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第九届全国生物医学体视学学术会议、第十二届全军军事病理学学术会议暨第八届全军定量病理学学术会议

作者：唐勇重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室 400016

神经科学的重要方向之一就是对神经系统进行形态学研究,尤其是定量形态学研究.研究小组近年来，把体视学方法运用到了以下领域:认识老年大脑改变;跑步锻炼与老年脑;丰富生存环境与老年脑;雌激素与老年脑;大脑白质改变在精神分裂症发病... 详细信息

神经科学的重要方向之一就是对神经系统进行形态学研究,尤其是定量形态学研究.研究小组近年来，把体视学方法运用到了以下领域:认识老年大脑改变;跑步锻炼与老年脑;丰富生存环境与老年脑;雌激素与老年脑;大脑白质改变在精神分裂症发病中的应用:抑郁症发生的病理机制及药物和行为学干预手段抗抑郁的机制;阿尔茨海默氏病(AD)的早期病理机制及药物和行为学手段对早期AD的作用。将以部分研究工作为例，介绍如何把体视学方法应用于神经科学定量研究中。

关键词：神经病学定量形态学体视学临床应用

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基于超高效液相色谱-质谱技术的模式识别在弥漫性轴索损伤大鼠早期血浆代谢组学中的应用

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中华创伤杂志 2014年第11期30卷 1151-1155页

作者：赵敏珠李红卫朱士胜张鹏朱英吴涛唐任宽李永国刘云志李剑波重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆市刑事侦查工程技术研究中心400016 重庆市公安局刑警总队技术处重庆医药高等专科学校

目的探讨基于超高效液相色谱-质谱技术（ultra performance liquid chromatographymass spectrometry,UPLC-MS）的模式识别方法应用于SD大鼠弥漫性轴索损伤（diffuse axonal injury,DAI）模型血浆代谢组学研究的可行性.方法采用改良Ma... 详细信息

目的探讨基于超高效液相色谱-质谱技术（ultra performance liquid chromatographymass spectrometry,UPLC-MS）的模式识别方法应用于SD大鼠弥漫性轴索损伤（diffuse axonal injury,DAI）模型血浆代谢组学研究的可行性.方法采用改良Marmarous法建立SD大鼠DAI模型.将18只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、假手术对对照组和打击致伤组,每组6只.应用UPLC-MS技术对空白对照组、假手术对照组及打击致伤组大鼠血浆进行检测,所得数据分别采用主成分分析法（principal component analysis,PCA）、偏最小二乘判别分析法（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）和正交信号偏最小二乘判别分析法（orthogonal signal correction-partial least squares discriminant analysis,OSC-PLS-DA）进行模式识别分析,确定打击致伤组与对照组血浆的代谢差异,比较三种模式识别方法的判别能力.根据PLS-DA模型的变量重要性投影（variable importance in the projection,V1P）值初步筛选出可能的代谢标志物.结果打击致伤组与对照组血浆代谢组存在明显差异,但PCA模式识别未能将打击致伤组和对照组明显区分开,而PLS-DA和OSC-PLS-DA模式识别法可显著将其分开.初步确认7个质荷比（分别为243.102 3,227.103 0,146.165 0,59.049 7,145.1197,218.138 9,169.096 9）对应的化合物可能为大鼠DA1候选的潜在生物标志物.结论建立了利用UPLC-MS技术进行DAI大鼠模型早期的血浆代谢组学研究检测,PLS-DA和OSC-PLS-DA模式识别法明显优于PCA模式识别法,初步筛选出大鼠DAI可能的生物标志物,为DAI早期诊断、治疗及法医学鉴定奠定了基础.

