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SIRT1/NF-κB信号轴在人参皂苷Rg_1延缓D-半乳糖致衰老模型大鼠造血干/祖细胞衰老过程中的作用

中草药 2016年第22期47卷 4016-4020页

作者：李渊周玥王亚平王建伟何颖红丁继超赵文珍杨勇琴王慧杰大理大学组织学与胚胎学教研室云南省细胞生物学重点实验室云南大理671000 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨SIRT1／NF-κB信号轴在人参皂苷Rgl对抗衰老模型大鼠造血干／祖细胞衰老中的作用。方法6～8周雄性SD大鼠50只，随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rgl对照组、人参皂苷Rgl治疗组和人参皂苷Rg，预防组，每组10只。以连续42 d sc D... 详细信息

目的探讨SIRT1／NF-κB信号轴在人参皂苷Rgl对抗衰老模型大鼠造血干／祖细胞衰老中的作用。方法6～8周雄性SD大鼠50只，随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rgl对照组、人参皂苷Rgl治疗组和人参皂苷Rg，预防组，每组10只。以连续42 d sc D-半乳糖（D-gal）制备衰老动物模型，人参皂苷Rg1各组ip给药不同时间，药物注射完成第2天，免疫磁性分选法分离纯化各组Sca-1^＋造血干／祖细胞（HSC／HPC），衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色、流式细胞周期分析和造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）培养观察人参皂苷Rg1对Sca-1^＋ HSC／HPC抗衰老的生物学作用。荧光定量PCR及Western blotting检测衰老调控分子SIRTl、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果与模型组比较，人参皂苷Rgl治疗组和预防组SA-β-Gal染色阳性率、G0／G1期细胞比例下降，生成CFU-Mix数增高，SIRTlmRNA及蛋白表达上调，NF-κB mRNA及蛋白表达下调；人参皂苷Rgl预防组各指标变化均较人参皂苷Rgl治疗组明显。结论SIRTl／NF-κB信号轴在人参皂苷Rgl对抗D-gal致衰老模型大鼠HSC／HPC衰老过程中发挥重要作用，人参皂苷Rgl具有抗HSC／HPC衰老作用。

关键词：人参皂苷Rgl 去乙酰化酶沉默调节因子1 核转录因子-κB 造血干/祖细胞衰老

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人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植中对延缓细胞衰老的作用与去乙酰化酶6/核因子-κB信号轴的关系

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解剖学报 2015年第5期46卷 623-628页

作者：周玥王亚平王建伟丁继超云南省大理学院组织学胚胎学教研室云南大理671000 重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室重庆400016

目的探讨人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中对抗细胞衰老的作用与去乙酰化酶6/核因子-κB(SIRT6/NF-κB)信号轴的关系。方法免疫磁性分选法分离纯化雄性供体小鼠干细胞抗原阳性(Sca-1+)HSC/HPC,连续移植3代构建HSC/HPC衰... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中对抗细胞衰老的作用与去乙酰化酶6/核因子-κB(SIRT6/NF-κB)信号轴的关系。方法免疫磁性分选法分离纯化雄性供体小鼠干细胞抗原阳性(Sca-1+)HSC/HPC,连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。60Coγ射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组,照射对照组;衰老模型组;Rg1治疗衰老组;Rg1预防衰老组。造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析Rg1体内调控Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。实时定量PCR及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果连续移植后受体鼠Sca-1+HSC/HPC出现细胞衰老特征,随移植代数的增加,Sca-1+HSC/HPC G0/G1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降。与同代衰老模型组相比,Rg1治疗衰老组及Rg1预防衰老组受体鼠Sca-1+HSC/HPC G0/G1期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高;SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调;Rg1预防衰老组各指标变化均较Rg1治疗衰老组明显。结论 Rg1可能通过调控SIRT6/NF-κB信号轴发挥其对抗连续移植过程中Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。

关键词：人参皂苷Rg1 去乙酰化酶6 核因子-κB 干细胞抗原阳性造血干/祖细胞衰老实时定量PCR 免疫印迹法小鼠

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急性低剂量辐射对小鼠肝脏及骨髓DNA甲基化的影响

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基础医学与临床 2014年第7期34卷 933-938页

作者：陈凤鸣吴宏张梦关雪晶何晓莉蒋林重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学药学院重庆400016

目的观察低剂量辐射(LDR)对小鼠肝脏及骨髓单个核细胞(BMNC)DNA甲基化及甲基化转移酶的影响。方法直线加速器一次性全身X射线1.0 Gy均匀照射C57BL/6小鼠,建立辐射损伤模型。并于照射后1、3、7和14 d取眼球血进行外周血细胞计数,处死小... 详细信息

