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重庆医科大学学报 2011年第10期36卷 1186-1190页

作者：耿卫朴徐曼王渝琦徐光旭陈瑜王婷婷黄文炼赵涌重庆医科大学基础医学院病理教研室重庆医科大学分子与肿瘤研究中心重庆400016

目的：研究共刺激分子程序性死亡配体1（Programmed death ligand 1,PD-L1）、程序性死亡配体2（Programmeddeath ligand 2,PD-L2）和B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学PV-6000法检测PD-L1、PD... 详细信息

目的：研究共刺激分子程序性死亡配体1（Programmed death ligand 1,PD-L1）、程序性死亡配体2（Programmeddeath ligand 2,PD-L2）和B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学PV-6000法检测PD-L1、PD-L2和B7-H4在10例正常人宫颈组织、10例高级别CIN（CINⅡ~Ⅲ级）和67例子宫颈癌中的表达,并分析3种共刺激分子的表达与子宫颈患者临床病理特征的相关性。结果：正常人宫颈组织上皮不表达PD-L1和B7-H4,而基底层细胞微弱表达PD-L2;CINⅡ~Ⅲ的瘤变宫颈上皮微弱表达PD-L1、PD-L2和B7-H4;子宫颈癌细胞表达PD-L1、PD-L2和B7-H4的阳性率分别为70%（47/67）、51%（34/67）和46%（31/67）。统计学分析显示宫颈癌细胞PD-L1的表达与癌细胞浸润深度明显相关（P〈0.01）,与年龄、组织学类型无关;PD-L2的表达与肿瘤的淋巴结转移（P〈0.05）有关;B7-H4的表达与肿瘤的淋巴结转移（P〈0.05）和局部血管内瘤栓形成（P〈0.05）相关。结论：人子宫颈癌细胞异常表达PD-L1、PD-L2和B7-H4,且与肿瘤浸润和转移密切相关。PD-L1、PD-L2和B7-H4可能成为子宫颈癌免疫治疗的潜在靶点。

关键词： PD-L1、PD-L2、B7-H4 子宫颈癌免疫组织化学

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尿毒症血液透析患者Treg/Th17功能失衡影响血管钙化因子BMP-2表达的研究

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第三军医大学学报 2011年第21期33卷 2260-2264页

作者：陈丹燕甘华沈清杜晓刚汤为学杨孟雪重庆医科大学附属第一医院肾内科重庆2400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室

目的探讨尿毒症血液透析患者Treg/Th17细胞功能是否发生失衡及其对血管钙化因子BMP-2表达的影响。方法选取66例尿毒症血液透析患者(MHD组)、30例尿毒症未并发心血管疾病且未透析患者(WHD组)和20例健康志愿者,将MHD组患者分为并发心血管... 详细信息

目的探讨尿毒症血液透析患者Treg/Th17细胞功能是否发生失衡及其对血管钙化因子BMP-2表达的影响。方法选取66例尿毒症血液透析患者(MHD组)、30例尿毒症未并发心血管疾病且未透析患者(WHD组)和20例健康志愿者,将MHD组患者分为并发心血管疾病(MHD1,n=36)和未并发心血管疾病(MHD2,n=30)。流式细胞术测单个核细胞中Treg和Th17细胞比例,实时荧光定量PCR测Foxp3和ROR-γt mRNA表达,ELISA测单个核细胞上清液中炎症因子IL-17、IL-10和血管钙化因子BMP-2水平。结果与健康者相比,尿毒症患者出现Treg/Th17细胞功能失衡和BMP-2分泌异常,主要表现为Treg和Th17细胞比例、Foxp3和ROR-γt表达、IL-17和BMP-2水平均增高(P<0.05),而IL-10水平减低(P<0.05),这一失衡亦表现在WHD与MHD组、MHD1与MHD2组间。透析者IL-17、BMP-2水平均与Treg细胞比例呈负相关(P<0.05),而与Th17细胞比例呈正相关(P<0.05),其中BMP-2与IL-17、IL-10水平分别呈正相关和负相关(P<0.05)。结论尿毒症血液透析患者Treg/Th17细胞失衡使微炎症因子分泌异常,进而加剧血管钙化,导致加速性动脉粥样硬化和心血管疾病发生。