关键词：弥漫性轴索损伤质谱法代谢组学

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MCPHl在肺组织的表达及其对人肺癌细胞株H1299凋亡的影响

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第三军医大学学报 2014年第6期36卷 574-577页

作者：张冀麦力昊晓彬肖明袁成福卜友泉宋方洲重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的:探讨MCPHl基因在肺癌组织和正常组织的蛋白表达分布及其过表达后对人肺腺癌细胞系H1299凋亡的影响。方法:临床收集20例肺癌组织和8例正常肺组织标本,免疫组化法检测MCPHl蛋白在肺组织的表达分布,真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPHl和... 详细信息

目的:探讨MCPHl基因在肺癌组织和正常组织的蛋白表达分布及其过表达后对人肺腺癌细胞系H1299凋亡的影响。方法:临床收集20例肺癌组织和8例正常肺组织标本,免疫组化法检测MCPHl蛋白在肺组织的表达分布,真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPHl和空白质粒pcDNA3.1瞬时转染肺癌细胞株H1299,并设立未处理组。转染质粒48h后,采用***法检测细胞中MCPHl基因mRNA的转录表达情况;转染72h后提取细胞总蛋白,Westernblot检测细胞中MCPHl蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:MCPHl蛋白在肺癌组织中表达低于正常组织,而且MCPHl蛋白在癌组织中表现为核质低表达,在正常组织中为核质高表达;H1299转染pcDNA3.1(-)/MCPHl重组质粒后,可有效上调H1299细胞中MCPHl基因的mRNA和蛋白表达,处理组的细胞凋亡率(18.10±1.87)%较pcDNA3.1(-)转染组(5.76±1.85)%和未处理组(5.85±0.57)%显著增加(P<0.05)。结论:MCPHl在人肺癌组织表达降低,过表达之后可诱导肺腺癌细胞发生凋亡。

关键词：蛋白质类/遗传学肺肺肿瘤/病理学基因细胞凋亡细胞系质粒转染人类

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Akt/mTOR信号通路介导低浓度过氧化氢对小鼠表皮干细胞的促增殖作用

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感染．炎症．修复 2015年第3期16卷 138-144页

作者：亓俊华聂刚吴梅刘晓萍陈民佳朱明袁培松张娅宋昱庆郭韡邢伟李向云罗东林黄宏徐祥第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第一研究室重庆400042 青岛大学医学院组织胚胎学教研室山东青岛266071 温州医科大学附属第一医院皮肤科浙江温州325000 青岛大学基础医学实验中心人体显微结构学实验室山东青岛266071

目的:探讨低浓度过氧化氢(H_2O_2)对小鼠表皮干细胞(mESCs)体外促增殖作用及其机制。方法:以酶消化法分离培养mESCs。免疫荧光技术鉴定第3代mESCsβ1整合素和角蛋白19(K19)表达,流式细胞术鉴定CD34的表达;以不同低浓度H_2O_2(0、25、50... 详细信息

目的:探讨低浓度过氧化氢(H_2O_2)对小鼠表皮干细胞(mESCs)体外促增殖作用及其机制。方法:以酶消化法分离培养mESCs。免疫荧光技术鉴定第3代mESCsβ1整合素和角蛋白19(K19)表达,流式细胞术鉴定CD34的表达;以不同低浓度H_2O_2(0、25、50、100、150和200μmol/L)处理mESCs 48 h和72h。同时,另一组实验中在用不同浓度H_2O_2刺激的同时加入或不加入雷帕霉素(50 ng/ml)培养48 h。甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Western Blot法检测H_2O_2刺激小鼠mESCs 48 h Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、P70s6k、e IF4E、4E-BP1、p-mTOR、p-Akt、p-P70s6k、p-eIF4E、p-4E-BP1和细胞增殖相关蛋白Cyclin D1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:免疫荧光技术检测分离培养的mESCs细胞100%表达β1整合素和K19;流式细胞术检测99.8%的mESCs表达CD34;MTT检测结果显示,48 h和72 h时25μmol/L和50μmol/L的H_2O_2可以有效地促进mESCs的增殖(P<0.05),而雷帕霉素能拮抗这一效应;但当H_2O_2浓度为200μmol/L时,则显著抑制mESCs增殖(P<0.05);免疫印迹结果显示低浓度H_2O_2处理mESCs 48 h后,Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、eIF4E、4E-BP1水平及其磷酸化水平(p-mTOR、p-eIF4E、p-4E-BP1)显著增加(P<0.05或P<0.01),当H_2O_2浓度为200μmol/L时则抑制其表达(P<0.05或P<0.01)。此外,50μmol/L的H_2O_2能上调细胞周期蛋白Cyclin D1和PCNA的表达,而雷帕霉素能拮抗这一作用。结论:低浓度的H_2O_2对mESCs有明显的促增殖作用,并且能激活Akt/mTOR通路。而低浓度H_2O_2对mESCs的促增殖作用至少部分是通过活化Akt/mTOR信号通路介导的。

