋亡率;30μmol/L姜... 详细信息

目的:研究姜黄素对A549细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法:姜黄素处理A549细胞后,MTT法于不同时间点检测A549细胞的增殖情况;姜黄素处理A549细胞48h后,流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)检测A549细胞的凋亡率;30μmol/L姜黄素处理A549细胞24h、48h、72h后,RT-PCR、Western-Blot检测A549细胞中P53、Bcl2、Bax和Caspase-3基因的表达水平。结果:姜黄素对肺癌A549细胞增殖的抑制作用具有显著的浓度-时间依赖关系,30μmol/L姜黄素可诱导A549细胞凋亡。30μmol/L姜黄素作用A549细胞24h即可引起A549细胞中P53、Bax和Caspase-3表达水平的上调,48h后可引起Bcl2表达水平的下调,诱导A549细胞凋亡。结论:30μmol/L姜黄素可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与促进P53、Bax和Caspase-3基因的表达,抑制Bcl2基因的表达有关。

关键词：姜黄素细胞凋亡 P53

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姜黄素通过P53/P21/PCNA/eIF4E信号通路抑制A549细胞增殖

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第三军医大学学报 2012年第1期34卷 49-53页

作者：蒋金曹友德磨娜李静莫显刚重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心 400016 贵阳医学院附属医院综合病房 550004

目的研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、MTT法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72 h后,FCM检测细胞周期;RT... 详细信息

目的研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、MTT法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72 h后,FCM检测细胞周期;RT-PCR、Western blot检测P53、P21、PCNA及eIF4E mRNA和蛋白的表达水平。结果 20μmol/L姜黄素可引起A549细胞S期阻滞,抑制细胞增殖,减少细胞的克隆形成数。20μmol/L姜黄素作用A54924 h后P53、P21 mRNA和蛋白表达上调,48 h或72 h后变得尤明显。此外,20μmol/L姜黄素处理A549细胞48 h后可引起PCNA、eIF4E mRNA和蛋白表达水平下调,72 h后尤明显。结论姜黄素可抑制A549的克隆形成数和细胞增殖,其机制可能与姜黄素促进P53和P21基因表达,抑制PCNA和eIF4E基因表达有关。

关键词：姜黄素细胞周期细胞增殖 P53

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人子宫颈癌异常表达程序性死亡配体-1并促CD4＋T和CD8＋T细胞凋亡

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重庆医科大学学报 2012年第10期37卷 859-863页

作者：陈瑜徐曼肖琳耿卫朴王婷婷黄文炼重庆医科大学基础医学院病理学教研室、分子与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016

目的:探讨程序性死亡配体-1(Programmed death ligand-1,PD-L1)在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内CD4+T和CD8+T细胞浸润的相关性,体外实验观察重组人PD-L1蛋白对宫颈癌患者外周血T细胞凋亡的影响。方法:采用免疫组化SP法检测PD-L1在10例... 详细信息

目的:探讨程序性死亡配体-1(Programmed death ligand-1,PD-L1)在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内CD4+T和CD8+T细胞浸润的相关性,体外实验观察重组人PD-L1蛋白对宫颈癌患者外周血T细胞凋亡的影响。方法:采用免疫组化SP法检测PD-L1在10例正常人宫颈组织和67例宫颈癌组织中的表达以及死亡受体-1(Programmed death receptor-1,PD-1)在宫颈癌内浸润淋巴细胞的表达;TUNEL法检测肿瘤内浸润的淋巴细胞凋亡;免疫荧光分析宫颈癌内浸润的CD4+T和CD8+T淋巴细胞数量;流式细胞术分析PD-L1促进宫颈癌患者外周血活化CD4+T和CD8+T细胞凋亡情况。结果:正常子宫颈上皮不表达PD-L1;宫颈癌PD-L1的表达率为70%(47/67)。部分宫颈癌内浸润的淋巴细胞表达PD-1,且淋巴细胞存在凋亡现象。PD-L1阳性宫颈癌肿瘤内浸润的CD8+T细胞数量明显减少(P<0.05)。体外实验发现PD-L1与健康人或宫颈癌患者外周血活化T细胞混合培养48 h后,T细胞凋亡率明显高于空白组,2组平均凋亡率分别为(32.8±1.4)%、(38.3±1.5)%(P<0.05)和(27.7±1.3)%、(30.9±1.9)%(P<0.05);抗PD-1抗体使PD-L1诱导的T细胞凋亡率下降,分别为(29.8±1.6)%和(31.6±1.4)%(P>0.05)。PD-L1对人外周血活化CD4+T和CD8+T细胞均有促凋亡作用。结论:人子宫颈癌异常表达PD-L1与肿瘤内浸润的淋巴细胞凋亡及CD8+T细胞数量减少有关。PD-L1经PD-1促进活化的CD4+T和CD8+T细胞凋亡。