关键词：尿毒症血液透析 Treg Th17 BMP-2

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水通道蛋白3在小鼠鼻腔中的表达

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解剖学杂志 2011年第5期34卷 596-599,629页

作者：李小松汪克建骆世芳侯良娟漆伟孙善全冉建华重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016

目的：研究水通道蛋白3（AQP3）在小鼠鼻腔中的表达。方法：应用免疫荧光和免疫印迹法研究野生型和AQP3基因敲除小鼠鼻腔嗅黏膜、呼吸道黏膜和犁鼻器中AQP3的表达特征。结果：免疫荧光结果表明，AQP3在小鼠嗅黏膜上皮层的基底细胞和支... 详细信息

目的：研究水通道蛋白3（AQP3）在小鼠鼻腔中的表达。方法：应用免疫荧光和免疫印迹法研究野生型和AQP3基因敲除小鼠鼻腔嗅黏膜、呼吸道黏膜和犁鼻器中AQP3的表达特征。结果：免疫荧光结果表明，AQP3在小鼠嗅黏膜上皮层的基底细胞和支持细胞膜上表达强烈，并在嗅黏膜固有层中Bowman腺的基底外侧膜上表达；AQP3在嗅黏膜和上呼吸道黏膜组织中基底细胞的表达相延续；AQP3表达于犁鼻器非感觉黏膜上皮中的基底细胞。嗅黏膜组织急性分离后免疫荧光结果证实，AQP3不表达于嗅神经元。免疫印迹结果显示，野生型小鼠嗅黏膜组织液中可检测到AQP3的表达，而基因敲除小鼠嗅黏膜组织液中未能检测到相应条带。结论：AQP3广泛分布于鼻腔嗅黏膜、呼吸道黏膜和犁鼻器中的非神经元细胞，可能参与嗅黏膜组织局部水、甘油平衡的调节，在嗅神经元兴奋性维持、鼻腔黏膜组织的再生过程中发挥重要作用。

关键词：水通道蛋白3 鼻腔黏膜小鼠

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外力打击兔颈动脉窦压力感受器后血液及组织中ANP的变化及意义

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重庆医科大学学报 2011年第8期36卷 929-931页

作者：李剑波朱素敏米粲重庆医科大学基础医学院法医教研室重庆400016 重庆市血液中心输血研究所重庆400015 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的:通过对外力打击兔颈动脉窦压力感受器后血液及组织中心房利钠肽(Atrial natriuretic polypeptide,ANP)变化的研究,探讨其在神经源性休克死亡中的意义。方法:采用放射免疫法检测血浆中ANP的变化,采用RT-PCR法及凝胶图像分析系统检... 详细信息

目的:通过对外力打击兔颈动脉窦压力感受器后血液及组织中心房利钠肽(Atrial natriuretic polypeptide,ANP)变化的研究,探讨其在神经源性休克死亡中的意义。方法:采用放射免疫法检测血浆中ANP的变化,采用RT-PCR法及凝胶图像分析系统检测组织中ANP mRNA基因表达水平。结果:实验死亡组血浆ANP含量比实验前升高3.37倍,有显著性差异(P<0.01);死亡组与存活组、损伤对照组分别比较,有显著性差异(P<0.01)。颈动脉窦压力感受器受外界打击后脑、心肌组织中ANP mRNA表达明显增高,尤以脑中表达增加明显。结论:ANP在神经源性休克死亡过程中起着重要作用。

关键词：颈动脉窦压力感受器心房利钠肽法医学

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慢性应激致大鼠抑郁行为涉及海马形态变化和BDNF表达降低

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基础医学与临床 2011年第5期31卷 565-569页