目的观察低剂量辐射(LDR)对小鼠肝脏及骨髓单个核细胞(BMNC)DNA甲基化及甲基化转移酶的影响。方法直线加速器一次性全身X射线1.0 Gy均匀照射C57BL/6小鼠,建立辐射损伤模型。并于照射后1、3、7和14 d取眼球血进行外周血细胞计数,处死小鼠提取肝脏及BMNC,高效液相色谱法检测全基因组DNA甲基化的水平,Western blot检测DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、DNMT3A及DNMT3B的水平。结果与正常组相比,辐射组白细胞及血小板计数均明显降低(P<0.05),白细胞在1 d时降至最低,而血小板在3 d时降至最低,14 d仍未恢复正常。辐射组肝及BMNC全基因组DNA甲基化水平下降(P<0.05),其后均逐渐恢复正常。与正常组相比,辐射组肝脏及BMNC DNMT1及DNMT3A表达显著升高(P<0.05),14 d时仍未恢复至正常,DNMT3B的表达也显著升高(P<0.05),但在7 d时已恢复至正常。结论低剂量辐射可导致小鼠肝脏及骨髓DNA甲基化水平的降低及DNMTs表达的升高。

关键词：低剂量辐射 DNA甲基化 DNA甲基化转移酶表观遗传学

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D-半乳糖诱导衰老小鼠睾丸结构与功能变化及其氧化应激相关机制

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中国组织化学与细胞化学杂志 2016年第6期25卷 476-481,500页

作者：汪子铃邱竹陈雄斌陈粼波侯吉颖姚辉向玥宋小英熊丽溶夏婕妤王璐王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的建立D-半乳糖(D-gal)致小鼠衰老模型,探讨睾丸结构与功能变化及相关机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为衰老组和对照组。衰老组小鼠皮下注射D-gal;对照组等时等量注射生理盐水。模型复制完成第2d,采集小鼠内眦静脉血测定血清睾酮水平... 详细信息

目的建立D-半乳糖(D-gal)致小鼠衰老模型,探讨睾丸结构与功能变化及相关机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为衰老组和对照组。衰老组小鼠皮下注射D-gal;对照组等时等量注射生理盐水。模型复制完成第2d,采集小鼠内眦静脉血测定血清睾酮水平;取小鼠睾丸测定睾丸指数;石蜡切片HE染色观察睾丸组织形态学;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测生精细胞衰老;TUNEL法检测生精细胞凋亡;制备睾丸组织匀浆上清,ELISA检测TNF-α、IL-1β、和IL-6的水平;硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量;酶学法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;ABTS法检测总抗氧化能力(TAC);Western blotting检测衰老相关蛋白p21与p53表达水平。结果衰老模型组小鼠血清睾酮水平显著下降,睾丸脏器指数无明显差异,生精小管结构紊乱,生精细胞病理损伤明显,SA-β-Gal染色阳性的生精细胞百分率上升,细胞凋亡指数上升,睾丸匀浆上清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著上升,SOD活性、TAC能力显著降低,MDA含量上升,睾丸组织中衰老相关蛋白:p21与p53表达水平显著提高。结论 D-gal建立的衰老动物模型可见睾丸形态结构与功能出现衰老的生物学表现,其机制可能与氧化应激损伤及p21/p53通路激活有关。

关键词： D-半乳糖衰老睾丸细胞凋亡氧化应激 p21 p53

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当归多糖延缓5-氟尿嘧啶所致人骨髓基质细胞衰老

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基因组学与应用生物学 2017年第5期36卷 1775-1782页

作者：熊丽溶宋小英景鹏伟陈雄斌候吉颖姚辉王亚平王璐重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室组织学胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学病理学教研室重庆400016

探讨5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对人骨髓基质细胞(human bone marrow stromal cell,h BMSC)的损伤作用机制;当归多糖(angelica sinensis polysaccharides,ASP)对5-氟尿嘧啶损伤h BMSC的保护作用。采用CCK-8法测定人骨髓基质细胞株HS-5对不同浓度5-FU(0μg/mL,12.5μg/mL,25μg/mL,50μg/mL和100μg/mL)的敏感性。流式细胞术分析细胞周期;β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞;DCFH-DA荧光染色流式检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;酶学法检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;流式细胞术分析γH2AX表达水平;ELISA检测8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHd G)的含量;5-FU 12.5~100μg/mL抑制HS-5增殖,抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性。5-FU组较与对照组相比细胞周期发生G1期阻滞,β-半乳糖苷酶染色阳性率升高;胞内ROS含量显著升高;细胞抗氧化能力降低;γH2AX和8-OHd G表达水平增高。ASP治疗组较5-FU组细胞相比细胞周期阻滞减少;衰老细胞比率降低;胞内ROS含量显著降低;细胞抗氧化能力升高;DNA损伤指标表达水平降低。5-FU可通过增强氧化应激诱发DNA损伤致骨髓基质细胞衰老;ASP对骨髓基质细胞损伤有保护作用,其机制可能与ASP降低损伤后骨髓基质细胞氧化应激减轻DNA损伤从而延缓骨髓基质细胞衰老有关。

