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姜黄素通过P53/P121/PCNA/eIF4E信号通路抑制A549细胞增殖

第三军医大学学报 2012年第1期34卷 49-53页

作者：蒋金曹友德磨娜李静莫显刚重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 贵阳医学院附属医院综合病房贵阳550004

目的:研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法:不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、M1Tr法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72h后,FCM检测细胞周期;... 详细信息

目的:研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法:不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、M1Tr法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72h后,FCM检测细胞周期;liT-PCR、Westernblot检测P53、P21、PCNA及elF4EmRNA和蛋白的表达水平。结果:20μmol/L姜黄素可引起A549细胞s期阻滞,抑制细胞增殖,减少细胞的克隆形成数。20Ixmol/L姜黄素作用A54924h后P53、P21mRNA和蛋白表达上调,48h或72h后变得尤明显。此外,20p~mol/L姜黄素处理A549细胞48h后可引起PCNA、elF4EmRNA和蛋白表达水平下调,72h后尤明显。结论:姜黄素可抑制A549的克隆形成数和细胞增殖,其机制可能与姜黄素促进P53和P21基因表达,抑制PCNA和elF4E基因表达有关。

关键词：肺肿瘤/病理学基因 p53 姜黄素信号处理计算机辅助遗传学技术增殖细胞核抗原真核细胞起始因子4E 肿瘤细胞培养的

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siRNA下调EIF4E基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和周期的影响

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肿瘤 2011年第3期31卷 197-202页

作者：孙阳阳曹友德叶维霞磨娜重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:应用小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)乳腺癌MDA-MB-231细胞中真核细胞翻译起始因子4E (eukaryotic translation initiation factor 4E, EIF 4E )基因的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖和生长周期的影响。方法:构建针对EIF 4E 基因的siRNA表达质粒,采用脂质体法将表达质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞;分别采用RT-PCR、Western 印迹法和免疫细胞化学法检测转染EIF4E siRNA后, 对MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白的表达水平的影响;MTT法、平板克隆形成实验和FCM检测MDA-MB-231细胞增殖活性、克隆形成率及细胞周期。结果:成功构建EIF4E siRNA表达质粒。RT-PCR、Western 印迹法和免疫细胞化学法检测结果显示,MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白表达均明显下降(P <0.05)。转染EIF4E siRNA组细胞生长缓慢,集落形成数明显减少,与空白对照组和转染空载体组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示,EIF4E siRNA转染组G1期细胞所占百分比为(71.30±0.47)%, 较空白对照组的( 53.10±0.43)%明显增加,而S期细胞所占百分比为(12.53±0.13)%,较空白对照组的(26.47±0.38)%明显减少(P<0.05)。结论:EIF4E siRNA可显著下调EIF4E基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达水平,在一定程度上抑制乳腺癌细胞的增殖,有可能成为临床治疗乳腺癌的靶点之一。

关键词：乳腺肿瘤 RNA,小分子干扰细胞凋亡真核细胞翻译起始因子细胞,MDA-MB-231

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shRNA抑制p115表达对胃癌体外血管形成的影响

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第三军医大学学报 2011年第16期33卷 1676-1681页

作者：文雪易永芬邓玮屈玉玲闫田静重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi-vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制。方法采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株。利用W... 详细信息

目的初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi-vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制。方法采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株。利用Western blot、RT-PCR和细胞免疫荧光方法检测转染后的p115抑制效应及其对MIF、p-Akt、VEGF-A的调控情况;采用细胞活性检测实验、Transwell体外侵袭实验和血管形成实验方法分别检测转染p115 shRNA的胃癌BGC-823细胞对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖,迁移和血管形成的影响。结果 p115 shRNA-1318转染后胃癌BGC-823细胞p115、MIF、p-Akt和VEGF-A的蛋白及mRNA表达明显抑制(P<0.01);细胞免疫荧光:与对照组相比,p115 shRNA组p115、MIF及VEGF-A的色泽暗红且抑制率分别为63%、65%、68%;细胞活性检测:与对照组相比,p115 shRNA组HUVECs增殖能力明显降低(P<0.05);Transwell侵袭实验:p115 shRNA组HUVECs较空白对照组,阴性对照组(shNC)细胞侵袭能力明显降低,24 h穿过Transwell的细胞数分别为:(39±5)、(174±4)、(179±4),与对照组相比差别具有统计学意义(P<0.05);血管形成实验:p115 shRNA组HUVECs不能在Matrigel胶上形成网状结构,空白对照组、shNC组成管指数分别为:(1 289±37)、(1 329±33),p115 shRNA组成管指数为:(422±41),与对照组相比差别具有统计学意义(P<0.05)。结论 p115基因沉默下调胃癌的VEGF-A表达及抑制血管生成;其分子机制可能与MIF通过PI3K/Akt信号通路途径调节胃癌血管形成有关。

