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三丁基过氧化氢诱导Sca-1＋造血干／祖细胞衰老与P16INK4a表达的关系

解剖学杂志 2011年第2期34卷 172-175页

作者：周明姜蓉杨斌姚欣王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的：探讨三丁基过氧化氢（t-BHP）诱导Sca-1＋造血干/祖细胞（HSC/HPC）衰老与调控P16INK4a表达的关系,为寻找延缓HSC/HPC衰老方法提供理论和实验依据.方法：免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1＋ HSC/HPC.用t-BHP诱导Sca-1＋ HSC/HPC6... 详细信息

目的：探讨三丁基过氧化氢（t-BHP）诱导Sca-1＋造血干/祖细胞（HSC/HPC）衰老与调控P16INK4a表达的关系,为寻找延缓HSC/HPC衰老方法提供理论和实验依据.方法：免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1＋ HSC/HPC.用t-BHP诱导Sca-1＋ HSC/HPC6h建立体外细胞衰老模型,通过衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）培养观察t-BHP诱导Sca-1＋ HSC/HPC衰老的生物学作用;逆转录聚合酶链反应检测衰老相关基因p16INK4a mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测P16INK4a蛋白的表达.结果：免疫磁性分选法分离纯化的Sca-1＋ HSC/HPC纯度可达87.33%±1.25%.衰老组细胞SA-β-Gal染色阳性率和G1期细胞比例高于对照组,生成CFU-Mix数低于对照组,衰老组P16INK4a mRNA及蛋白的表达水平较对照组上调.结论：t-BHP能有效诱导Sca-1＋ HSC/HPC衰老,其机制可能与调节P16INK4a mRNA及蛋白的表达有关.

关键词：造血干/祖细胞衰老三丁基过氧化氢 P16^INK4a

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三丁基过氧化氢通过调控细胞周期诱导Sca-1^+造血干/祖细胞衰老

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第三军医大学学报 2011年第18期33卷 1893-1896页

作者：周玥姜蓉王萍杨斌姚欣刘典锋王亚平重庆医科大学组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的探讨三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导Sca-1+造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的细胞周期调控机制。方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC后分为对照组(常规培养细胞),衰老模型组(用t-BHP复制细胞体外衰老模型)。通过衰老相关β-半乳... 详细信息

目的探讨三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导Sca-1+造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的细胞周期调控机制。方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC后分为对照组(常规培养细胞),衰老模型组(用t-BHP复制细胞体外衰老模型)。通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养观察t-BHP诱导Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学作用;RT-PCR检测衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达。Western blot检测细胞周期调控蛋白P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1、Cyclin E、CDK4、CDK2的表达。结果免疫磁性分选法分离纯化的Sca-1+HSC/HPC纯度可达(87.33±1.25)%。衰老组细胞SA-β-Gal染色阳性率为(57.9±4.2)%,高于对照组[(9.1±2.4)%,P<0.05],G0/G1期细胞比例为(87.53±4.03)%,高于对照组[(72.26±3.40)%,P<0.05],生成造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)数为(1.5±1.2)/104,低于对照组[(9.8±2.1)/104,P<0.05]。与对照组比较,衰老组细胞p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA及P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1蛋白表达上调(P<0.05),Cyclin E、CDK4、CDK2蛋白表达下调(P<0.05)。结论 t-BHP能有效诱导Sca-1+HSC/HPC衰老,其机制可能与调控细胞周期调控分子的表达有关。

关键词：造血干/祖细胞衰老三丁基过氧化氢细胞周期调控分子

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人参皂苷Rg1基于SIRT6/NF-κB信号通路对辐射致造血干/祖细胞衰老的保护作用

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中草药 2017年第21期48卷 4497-4501页

作者：李渊周玥王亚平何颖红丁继超韩艳军王翠丽大理大学组织胚胎学教研室云南省细胞生物学重点实验室云南大理671000 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的探讨去乙酰化酶SIRT6/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路在人参皂苷Rg_1抗辐射致造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)衰老中的作用。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg_1组。给予模型组和人参皂苷Rg_1组小鼠全身一次性6.5... 详细信息