关键词：骨髓基质细胞 5-氟尿嘧啶当归多糖衰老氧化应激

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当归多糖减轻5-氟尿嘧啶对骨髓基质细胞成骨分化的抑制

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中国细胞生物学学报 2020年第3期42卷 435-443页

作者：齐嵘嘉肖含先之汪子铃邓方芳吴奇王亚平王璐重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

该实验探讨当归多糖(ASP)对改善5-氟尿嘧啶(5-FU)所致人骨髓基质细胞成骨与成脂分化失衡的作用。人骨髓基质细胞株HS-5体外培养分为:对照组、ASP组、5-FU组、5-FU+ASP组和5-FU+LiCl组。CCK-8检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡;成... 详细信息

该实验探讨当归多糖(ASP)对改善5-氟尿嘧啶(5-FU)所致人骨髓基质细胞成骨与成脂分化失衡的作用。人骨髓基质细胞株HS-5体外培养分为:对照组、ASP组、5-FU组、5-FU+ASP组和5-FU+LiCl组。CCK-8检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡;成骨与成脂诱导分化实验检测细胞成骨与成脂分化能力,Western blot检测Runx2、PPARγ和β-catenin蛋白表达,RT-PCR检测Runx2、OCN、BMP-2、Osterix、PPARγ和β-catenin mRNA表达。结果表明,与对照组相比5-FU作用HS-5细胞后细胞增殖抑制、凋亡率增加,成骨分化能力减弱、成脂分化能力增强,分化相关信号β-catenin蛋白和mRNA表达降低;相比5-FU组,ASP预处理可减少细胞凋亡;恢复细胞成骨分化能力,成骨相关因子Runx2、OCN、BMP-2和Osterix表达升高;降低细胞成脂分化能力,成脂相关因子PPARγ表达减少;β-catenin信号分子表达增加。结果提示,当归多糖可维持5-FU作用后骨髓基质细胞朝成骨方向分化的能力,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

关键词： 5-氟尿嘧啶骨髓基质细胞成骨分化 Wnt/β-catenin信号通路当归多糖

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人PGI基因siRNA慢病毒质粒的构建及对白血病细胞增殖的影响

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第三军医大学学报 2013年第1期35卷 20-23页

作者：赵亮李静魏强游智梅夏菁李丹阳陈地龙重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的构建共表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和人磷酸葡萄糖异构酶(phosphoglucose isomerase,PGI)基因的慢病毒载体,初步探讨干扰人PGI基因对白血病细胞增殖的影响。方法 RT-PCR、Westernblot检测人单核细胞、K562... 详细信息

目的构建共表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和人磷酸葡萄糖异构酶(phosphoglucose isomerase,PGI)基因的慢病毒载体,初步探讨干扰人PGI基因对白血病细胞增殖的影响。方法 RT-PCR、Westernblot检测人单核细胞、K562、KG1-α、HL-60细胞中PGI mRNA和蛋白表达水平,筛选高表达PGI的白血病细胞系;构建人PGI基因siRNA的慢病毒载体及阴性对照,经293T细胞包装后,获得可表达人PGI基因siRNA的慢病毒载体及阴性对照;分别使用重组病毒(干扰组)、原始病毒(阴性对照组)和等量PBS(空白对照组)转染白血病KG1-α细胞,筛选稳定转染细胞株。RT-PCR和Western blot检测干扰组、阴性对照组及空白对照组KG1-α细胞PGI基因表达水平;CCK-8检测各组细胞增殖情况并作生长曲线。结果 PGI基因在白血病KG1-a细胞中高表达;成功构建了稳定低表达PGI的白血病细胞株(KG1-α-siPGI);低表达PGI基因的KG1-α细胞增殖能力较空白对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了低表达PGI基因的白血病KG1-α细胞株,干扰PGI基因的表达能够抑制KG1-α细胞的生长。

关键词：白血病慢病毒载体 RNA干扰细胞增殖

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胼胝体额区有髓神经纤维髓鞘超微结构老年改变的体视学研究

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第三军医大学学报 2011年第23期33卷 2476-2479页