关键词：表皮干细胞过氧化氢 Akt/mTOR信号通路细胞增殖

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mIL-21-hIgGFc融合蛋白在293E细胞中的表达纯化及其对CD8^+T细胞表型的影响

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中国免疫学杂志 2014年第7期30卷 884-887,892页

作者：黄启彬刘明月符少月邢巧刘潇淇王盛典易发平重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国科学院生物物理研究所中国科学院感染与免疫重点实验室北京100101

目的:在293E细胞中表达小鼠IL-21-hIgGFc融合蛋白,并检测该蛋白对CD8+T细胞表型的影响。方法:运用RT-PCR方法从BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞扩增出IL-21基因,插入到PTT3-hIgGFc载体上,获得重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc;用磷酸钙瞬时转染293E细... 详细信息

目的:在293E细胞中表达小鼠IL-21-hIgGFc融合蛋白,并检测该蛋白对CD8+T细胞表型的影响。方法:运用RT-PCR方法从BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞扩增出IL-21基因,插入到PTT3-hIgGFc载体上,获得重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc;用磷酸钙瞬时转染293E细胞,48 h和72 h后分别收集培养上清。培养上清经MOLLIPORE LabscaleTMTFF system浓缩后,Protein G琼脂糖柱纯化获得mIL-21-hIgGFc融合蛋白,再用ELISA和SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的含量和纯度。mIL-21-hIgGFc刺激P1A小鼠的CD8+T细胞,72 h后,运用流式细胞术检测其表型改变情况。结果:重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc经酶切和测序确定载体构建成功,ELISA检测表明293E细胞上清中含有787 ng/ml,SDS-PAGE结果显示得到了较纯的融合蛋白,纯化后获得500μg融合蛋白mIL-21-hIgGFc。融合蛋白mIL-21-hIgGFc处理P1A小鼠CD8+T细胞后,CD44lowCD62Lhi CD8+T细胞明显增多。结论:我们成功构建了PTT3-mIL21-hIgGFc重组质粒,在293E细胞中表达并纯化出mIL21-hIgGFc融合蛋白。mIL21-hIgGFc能促进CD8+T细胞向CD44lowCD62LhiCD8+记忆干细胞表型分化,这对于肿瘤过继免疫治疗方案的改进具有重要的参考意义。

关键词：白细胞介素21(IL-21) 293E细胞表达纯化 CD8^+T细胞

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云南省龙陵县HIV阳性者感染弓形虫的SAG2基因位点分析

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中国病原生物学杂志 2014年第5期9卷 438-441,446页

作者：贾玉玺聂大平陈凌娟罗米李伟张素珍申丽洁大理学院基础医学院寄生虫学教研室云南大理671003 重庆医科大学第一临床学院2011级本科重庆404100 龙陵县人民医院云南龙陵678300 昆明医科大学病原生物学与免疫学系云南昆明650500

目的初步了解云南省龙陵县HIV阳性者感染弓形虫的基因型特征。方法使用基因提取试剂盒提取龙陵县HIV阳性者感染弓形虫的基因,运用巢式PCR技术分别对弓形虫SAG2基因(241bp、221bp)进行扩增,扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳,紫外投射仪下观... 详细信息