关键词：高尔基体囊泡转运蛋白p115 巨噬细胞移动抑制因子人脐静脉血管内皮细胞血管生成

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PARG抑制对小鼠结肠癌CT26细胞VEGF-C蛋白表达调控的初步研究

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第三军医大学学报 2011年第14期33卷 1451-1454页

作者：吴伟强王娅兰颜佳欣潘娟重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的初步探讨多聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[poly-(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]抑制对小鼠结肠癌CT26细胞VEGF-C蛋白表达影响。方法分为实验组(GLTN处理)与对照组(GLTN未处理),采用Western blot法检测2组小鼠结肠癌CT26细胞的PARG、PARP-1、NF-κB及VEGF-C的蛋白表达变化;RT-PCR分析实验组与对照组的VEGF-C mRNA水平变化;ELISA法检测2组小鼠结肠癌CT26细胞上清液VEGF-C蛋白表达变化。结果 PARG抑制后小鼠结肠癌CT26细胞表达的PARG和NF-κB蛋白较对照组下降(P<0.01),PARP-1和VEGF-C蛋白较对照组降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示,实验组CT26细胞株VEGF-C mRNA表达[相对灰度值为(0.39±0.08)]较对照组[相对灰度值为(0.63±0.04)]显著下降(P<0.01)。实验组小鼠结肠癌CT26细胞分泌的VEGF-C蛋白量[(95.86±5.43)pg/ml]较对照组[(1 99.32±0.75)pg/ml]明显降低(P<0.05)。结论在小鼠结肠癌CT26细胞中,抑制PARG可下调PARP-1和NF-κB的表达,从而使VEGF-C表达下降,这可能在抑制肿瘤淋巴管形成中起重要作用。

关键词：多聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶多聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶 NF-κB 血管内皮生长因子C 肿瘤淋巴管形成

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PD-L1^＋ HeLa细胞对人外周血活化T细胞的免疫调节作用

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第三军医大学学报 2011年第16期33卷 1710-1713页

作者：徐光旭徐曼耿卫朴陈瑜赵涌重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨人宫颈癌细胞表达PD-L1对人外周血T细胞的免疫调节作用。方法采用PD-L1质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株,将PD-L1+HeLa细胞与PHA刺激活化的人外周血T淋巴细胞混合培养,MTT法检测T细胞的增殖水平,流式细胞术分析T细胞凋亡率和CD8+/CD... 详细信息

目的探讨人宫颈癌细胞表达PD-L1对人外周血T细胞的免疫调节作用。方法采用PD-L1质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株,将PD-L1+HeLa细胞与PHA刺激活化的人外周血T淋巴细胞混合培养,MTT法检测T细胞的增殖水平,流式细胞术分析T细胞凋亡率和CD8+/CD4+T细胞比例;ELISA检测PD-L1+HeLa细胞与PHA刺激活化的人外周血T淋巴细胞混合培养上清液IFN-γ的含量。结果 MTT检测显示与PD-L1+HeLa混合培养组的T细胞增殖光密度值为(0.31±0.02),明显低于与PD-L1-HeLa混合培养组的T细胞和对照组T细胞,分别为[(0.62±0.02)和(0.59±0.03),P<0.01];T细胞凋亡率明显高于与PD-L1-HeLa混合培养组和对照组T细胞,分别为(32.7%、17.9%和18.3%);CD8+/CD4+T细胞比值稍低于PD-L1-HeLa混合培养组和对照组T细胞(分别为0.86、0.91和0.89);与PD-L1+HeLa混合的T细胞培养上清液IFN-γ的含量低于与PD-L1-HeLa混合培养组和对照组T细胞,分别为[(801.1±20.5)pg/ml、(1 006.2±30.2)pg/ml和(1 070.2±113.3)pg/ml,P<0.01]。结论 PD-L1明显抑制人外周血活化T细胞增殖促进其凋亡并下调其免疫功能。

关键词： PD-L1 T细胞增殖凋亡 IFNγ-

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胃癌组织和细胞中P115、MIF的表达及意义

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第三军医大学学报 2011年第3期33卷 241-245页