目的探讨去乙酰化酶SIRT6/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路在人参皂苷Rg_1抗辐射致造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)衰老中的作用。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg_1组。给予模型组和人参皂苷Rg_1组小鼠全身一次性6.5 Gy ^(60)Coγ线照射,人参皂苷Rg_1组于照射前ip人参皂苷Rg_1 20 mg/kg,每天1次,连续给药7 d,照射后继续ip等剂量人参皂苷Rg_1 7 d。给药结束后第2天,外周血血象指标检测确定人参皂苷Rg_1促进造血恢复情况;免疫磁性分选法分离纯化各组Sca-1+HSC/HPC,造血祖细胞混合性集落(CFU-Mix)培养、细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析人参皂苷Rg_1抗辐射损伤致Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学作用;荧光定量PCR及Western blotting法检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果辐射后,与对照组相比,模型组小鼠外周血象恢复缓慢,Sca-1+HSC/HPC出现细胞衰老特征,G0/G1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降,SIRT6 mRNA及蛋白表达下调,NF-κB mRNA及蛋白表达上调。与模型组比较,人参皂苷Rg_1组小鼠白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)数量增高,Sca-1+HSC/HPC G_0/G_1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高,SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调。结论人参皂苷Rg_1可通过调控SIRT6/NF-κB信号通路发挥抗辐射致Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。

关键词：人参皂苷Rg1 辐射造血干/祖细胞抗衰老 SIRT6 核转录因子-κB

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人参皂苷Rg_1诱导人白血病K562细胞复制性衰老的机制

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解剖学报 2012年第4期43卷 473-478页

作者：李建平蔡世忠刘俊周玥刘典锋王亚平顾恒伟重庆医科大学组织学胚胎学教研室干细胞与组织工程学研究室重庆400016

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞复制性衰老特征性变化。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选Rg1对K562细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,以此浓度和作用时间诱导K562细胞衰老。流式细胞术检测Rg1对细胞增殖周期的影响;衰老相关β... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞复制性衰老特征性变化。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选Rg1对K562细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,以此浓度和作用时间诱导K562细胞衰老。流式细胞术检测Rg1对细胞增殖周期的影响;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率;Southern blotting检测端粒长度;Western blotting检测复制性衰老信号通路相关P21、P53与Rb蛋白表达;透射电镜观察人白血病K562细胞衰老超微形态学改变。结果 Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,其最佳作用浓度为20μmol/L,时间为48h;诱导后的K562细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加(P<0.05);复制性衰老通路相关蛋白P21、P53和Rb表达上调(P<0.05);端粒长度缩短加速(P<0.05);经诱导细胞呈现胞体增大,溶酶体体积增大、数目增多,线粒体体积增大等衰老形态学变化。结论 Rg1可能经由p53-p21-Rb信号通路诱导K562细胞呈现复制性衰老特征。

关键词：人参皂苷Rg1 白血病 K562细胞株复制性衰老衰老相关β-半乳糖苷酶染色四甲基偶氮唑盐法

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骨髓间充质干细胞移植对大鼠溃疡性结肠炎的修复

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第四军医大学学报 2009年第23期30卷 2761-2764页

作者：段征陈晓云徐艳华姜蓉汪维伟重庆医科大学组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:观察移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠病变的修复.方法:分离培养、荧光标记SD大鼠BMSCs.A,B,C组大鼠制作UC模型,D组为非模型组.4组大鼠均经尾静脉注射1 mL液体:A组为生理盐水;B,D组为BMSCs;C组为加表皮生长... 详细信息

目的:观察移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠病变的修复.方法:分离培养、荧光标记SD大鼠BMSCs.A,B,C组大鼠制作UC模型,D组为非模型组.4组大鼠均经尾静脉注射1 mL液体:A组为生理盐水;B,D组为BMSCs;C组为加表皮生长因子(EGF)的BMSCs.移植后3,7,14 d各处死5只大鼠,荧光显微镜下观察荧光标记BMSCs在结肠的分布,光镜观察结肠病变以及TNF-α和IL-10的表达.结果:移植第3日各组均可见BMSCs分布于结肠黏膜,病灶处多于正常结肠黏膜.移植第14日,B,C组结肠BMSCs高于D组(P<0.05);与A组比较,B,C组结肠黏膜高表达IL-10,低表达TNF-α,其黏膜损伤修复程度也明显优于A组.B,C组间差异不明显(P>0.05).结论:移植BMSCs可促进UC大鼠结肠损伤的修复.单次给予EGF不能促进BMSCs向病灶的迁移和损伤的修复.