关键词：子宫颈癌程序性死亡配体-1 程序生死亡受体-1 T淋巴细胞凋亡

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姜黄素通过P53/P121/PCNA/eIF4E信号通路抑制A549细胞增殖

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第三军医大学学报 2012年第1期34卷 49-53页

作者：蒋金曹友德磨娜李静莫显刚重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 贵阳医学院附属医院综合病房贵阳550004

目的:研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法:不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、M1Tr法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72h后,FCM检测细胞周期;... 详细信息

目的:研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法:不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、M1Tr法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72h后,FCM检测细胞周期;liT-PCR、Westernblot检测P53、P21、PCNA及elF4EmRNA和蛋白的表达水平。结果:20μmol/L姜黄素可引起A549细胞s期阻滞,抑制细胞增殖,减少细胞的克隆形成数。20Ixmol/L姜黄素作用A54924h后P53、P21mRNA和蛋白表达上调,48h或72h后变得尤明显。此外,20p~mol/L姜黄素处理A549细胞48h后可引起PCNA、elF4EmRNA和蛋白表达水平下调,72h后尤明显。结论:姜黄素可抑制A549的克隆形成数和细胞增殖,其机制可能与姜黄素促进P53和P21基因表达,抑制PCNA和elF4E基因表达有关。

关键词：肺肿瘤/病理学基因 p53 姜黄素信号处理计算机辅助遗传学技术增殖细胞核抗原真核细胞起始因子4E 肿瘤细胞培养的

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siRNA下调EIF4E基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和周期的影响

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肿瘤 2011年第3期31卷 197-202页

作者：孙阳阳曹友德叶维霞磨娜重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:应用小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)乳腺癌MDA-MB-231细胞中真核细胞翻译起始因子4E (eukaryotic translation initiation factor 4E, EIF 4E )基因的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖和生长周期的影响。方法:构建针对EIF 4E 基因的siRNA表达质粒,采用脂质体法将表达质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞;分别采用RT-PCR、Western 印迹法和免疫细胞化学法检测转染EIF4E siRNA后, 对MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白的表达水平的影响;MTT法、平板克隆形成实验和FCM检测MDA-MB-231细胞增殖活性、克隆形成率及细胞周期。结果:成功构建EIF4E siRNA表达质粒。RT-PCR、Western 印迹法和免疫细胞化学法检测结果显示,MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白表达均明显下降(P <0.05)。转染EIF4E siRNA组细胞生长缓慢,集落形成数明显减少,与空白对照组和转染空载体组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示,EIF4E siRNA转染组G1期细胞所占百分比为(71.30±0.47)%, 较空白对照组的( 53.10±0.43)%明显增加,而S期细胞所占百分比为(12.53±0.13)%,较空白对照组的(26.47±0.38)%明显减少(P<0.05)。结论:EIF4E siRNA可显著下调EIF4E基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达水平,在一定程度上抑制乳腺癌细胞的增殖,有可能成为临床治疗乳腺癌的靶点之一。

关键词：乳腺肿瘤 RNA,小分子干扰细胞凋亡真核细胞翻译起始因子细胞,MDA-MB-231

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shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞VEGF-C表达的影响

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中国肿瘤临床 2011年第4期38卷 200-203页

作者：孙阳阳曹友德刘浩叶维霞重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆市400016

目的:探讨shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C基因表达的影响。方法:制备针对EIF4E的三种小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),分别是siRNA1、siRNA2、siRNA3,筛选沉默最有效的siRNA,据此设计短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)寡核苷酸链,与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接,构建pGPU6/GFP/Neo-EIF4E重组质粒,经酶切鉴定后利用脂质体Lipofectamine^(TM) 2000将鉴定正确的重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学法检测EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达情况。结果:RT-PCR结果显示siRNA1、siRNA2、siRNA3对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E基因表达均有抑制作用,与空白对照组、阴性对照组、脂质体组比较差异显著(P<0.05),尤以siRNA3抑制率最高达71.2%。利用针对siRNA3合成的shRNA与质粒载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接构建的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E,酶切鉴定表明构建成功,并稳定转染MDA-MB-231细胞,平均转染效率为80%。RT-PCR、Western blot结果显示,稳定转染重组质粒后MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05),抑制率分别为79.00%、67.90%(EIF4E)和77.01%、62.94%(VEGF-C)。免疫细胞化学染色法显示重组质粒组EIF4E及VEGF-C蛋白表达均受到明显抑制(P<0.05)。结论:靶向EIF4E的shRNA不仅能有效沉默乳腺癌细胞MDA-MB-231中EIF4E的表达,且能抑制VEGF-C的表达,提示EIF4E可能参与诱导乳腺癌细胞VEGF-C的表达,而EIF4E-shRNA可能成为抑制乳腺癌淋巴管生成的一种新的有效手段。