目的初步了解云南省龙陵县HIV阳性者感染弓形虫的基因型特征。方法使用基因提取试剂盒提取龙陵县HIV阳性者感染弓形虫的基因,运用巢式PCR技术分别对弓形虫SAG2基因(241bp、221bp)进行扩增,扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳,紫外投射仪下观察结果。用DNA胶回收试剂盒切胶回收PCR产物并进行酶切,酶切产物置于37℃恒温培养箱孵育16h,孵育后的酶切产物用2.5%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像系统摄像观察结果并与弓形虫基因Ⅰ型标准株进行对比鉴定。结果 112份HIV阳性者全血37份扩增出弓形虫SAG2基因(241bp、221bp)。从37份弓形虫SAG2基因(241bp、221bp)扩增阳性的全血标本中选择条带较亮的6份进行酶切,并与弓形虫基因I型标准株比对,初步确定2号标本为基因Ⅲ型,其他标本为基因Ⅰ型。从酶切的6份标本中选择2份进行测序,其中1份为酶切Ⅲ型(测序的2号标本)。经过基因序列对比分析,各弓形虫株之间SAG2基因的碱基对差异较小。其中基因Ⅰ型36份,Ⅲ型1份。结论初步确定云南省龙陵县HIV阳性者感染弓形虫的基因型以Ⅰ型为主,Ⅲ型少见,未见Ⅱ型及其他基因型。

关键词： HIV阳性弓形虫 SAG2基因 PCR^RFLP 序列分析

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分子诊断技术在弓形虫检测和基因分析中的研究进展

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国际医学寄生虫病杂志 2014年第3期41卷 181-185页

作者：冷丽陈凌娟贾玉玺罗米申丽洁昆明医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系昆明650500 大理学院基础医学院寄生虫学教研室大理671003 重庆医科大学第一临床学院重庆404100

弓形虫是一种专性细胞内寄生的寄生虫,人感染后多呈隐性感染,临床表现缺乏特异性,检测及诊断较为困难.分子诊断是应用分子生物学方法,检测患者体内遗传物质结构或表达水平的变化,继而做出诊断的技术,它为疾病的预防、诊断、治疗和转归... 详细信息

弓形虫是一种专性细胞内寄生的寄生虫,人感染后多呈隐性感染,临床表现缺乏特异性,检测及诊断较为困难.分子诊断是应用分子生物学方法,检测患者体内遗传物质结构或表达水平的变化,继而做出诊断的技术,它为疾病的预防、诊断、治疗和转归提供更为准确的信息.目前,分子诊断技术主要有核酸探针技术、PCR及其衍生技术、环介导等温扩增技术、基因芯片技术等.该文对分子诊断技术在弓形虫中的应用进行综述.

关键词：刚地弓形虫弓形虫病诊断基因分析

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桡神经-肌皮神经变异1例报道

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重庆医科大学学报 2014年第4期39卷 445-445页

作者：许亚玲杨佳余政廷路鹏飞朱淑娟重庆医科大学2010级临床医学儿科专业重庆400016 重庆医科大学基础医学院人体解剖学教研室重庆400016

从上肢神经分布情况来看，一般以肌皮神经变异居多，而桡神经变异的现象较为罕见。笔者在局部解剖学实验课的解剖操作过程中，发现1例左侧桡神经浅支并肌皮神经变异现象：桡神经浅支分布到前臂部分屈肌肌群，而肌皮神经延续至前臂浅出... 详细信息

从上肢神经分布情况来看，一般以肌皮神经变异居多，而桡神经变异的现象较为罕见。笔者在局部解剖学实验课的解剖操作过程中，发现1例左侧桡神经浅支并肌皮神经变异现象：桡神经浅支分布到前臂部分屈肌肌群，而肌皮神经延续至前臂浅出深筋膜后，在腕上方发出分支分布于虎口区、拇指食指中指背侧区皮肤。具体报道如下。

关键词：肌皮神经变异桡神经浅支解剖学实验课神经分布操作过程变异现象分支分布前臂部

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表皮神经嵴干细胞移植对大鼠损伤脊髓组织中脑源性神经营养因子表达的影响