作者：王涵李娜文威姜蓉周岐新重庆医科大学药学院药理教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的研究慢性不可预见轻度刺激(CUMS)致大鼠抑郁模型与海马病理形态改变和脑源性神经营养因子(BDNF)表达异常的关系。方法大鼠分为对照组和模型组,应用CUMS建立大鼠抑郁模型;以开场(open-field)法、黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸法、HE染... 详细信息

目的研究慢性不可预见轻度刺激(CUMS)致大鼠抑郁模型与海马病理形态改变和脑源性神经营养因子(BDNF)表达异常的关系。方法大鼠分为对照组和模型组,应用CUMS建立大鼠抑郁模型;以开场(open-field)法、黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸法、HE染色和免疫组化法分别检测大鼠行为、皮质MDA水平和SOD活力、海马病理形态和海马BDNF表达。结果与对照大鼠相比,接受28 d CUMS大鼠开场实验得分明显降低,皮质SOD活力显著下降和MDA含量明显增高,海马神经元呈明显核固缩和BDNF表达显著降低(吸光度值803±422vs237±96,P<0.01)。结论 CUMS致大鼠明显抑郁行为,其机制可能与神经元氧化-抗氧化系统失衡,自由基生成增加,由此致海马神经元受损和BDNF表达减少有关。

关键词：抑郁症慢性不可预见轻度刺激 BDNF 海马

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hsa-mir-520真核表达载体的构建及对E-钙粘蛋白表达的影响

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第三军医大学学报 2011年第9期33卷 967-969页

作者：张潞渝孔璟李春蕾高剑叶彬武卫华刘革力重庆医科大学分子医学与肿瘤中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016

目的构建hsa-mir-520真核表达载体,并转染大肠癌细胞SW-480细胞,检测细胞中E-钙粘蛋白表达情况。方法依据miRBase数据库中hsa-mir-520序列,设计并合成寡核苷酸片段,构建hsa-mir-520表达载体和对照载体。采用脂质体转染方法分别将mir-52... 详细信息

目的构建hsa-mir-520真核表达载体,并转染大肠癌细胞SW-480细胞,检测细胞中E-钙粘蛋白表达情况。方法依据miRBase数据库中hsa-mir-520序列,设计并合成寡核苷酸片段,构建hsa-mir-520表达载体和对照载体。采用脂质体转染方法分别将mir-520表达载体、及对照质粒转染大肠癌细胞SW-480细胞株。采用酶切、测序检测载体构建;Western blot检测E-钙粘蛋白的表达。结果酶切和测序表明hsa-mir-520真核表达载体构建成功。Western blot结果显示与转染对照质粒和未转染的细胞相比,转染了hsa-mir-520重组质粒的细胞中E-cadherin蛋白的表达明显增加(P<0.01),密度扫描半定量分析显示E-cadherin蛋白的表达增加了大约40%。结论成功构建了hsa-mir-520和对照的真核表达载体,hsa-mir-520质粒转染大肠癌细胞SW-480后可增加E-钙粘蛋白的表达。

关键词： hsa-mir-520 E-钙粘蛋白 SW-480细胞

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人肺腺癌细胞系A549与正常支气管上皮细胞系HBE的比较蛋白质组学研究

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重庆医学 2011年第34期40卷 3439-3441,3444页

作者：段东李少林朱玉泉王树兵重庆医科大学第一附属医院核医学科 400016 重庆医科大学基础医学院核医学教研室 400016

目的利用蛋白质组学技术建立人肺腺癌细胞系A549与正常支气管上皮细胞系HBE的差异蛋白质表达谱,并对部分在A549细胞中表达明显上调的蛋白质点进行鉴定。方法提取A549和HBE细胞的总蛋白,进行双向凝胶电泳(2-DE),经图像分析识别差异表达... 详细信息