关键词： MDA-MB-231细胞小干扰RNA EIF4E基因 pGPU6/GFP/Neo

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shRNA抑制p115表达对胃癌体外血管形成的影响

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第三军医大学学报 2011年第16期33卷 1676-1681页

作者：文雪易永芬邓玮屈玉玲闫田静重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi-vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制。方法采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株。利用W... 详细信息

目的初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi-vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制。方法采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株。利用Western blot、RT-PCR和细胞免疫荧光方法检测转染后的p115抑制效应及其对MIF、p-Akt、VEGF-A的调控情况;采用细胞活性检测实验、Transwell体外侵袭实验和血管形成实验方法分别检测转染p115 shRNA的胃癌BGC-823细胞对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖,迁移和血管形成的影响。结果 p115 shRNA-1318转染后胃癌BGC-823细胞p115、MIF、p-Akt和VEGF-A的蛋白及mRNA表达明显抑制(P<0.01);细胞免疫荧光:与对照组相比,p115 shRNA组p115、MIF及VEGF-A的色泽暗红且抑制率分别为63%、65%、68%;细胞活性检测:与对照组相比,p115 shRNA组HUVECs增殖能力明显降低(P<0.05);Transwell侵袭实验:p115 shRNA组HUVECs较空白对照组,阴性对照组(shNC)细胞侵袭能力明显降低,24 h穿过Transwell的细胞数分别为:(39±5)、(174±4)、(179±4),与对照组相比差别具有统计学意义(P<0.05);血管形成实验:p115 shRNA组HUVECs不能在Matrigel胶上形成网状结构,空白对照组、shNC组成管指数分别为:(1 289±37)、(1 329±33),p115 shRNA组成管指数为:(422±41),与对照组相比差别具有统计学意义(P<0.05)。结论 p115基因沉默下调胃癌的VEGF-A表达及抑制血管生成;其分子机制可能与MIF通过PI3K/Akt信号通路途径调节胃癌血管形成有关。

关键词：高尔基体囊泡转运蛋白p115 巨噬细胞移动抑制因子人脐静脉血管内皮细胞血管生成

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PARG抑制对小鼠结肠癌CT26细胞VEGF-C蛋白表达调控的初步研究

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第三军医大学学报 2011年第14期33卷 1451-1454页

作者：吴伟强王娅兰颜佳欣潘娟重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的初步探讨多聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[poly-(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]抑制对小鼠结肠癌CT26细胞VEGF-C蛋白表达影响。方法分为实验组(GLTN处理)与对照组(GLTN未处理),采用Western blot法检测2组小鼠结肠癌CT26细胞的PARG、PARP-1、NF-κB及VEGF-C的蛋白表达变化;RT-PCR分析实验组与对照组的VEGF-C mRNA水平变化;ELISA法检测2组小鼠结肠癌CT26细胞上清液VEGF-C蛋白表达变化。结果 PARG抑制后小鼠结肠癌CT26细胞表达的PARG和NF-κB蛋白较对照组下降(P<0.01),PARP-1和VEGF-C蛋白较对照组降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示,实验组CT26细胞株VEGF-C mRNA表达[相对灰度值为(0.39±0.08)]较对照组[相对灰度值为(0.63±0.04)]显著下降(P<0.01)。实验组小鼠结肠癌CT26细胞分泌的VEGF-C蛋白量[(95.86±5.43)pg/ml]较对照组[(1 99.32±0.75)pg/ml]明显降低(P<0.05)。结论在小鼠结肠癌CT26细胞中,抑制PARG可下调PARP-1和NF-κB的表达,从而使VEGF-C表达下降,这可能在抑制肿瘤淋巴管形成中起重要作用。

关键词：多聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶多聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶 NF-κB 血管内皮生长因子C 肿瘤淋巴管形成

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