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重庆医科大学学报 2014年第4期39卷 433-437页

作者：刘争张洁元陈魁君李兵仓段朝霞张路余华荣重庆医科大学基础医学院生理学教研室、神经科学研究中心重庆400016 第三军医大学大坪医院野战外科研究所重庆400042 西南大学淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室重庆400715

目的:观察表皮神经嵴干细胞(epidermal neural crest stem cells,EPI-NCSCs)移植治疗大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的作用以及SCI组织中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophical factor,BDNF)表达的变化,从神经营养因子的角度探讨EPI-NCSCs移植修复SCI的机制。方法:分离培养绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因大鼠的EPINCSCs,备移植用。60只SD大鼠均暴露T10脊髓并在NYU-Ⅱ撞击机(10 g 25 mm致伤力)挫伤脊髓制作SCI模型,随机分为空白损伤组(A组)、培养基移植组(B组)、EPI-NCSCs移植组(C组)。SCI模型大鼠损伤1周后将EPI-NCSCs细胞悬液移植入C组大鼠SCI处,B组用单纯DMEM/F12培养基代替,空白损伤组不做处理。伤后每周进行一次运动功能评分,移植后1、3、6周取材行酶联免疫分析、免疫组织化学染色、免疫荧光染色以及Western blot检测BDNF蛋白的表达。结果:移植术后第2周起C组运动功能评分高于同期A组(2、3、4、5、6周,P值分别为0.003、0.000、0.000、0.000、0.000)和B组(2、3、4、5、6周,P值分别为0.044、0.000、0.006、0.000、0.008)。酶联免疫分析显示C组BDNF蛋白在移植后3周表达高于A组(P=0.009)和B组(P=0.013),移植后6周表达量显著高于A组(P=0.003)和B组(P=0.003)。免疫组化和免疫荧光结果显示移植后3周和6周,C组BDNF表达高于同期A组和B组。Western blot结果显示移植后6周,C组BDNF表达高于同期A组(P=0.000)和B组(P=0.000)。结论:EPI-NCSCs移植能促进SCI内BDNF的表达,改善局部微环境,从而有助于大鼠损伤脊髓的修复。

关键词：脊髓损伤表皮神经嵴干细胞细胞移植脑源性神经营养因子

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序列和功能信息介导的蛋白质互作特征评价与数据库构建

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国际遗传学杂志 2014年第5期37卷 230-235页

作者：李晋陈曦林效宗杨欢张瑞杰王丽美哈尔滨医科大学生物信息科学与技术学院统计遗传学教研室哈尔滨医科大学附属第二医院急诊创伤外科哈尔滨医科大学基础医学院计算机教研室

目的蛋白质相互作用研究对于理解DNA功能、基因组元件作用机制有重要意义。已有大量工作在从蛋白质-蛋白质互作的计算预测方向展开,其中蛋白质-蛋白质互作的特征起着很重要的作用。互作特征的评价及相关数据库构建仍是蛋白质互作预测的... 详细信息

目的蛋白质相互作用研究对于理解DNA功能、基因组元件作用机制有重要意义。已有大量工作在从蛋白质-蛋白质互作的计算预测方向展开,其中蛋白质-蛋白质互作的特征起着很重要的作用。互作特征的评价及相关数据库构建仍是蛋白质互作预测的一项重要工作。方法该文从基因、蛋白质序列、功能信息层面提取出人类蛋白质-蛋白质对的27个特征,并应用于多种分类器,利用ROC曲线对特征的性能给出了科学的评价。结果通过研究发现逻辑回归和贝叶斯网络分类效果最好,生物过程、细胞组分、分子功能、基因表达值、组织、域间互作的可用性明显高于其他特征,同时构建了人类蛋白质互作特征数据库,供广大科研工作者使用。结论从多角度评价了特征可用性,得到了表现较优的特征,但是对于其中一些特征,还需要进一步提高覆盖率,从而达到更好的效果。

关键词：蛋白质-蛋白质互作机器学习特征评价数据库

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