关键词：骨髓间充质干细胞移植溃疡性结肠炎

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衰老模型骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖分化

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基础医学与临床 2016年第1期36卷 12-18页

作者：景鹏伟胡文煦宋小英张岩岩贾道勇王亚平王璐重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的研究衰老骨髓基质细胞对骨髓造血细胞增殖分化能力的影响,为阐述机体造血微环境衰老对造血干/祖细胞增殖的影响提供实验依据。方法全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓基质细胞,分为对照组和衰老组。衰老组:常规培养基内加入30 mg/m L D-... 详细信息

目的研究衰老骨髓基质细胞对骨髓造血细胞增殖分化能力的影响,为阐述机体造血微环境衰老对造血干/祖细胞增殖的影响提供实验依据。方法全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓基质细胞,分为对照组和衰老组。衰老组:常规培养基内加入30 mg/m L D-半乳糖作用48 h。CCK-8法测定BMSCs增殖;流式细胞术分析细胞周期;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老BMSCs百分率;Western blot检测P16、P21和P53蛋白表达。骨髓造血细胞与BMSCs共培养,集落计数检测髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)增殖分化。ELISA检测BMSCs培养上清液中IL-1β、GM-CSF和SCF含量;DCFH-DA流式荧光检测BMSC活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测BMSCs内过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与对照组相比,D-半乳糖诱导BMSCs衰老,细胞阻滞于G0/G1期(P<0.01),增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性率升高(P<0.01);衰老相关蛋白P16、P21和P53表达明显上调(P<0.01)。与衰老BMSCs共培养的骨髓造血细胞增殖分化能力减弱。衰老BMSCs内ROS、MDA氧化损伤指标上升,SOD抗氧化指标下降(P<0.01);BMSCs培养上清液IL-1β、GM-CSF和SCF含量明显下降(P<0.01)。结论衰老骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖、分化能力,其机制可能与骨髓基质细胞氧化损伤,分泌活性因子改变有关。

关键词：衰老造血微环境骨髓基质细胞造血细胞,增殖分化

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人参皂苷Rg1缓解D-半乳糖致衰老大鼠脾损伤

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基础医学与临床 2015年第10期35卷 1308-1313页

作者：张晶邵月张力恒冉瑞图孙嘉政张岩岩贾道勇张梦思王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的探讨人参皂苷Rg1对D-半乳糖致衰老大鼠脾组织结构与功能的影响及其机制。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、衰老模型组(D-半乳糖120 mg/kg,qd×42 d)、Rg1干预组(建模,第15天起Rg1 20 mg/kg,qd×28 d)、Rg1对照组(0.9%氯化... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1对D-半乳糖致衰老大鼠脾组织结构与功能的影响及其机制。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、衰老模型组(D-半乳糖120 mg/kg,qd×42 d)、Rg1干预组(建模,第15天起Rg1 20 mg/kg,qd×28 d)、Rg1对照组(0.9%氯化钠注射液+Rg1)。取脾脏测定脾指数,石蜡切片观察脾脏显微形态,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测脾细胞衰老,CCK-8检测脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,ELISA检测IL-2、IL-6和晚期糖基化终产物(AGEs)含量,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS),酶法检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,Western blot检测细胞衰老相关蛋白P53、P21及Rb的表达。结果与衰老模型组比较,Rg1干预组大鼠脾指数、脾脏白髓面积比及脾细胞增殖能力提高(P<0.05);脾细胞分泌IL-2、IL-6水平和SOD活性明显增强(P<0.01);脾细胞的SA-β-Gal阳性率、ROS和MDA含量下降(P<0.01);AGEs下降(P<0.05);P53、P21及RB蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1能缓解D-半乳糖致衰大鼠脾损伤,其机制可能与抑制氧化损伤和下调P53-P21-RB信号通路有关。

关键词：人参皂苷Rg1 衰老模型脾脏大鼠

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包皮成纤维细胞的生物学特性研究

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重庆医科大学学报 2009年第1期34卷 41-44页

作者：黎晓莉张雁吴宏重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的：探讨人包皮成纤维细胞的生物学特性，为人胚胎生殖细胞（Human embryonic germ *** cell）长期体外培养打下基础。方法：探索分离包皮成纤维细胞的方法；采用免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术等对人包皮成纤维细胞进行生长形态... 详细信息

