目的:S100钙结合蛋白A9(S100A9)激活核因子κB(NF-κB)促进小胶质细胞toll样受体7(TLR7)的表达和炎症因子释放的作用及其机制研究。方法:CCK-8实验检测BV2小胶质细胞的增殖率;转录组测序并结合GO分析、KEGG富集分析和STRING数据库对差异基因(DEGs)进行比对并从差异表达基因中筛选出目标基因;Real time RT-PCR验证TLR7的表达;免疫荧光染色检测CD68、CD206的表达;Western Blot检测CD68、CD206、TLR7、p65、p-p65的表达;ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:中等浓度的S100A9对小胶质细胞无增殖抑制效应;实验组CD68蛋白的表达水平较对照组明显增加,而CD206蛋白的表达水平明显下降,提示S100A9促进BV2小胶质细胞向促炎型激活;Toll样受体4(TLR4)的抑制剂TAK-242明显抑制S100A9刺激BV2小胶质细胞后TNF-α和IL-6的表达水平;TLR4/NF-κB通路激活促进TLR7蛋白表达。结论:中等浓度的S100A9可以促进小胶质细胞向促炎型极化,通过激活TLR4/NF-κB通路促进TLR7表达和包括TNF-α和IL-6在内的多种炎症因子的释放,S100A9具有明显的促炎作用。
目的:研究沉默海马含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域的蛋白-1(LINGO-1)对APP/PS1小鼠空间学习和记忆能力以及海马有髓神经纤维的影响。方法:随机选取18只雄性APP/PS1小鼠,随机分为对照组和rAAV-LINGO-1-shRNA组,通过海马立体定位注射表达LINGO-1-shRNA的重组腺相关病毒rAAV-LINGO-1-shRNA,运用Morris水迷宫方法测试小鼠的空间学习和记忆能力;运用免疫荧光染色和real time RT-PCR分析小鼠海马内LINGO-1表达水平;运用real time RT-PCR分析小鼠海马内LINGO-1下游分子RhoA和ROCK的表达水平;运用无偏体视学方法结合透射电子显微镜技术对小鼠海马(CA1~3和齿状回)的体积,海马内有髓神经纤维的长度、髓鞘体积及其损伤情况进行定量研究。结果:与对照组小鼠相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组小鼠的逃避潜伏期显著性缩短,穿台次数显著增多,而目标象限游泳时间及目标象限游泳路程比无显著性改变;与对照组相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组海马内LINGO-1显著下调,同时其下游RhoA和ROCK的表达水平降低;对照组和rAAV-LINGO-1-shRNA组海马体积无显著性差异;与对照组相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组海马内有髓神经纤维的长度和正常髓鞘的体积显著性增加,受损的有髓神经纤维占比和受损的髓鞘占比均显著降低。结论:沉默海马LINGO-1能够有效改善APP/PS1小鼠海马依赖的空间学习和记忆能力,抑制RhoA/ROCK的表达,减轻海马内有髓神经纤维及其髓鞘的损伤,这将为阿尔茨海默病的发病及治疗提供新的方向。
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