作者：邓玮易永芬闫田静文雪屈玉玲重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的观察胃癌组织和细胞中高尔基体转运蛋白P115和MIF的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义。方法用S-P、Western blot和RT-PCR法检测P115及MIF在正常胃黏膜和胃癌组织,3种细胞株(正常胃黏膜上皮GES-1,不同分化程度的胃癌细胞株MK... 详细信息

目的观察胃癌组织和细胞中高尔基体转运蛋白P115和MIF的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义。方法用S-P、Western blot和RT-PCR法检测P115及MIF在正常胃黏膜和胃癌组织,3种细胞株(正常胃黏膜上皮GES-1,不同分化程度的胃癌细胞株MKN-28,BGC-823)中的蛋白和mRNA表达情况。结果 P115和MIF在胃癌组织中的阳性表达率分别为73.3%、80%,在正常胃黏膜中的阳性表达率分别为40%、46.7%,胃癌组织中P115和MIF的表达明显高于正常胃黏膜(P<0.01),且P115的表达和MIF的表达呈正相关(r=0.433,P=0.017);胃癌组织中P115、MIF的蛋白和mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜组织(P<0.01)。免疫细胞化学,Western blot和RT-PCR结果显示:P115、MIF在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823中的蛋白及mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜上皮GES-1(P<0.01);且低分化胃癌细胞株BGC-823中P115和MIF的表达水平明显高于高分化胃癌细胞株MKN-28(P<0.05)。结论 P115和MIF的过表达,可能在胃癌的发生过程中起协同作用;对P115和MIF相互作用机制的深入探讨有可能使其成为研究胃癌发生、发展的分子机制的新靶点。

关键词：胃黏膜胃癌 P115 MIF

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shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞VEGF-C表达的影响

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中国肿瘤临床 2011年第4期38卷 200-203页

作者：孙阳阳曹友德刘浩叶维霞重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆市400016

目的:探讨shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C基因表达的影响。方法:制备针对EIF4E的三种小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),分别是siRNA1、siRNA2、siRNA3,筛选沉默最有效的siRNA,据此设计短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)寡核苷酸链,与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接,构建pGPU6/GFP/Neo-EIF4E重组质粒,经酶切鉴定后利用脂质体Lipofectamine^(TM) 2000将鉴定正确的重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学法检测EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达情况。结果:RT-PCR结果显示siRNA1、siRNA2、siRNA3对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E基因表达均有抑制作用,与空白对照组、阴性对照组、脂质体组比较差异显著(P<0.05),尤以siRNA3抑制率最高达71.2%。利用针对siRNA3合成的shRNA与质粒载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接构建的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E,酶切鉴定表明构建成功,并稳定转染MDA-MB-231细胞,平均转染效率为80%。RT-PCR、Western blot结果显示,稳定转染重组质粒后MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05),抑制率分别为79.00%、67.90%(EIF4E)和77.01%、62.94%(VEGF-C)。免疫细胞化学染色法显示重组质粒组EIF4E及VEGF-C蛋白表达均受到明显抑制(P<0.05)。结论:靶向EIF4E的shRNA不仅能有效沉默乳腺癌细胞MDA-MB-231中EIF4E的表达,且能抑制VEGF-C的表达,提示EIF4E可能参与诱导乳腺癌细胞VEGF-C的表达,而EIF4E-shRNA可能成为抑制乳腺癌淋巴管生成的一种新的有效手段。

关键词： MDA-MB-231细胞小干扰RNA EIF4E基因 pGPU6/GFP/Neo

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shRNA干扰PARG对大肠癌CT26细胞粘附因子表达的影响

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重庆医科大学学报 2011年第6期36卷 641-645页

作者：颜佳欣王娅兰吴伟强潘娟重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:探讨小鼠大肠癌CT26株中聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[Poly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]对细胞间粘附因子表达的影响及其可能的机制。方法:以慢病毒为载体对CT26细胞株中PARG基因进行RNA沉默干扰,并筛选出稳定表达株。Realtime-... 详细信息

目的:探讨小鼠大肠癌CT26株中聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[Poly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]对细胞间粘附因子表达的影响及其可能的机制。方法:以慢病毒为载体对CT26细胞株中PARG基因进行RNA沉默干扰,并筛选出稳定表达株。Realtime-PCR法检测沉默效果。Western blot法检测CT26细胞PARG、PARP、NF-κB和Pi-AKT(473)I、CAM-1、P-selectin的蛋白表达。结果:实验组与对照组(包括阴性对照组、空载体对照组)相比,PARG、PARP、Pi-AKT(473)、NF-κBI、CAM-1、P-selectin表达经统计学分析差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在大肠癌细胞株中,抑制PARG可以通过调节与NF-κB有关通路,进一步调节ICAM-1、P-selectin等细胞粘附因子。提示PARG在肿瘤癌栓形成过程中可能具有重要作用。