目的利用蛋白质组学技术建立人肺腺癌细胞系A549与正常支气管上皮细胞系HBE的差异蛋白质表达谱,并对部分在A549细胞中表达明显上调的蛋白质点进行鉴定。方法提取A549和HBE细胞的总蛋白,进行双向凝胶电泳(2-DE),经图像分析识别差异表达蛋白质点,再应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定出部份在A549细胞中表达明显上调的蛋白质。结果 (1)分析两种细胞系的2-DE图谱,发现差异表达蛋白质点共256个,仅在A549细胞中表达的蛋白质点15个,仅在HBE细胞中表达的蛋白质点21个;(2)通过肽质量指纹图谱分析鉴定出在A549细胞中表达明显上调的7种蛋白质,分别是表皮生长因子受体(EGFR)、鼠双微粒体2蛋白(MDM2)蛋白、CD44蛋白、细胞骨架蛋白细胞角蛋白8(CK8)、不均一性核糖体蛋白H(hnRNP H)、热休克蛋白60(HSP60)、磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)。结论运用蛋白质组学技术成功获得了A549细胞与HBE细胞的2-DE图谱,并鉴定出部分在A549细胞中表达明显上调的蛋白质,为进一步筛选用于人肺腺癌诊断、治疗及预后评估的分子标志物奠定了一定的基础。

关键词：肺肿瘤蛋白质组学电泳,凝胶,双向

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G蛋白偶联受体在雌激素诱导人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制

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第三军医大学学报 2011年第2期33卷 164-168页

作者：吴婷婷龙方懿贾朝莉刘智敏重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的探讨G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptor,GPER)在雌激素促进人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制。方法不同浓度(0、10-10、10-9、10-8mol/L)的17β-雌二醇(17β-Estradiol,E2)处理FRO细胞不同时间(0、12、24h),MTT法检测细胞增殖率;10-8mol/L的E2处理FRO细胞不同时间(0～24h),流式细胞术检测E2对FRO细胞周期的影响;设计合成针对GPER的小干扰RNA(GPER-siRNA)并转染FRO细胞;Western blot检测FRO细胞中Akt与ERK1/2磷酸化水平与GPER蛋白的表达。结果不同浓度(0、10-10、10-9、10-8mol/L)的E2处理FRO细胞不同时间(0、12、24h),细胞增殖率随浓度和时间的增加而增加,且10-8mol/L的E2处理24h后,细胞增殖率为(16.5±2.1)%;10-8mol/L的E2处理FRO细胞不同时间(0、12、24h),细胞周期S/G2/M期细胞的比例随时间的增加而增加;E2(10-8mol/L)处理FRO细胞不同时间(0、5、10、15、30min),ERK1/2与Akt的磷酸化水平分别在15min与10min达到最大;将GPER-siRNA转染FRO细胞48h,GPER的蛋白表达显著减少;E2作用于分别加入PD98059(30μmol/L)、LY294002(50μmol/L)以及转染GPER-siRNA的FRO细胞15min和10min,与E2处理组相比,ERK1/2和Akt的磷酸化水平降低;E2作用于分别加入PD98059、LY294002及转染GPER-siRNA的FRO细胞24h,与E2处理组相比,增殖率由(16.5±2.1)%降至(11.2±1.3)%、(9.6±1.5)%、(7.2±1.3)%(P<0.05)。结论 E2通过GPER激活ERK1/2、PI3K-Akt途径,促进FRO细胞的增殖。

关键词：雌激素甲状腺癌 GPER ERK1/2 PI3K-Akt

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超声微泡联合双特异性抗体对骨髓间充质干细胞干预心肌纤维化的实验研究

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中华超声影像学杂志 2011年第3期20卷 258-263页

作者：邓玮陈庆伟王志刚李兴升刘灏周玥李桂琼柯大智莫显刚重庆医科大学附属第二医院老年病科 400010 重庆医科大学附属第二医院消化内科 400010 重庆医科大学超声影像学研究所重庆医科大学基础医学院组胚教研室