目的：探讨人包皮成纤维细胞的生物学特性，为人胚胎生殖细胞（Human embryonic germ *** cell）长期体外培养打下基础。方法：探索分离包皮成纤维细胞的方法；采用免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术等对人包皮成纤维细胞进行生长形态观察，纯度鉴定，生长曲线及细胞周期检测，并就不同浓度丝裂霉素作用不同时间对人包皮成纤维细胞生长的影响进行研究。结果：0．25％胰酶，4℃消化过夜（12～16h）较37℃，5％CO2孵育2h更容易分离表皮和真皮；包皮成纤维细胞波形蛋白染色呈强阳性，纯度达95％以上；细胞生长曲线没有明显的滞留期，在1-6d处于快速增殖期，第7d开始处于平台期；细胞周期大多数处于Go／G，期，细胞周期与细胞生长曲线保持一致。丝裂霉素抑制包皮成纤维细胞增殖的适宜浓度及时间为12．5ug／ml作用2．5h。结论：包皮成纤维细胞的生物学特性表明其可以作为人EG细胞长期体外培养的饲养层。

关键词：生物学特性包皮成纤维细胞饲养层

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当归多糖对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用

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第四军医大学学报 2009年第22期30卷 2549-2552页

作者：关雪晶杨慧张雁吴宏重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的:探讨当归多糖(APS)对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用.方法:采用细胞计数法比较羟乙基淀粉(HES)、明胶、淋巴细胞分离液(Ficoll)分离脐血单个核细胞(MNC)的回收率.应用细胞计数法、台盼蓝拒染法、集落形成实验和流式细胞术,检测冻存1... 详细信息

目的:探讨当归多糖(APS)对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用.方法:采用细胞计数法比较羟乙基淀粉(HES)、明胶、淋巴细胞分离液(Ficoll)分离脐血单个核细胞(MNC)的回收率.应用细胞计数法、台盼蓝拒染法、集落形成实验和流式细胞术,检测冻存1,3,6mo脐血MNC的生物学活性,将脐血MNC与不同浓度APS共培养24h后冻存,1mo后复苏,观察APS对脐血MNC抗冷冻损伤的作用.结果:HES法、明胶法的MNC回收率均大于85%,显著高于Ficoll法(50.00±4.00)%(P<0.05);冻存1,3,6mo组MNC,CFU-Mix,CD34+细胞回收率及台盼蓝拒染率差异均无显著性,且脐血MNC的损伤与冻存时间不相关.APS50,100,200,400mg/L不同浓度APS组MNC,CFU-Mix回收率和台盼蓝拒染率除APS400mg/L组下降外,其余各组明显上升(P<0.05);各组组间CD34+细胞回收率差异无显著性.结论:APS可有效提高脐血造血细胞的抗冷冻损伤能力.

关键词：当归多糖脐血造血细胞冷冻保存

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当归多糖对小鼠骨髓和外周血单个核细胞黏附分子表达及黏附功能的影响

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第四军医大学学报 2009年第23期30卷 2753-2756页

作者：张雁杜小丽吴宏黎晓莉重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的:研究当归多糖(APS)对小鼠骨髓和外周血单个核细胞(MNC)黏附分子表达及黏附功能的影响,旨在为APS在造血调控和动员方面的机制提供实验依据.方法:流式细胞术检测APS对小鼠骨髓和外周血MNC CD49d和CD44的表达影响;MTT法检测APS体内外... 详细信息

目的:研究当归多糖(APS)对小鼠骨髓和外周血单个核细胞(MNC)黏附分子表达及黏附功能的影响,旨在为APS在造血调控和动员方面的机制提供实验依据.方法:流式细胞术检测APS对小鼠骨髓和外周血MNC CD49d和CD44的表达影响;MTT法检测APS体内外作用对小鼠骨髓和外周血MNC黏附功能的影响.结果:APS(4 mg/kg)体内作用后骨髓和外周血MNC表面CD49d表达的阳性率均明显下降(P<0.01);骨髓MNC表面CD44也有所下降(P<0.05),外周血MNC表面CD44无明显变化(P>0.05).APS(4 mg/kg)体内作用后,小鼠骨髓和外周血MNC对纤维连接蛋白(FN)的黏附率明显低于NS组(P<0.01),且APS组与rhG-CSF组比较无显著性差异(P>0.05);除50 mg/L APS组以外各浓度实验组均能使小鼠骨髓和外周血MNC对FN的黏附率减弱(P<0.05),同一APS浓度体外作用后各作用时间点的骨髓和外周血MNC黏附率均无明显差异(P>0.05).结论:APS能降低骨髓的CD49d和CD44及外周血的CD49d的表达,且体内外作用均能降低骨髓和外周血MNC对FN的黏附率.

关键词：当归多糖粘附分子 CD49d CD44 黏附功能 FN

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