关键词： PARG 慢病毒转染 AKT磷酸化细胞粘附

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p115和MIF在肝癌细胞和正常肝细胞的表达情况

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重庆医科大学学报 2011年第2期36卷 136-140页

作者：文雪易永芬邓玮闫田静屈玉玲重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:研究人肝癌低分化SMCC-7721细胞株,高分化HepG2细胞株和人正常肝细胞株LO2的高尔基体转运蛋白p115和巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitoryfactor,MIF)的表达情况。方法:采用RT-PCR方法检测3组细胞株中p115和MIF的... 详细信息

目的:研究人肝癌低分化SMCC-7721细胞株,高分化HepG2细胞株和人正常肝细胞株LO2的高尔基体转运蛋白p115和巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitoryfactor,MIF)的表达情况。方法:采用RT-PCR方法检测3组细胞株中p115和MIF的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测3组细胞株中p115和MIF的蛋白表达情况。结果:SMCC-7721,HepG2的p115和MIF mRNA表达和蛋白表达水平明显增加且SMCC-7721表达更强,与对照组正常肝细胞株LO2的表达量比较有显著差异(P<0.05);细胞免疫组化方法结果显示:SMCC-7721,HepG2中p115在主要位于除高尔基体外的细胞质中,但在细胞质中HepG2着色相对较淡,而LO2中位于细胞核旁的高尔基体上。MIF主要分布于细胞质中,其在SMCC-7721、HepG2、LO23组细胞表达量呈明显减弱,统计学有显著差异(P<0.05)。结论:p115和MIF的含量在SMCC-7721、HepG2、LO2 3组细胞株中呈递减性变化。说明随着细胞恶性程度增加,p115和MIF表达增高,提示二者可能与肿瘤细胞的异常分化有关。

关键词：高尔基体转运蛋白p115 巨噬细胞移动抑制因子 SMCC-7721 HepG2 LO2

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共刺激分子PD-L1、PD-L2和B7-H4在人子宫颈癌的表达及意义

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重庆医科大学学报 2011年第10期36卷 1186-1190页

作者：耿卫朴徐曼王渝琦徐光旭陈瑜王婷婷黄文炼赵涌重庆医科大学基础医学院病理教研室重庆医科大学分子与肿瘤研究中心重庆400016

目的：研究共刺激分子程序性死亡配体1（Programmed death ligand 1,PD-L1）、程序性死亡配体2（Programmeddeath ligand 2,PD-L2）和B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学PV-6000法检测PD-L1、PD... 详细信息

目的：研究共刺激分子程序性死亡配体1（Programmed death ligand 1,PD-L1）、程序性死亡配体2（Programmeddeath ligand 2,PD-L2）和B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学PV-6000法检测PD-L1、PD-L2和B7-H4在10例正常人宫颈组织、10例高级别CIN（CINⅡ~Ⅲ级）和67例子宫颈癌中的表达,并分析3种共刺激分子的表达与子宫颈患者临床病理特征的相关性。结果：正常人宫颈组织上皮不表达PD-L1和B7-H4,而基底层细胞微弱表达PD-L2;CINⅡ~Ⅲ的瘤变宫颈上皮微弱表达PD-L1、PD-L2和B7-H4;子宫颈癌细胞表达PD-L1、PD-L2和B7-H4的阳性率分别为70%（47/67）、51%（34/67）和46%（31/67）。统计学分析显示宫颈癌细胞PD-L1的表达与癌细胞浸润深度明显相关（P〈0.01）,与年龄、组织学类型无关;PD-L2的表达与肿瘤的淋巴结转移（P〈0.05）有关;B7-H4的表达与肿瘤的淋巴结转移（P〈0.05）和局部血管内瘤栓形成（P〈0.05）相关。结论：人子宫颈癌细胞异常表达PD-L1、PD-L2和B7-H4,且与肿瘤浸润和转移密切相关。PD-L1、PD-L2和B7-H4可能成为子宫颈癌免疫治疗的潜在靶点。

关键词： PD-L1、PD-L2、B7-H4 子宫颈癌免疫组织化学

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