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）在超声辐照微泡（MB）和双特异抗体（BiAb）的辅助下干预心肌纤维化的效果及可能机制。方法在MB的辅助下，将雄性小鼠MsCs与BiAb输入异丙肾性心肌纤维化雌性小鼠（MSCs＋BiAb＋MB组）。BiAb由能识别间... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）在超声辐照微泡（MB）和双特异抗体（BiAb）的辅助下干预心肌纤维化的效果及可能机制。方法在MB的辅助下，将雄性小鼠MsCs与BiAb输入异丙肾性心肌纤维化雌性小鼠（MSCs＋BiAb＋MB组）。BiAb由能识别间充质干细胞的anti—CD29和能特异性结合损伤心肌的抗肌凝蛋白轻链抗体（AMLcA）制备。另设未治疗组、单纯MSCs组、单纯BiAb组、单纯MB组、MSCs＋BiAb组和正常对照组。5周后处死小鼠，实时荧光定量PCR检测心肌Y染色体鉴别基因（SRY）的表达。天狼猩红染色对比心脏胶原纤维含量。免疫组织化学染色法观察心脏热休克蛋白-70（HSP-70）表达。结果MSCs归巢数最多的是MSCs＋BiAb＋MB组，其次为MSCs＋BiAb组，MSCs组归巢数最少。与未治疗组相比，MSCs＋BiAb＋MB组、MSCs＋BiAb组和单纯MCSs组的心肌胶原纤维含量下降（P〈0．05），HSP-70表达下调（P〈0．05）。其中，与单纯MSCs组相比，MSCs＋BiAb＋MB组的心肌胶原沉积量更低（P〈0．05）。单纯MB组、单纯BlAb组与未治疗组的胶原沉积量、HSP-70表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MB可促进骨髓间充质于细胞的归巢，联合BiAb，可进一步增加干细胞的归巢率和修复效果。MSCs归巢后能干预心肌纤维化，其机制可能与HSP-70的介导有关。

关键词：超声检查微气泡间质干细胞抗体双特异性心肌纤维化

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齐墩果酸对肝癌细胞Hep3B增殖和凋亡的作用研究

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第三军医大学学报 2011年第5期33卷 531-534页

作者：黄开顺朱链链刘丹邹黎雷琪葛蹼陈志琼重庆医科大学生命科学研究院重庆400016 重庆医科大学药学院药物分析教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的研究齐墩果酸对人肝癌细胞株Hep3B增殖和凋亡的影响及其与细胞内钙离子浓度{[Ca2+]i}关系。方法将浓度分别为40、80、100μg/ml齐墩果酸作用于肝癌Hep3B细胞24 h以后,DAPI染色,荧光显微镜观察对照组和处理组细胞形态变化;以11组不... 详细信息

目的研究齐墩果酸对人肝癌细胞株Hep3B增殖和凋亡的影响及其与细胞内钙离子浓度{[Ca2+]i}关系。方法将浓度分别为40、80、100μg/ml齐墩果酸作用于肝癌Hep3B细胞24 h以后,DAPI染色,荧光显微镜观察对照组和处理组细胞形态变化;以11组不同浓度齐墩果酸(5～400μg/ml)作用Hep3B细胞24 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Hep3B细胞增殖情况;分别以不同浓度齐墩果酸(80、100、150μg/ml)作用Hep3B细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期变化、细胞凋亡率、细胞内钙离子浓度;对钙离子荧光强度与细胞凋亡率进行相关性分析。结果各处理组Hep3B细胞出现凋亡;不同浓度齐墩果酸能够抑制肝癌细胞Hep3B增殖,且在5～100μg/ml范围内呈剂量依赖性,药物作用细胞24、48 h的IC50分别为86.04、93.29μg/ml;各处理组细胞周期在G2/M期产生阻滞、[Ca2+]i较对照组显著增加(P<0.05),细胞凋亡率和[Ca2+]i增加与药物浓度呈依赖关系;钙离子荧光强度与细胞凋亡率之间存在线形相关性(P<0.05)。结论齐墩果酸能够抑制肝癌Hep3B细胞株增殖,可能通过上调[Ca2+]i诱导其凋亡。

关键词：齐墩果酸肝癌细胞Hep3B 细胞周期细胞凋亡细胞内钙离子浓度

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