作者：卢芳张蕾卢伟徐瑲姜蓉龚霞闵琦埕唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的探讨大鼠胼胝体额区有髓神经纤维髓鞘超微结构的老年性改变。方法运用电子显微镜和三维体视学方法分别对年轻组(6月龄)、中老年组(18月龄)和老年组(27月龄)雌性Long-Evans大鼠大脑胼胝体额区有髓神经纤维超微结构进行定量研究。结... 详细信息

目的探讨大鼠胼胝体额区有髓神经纤维髓鞘超微结构的老年性改变。方法运用电子显微镜和三维体视学方法分别对年轻组(6月龄)、中老年组(18月龄)和老年组(27月龄)雌性Long-Evans大鼠大脑胼胝体额区有髓神经纤维超微结构进行定量研究。结果年轻组、中老年组和老年组的有髓神经纤维轴突平均直径(内径)、有髓神经纤维平均直径(外径)、平均内周长、平均外周长、髓鞘平均厚度均未见显著性改变。将有髓神经纤维髓鞘厚度按<0.2μm、0.2～0.4μm(不含0.4,以下类推)、0.4～0.6μm、0.6～0.8μm、0.8～1.0μm、≥1.0μm 6个段分别进行统计分析,结果显示,在0.2～0.4μm直径段内,中老年组和老年组髓鞘厚度较年轻组均存在显著降低(P<0.05);在0.4～0.6μm直径段内,老年组髓鞘厚度较年轻组存在显著性降低(P<0.05);在0.6～0.8μm直径段内,老年组髓鞘厚度较中老年组显著性降低(P<0.05)。结论胼胝体额区有髓神经纤维尤其是小直径的有髓神经纤维髓鞘厚度存在显著老年性降低。

关键词：有髓神经纤维髓鞘胼胝体额区体视学

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当归多糖对D-半乳糖致衰老小鼠睾丸的保护作用

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解剖学报 2019年第4期50卷 506-511页

作者：邱竹姜蓉汪子铃陈粼波陈雄斌王璐黄国宁王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室/组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆市妇幼保健院生殖与遗传研究所重庆400013

目的探讨当归多糖(ASP)对D-半乳糖(D-Gal)所致衰老小鼠睾丸的保护作用与机制。方法C57BL/6 J雄性小鼠40只,随机分为对照组、ASP对照组、衰老模型组ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组:小鼠颈背部皮下注射D-Gal(120 mg/kg,qd×42);... 详细信息

目的探讨当归多糖(ASP)对D-半乳糖(D-Gal)所致衰老小鼠睾丸的保护作用与机制。方法C57BL/6 J雄性小鼠40只,随机分为对照组、ASP对照组、衰老模型组ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组:小鼠颈背部皮下注射D-Gal(120 mg/kg,qd×42);对照组小鼠皮下注射等时与等量生理盐水;ASP对照组小鼠皮下注射等量生理盐水15 d,第16天开始腹腔注射ASP(140 mg/kg,qd×27);ASP衰老模型组小鼠建立方法同衰老模型组小鼠,第16天开始腹腔注射ASP(同ASP对照组)。模型复制完成第2天,采集各组小鼠内眦静脉血测定血清睾酮水平;取睾丸测定脏器指数;石蜡切片,HE染色观察睾丸组织学形态;做冷冻睾丸组织切片,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察睾丸组织细胞衰老情况;制备睾丸组织匀浆上清液,酶学法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,2,2’-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法检测总抗氧化能力(T-AOC),硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量;Western blotting检测衰老相关蛋白P53、P21表达水平。结果各组间睾丸湿重及睾丸器官指数无明显差异,但衰老模型组小鼠睾丸组织结构损伤明显,生精小管的细胞层数减少,生精细胞出现退变,睾丸间质细胞明显减少;血清睾酮水平显著降低;SA-β-Gal染色阳性细胞密度显著增加;睾丸组织匀浆中SOD活性及T-AOC显著降低,MDA含量显著升高;P53、P21蛋白表达显著升高。与衰老模型组比较,注射ASP干预衰老过程,睾丸组织学结构损伤明显减轻,生精细胞退变与睾丸间质细胞减少均不明显;血清睾酮水平降低不明显;SA-β-Gal染色阳性细胞密度减少;SOD活性和T-AOC增高,MDA含量降低;P53、P21蛋白表达显著降低。结论 ASP具有拮抗致衰剂Dgal对睾丸的损伤作用,其机制可能与ASP抑制氧化应激损伤及抑制衰老相关基因表达有关。

关键词：当归多糖 D-半乳糖睾丸保护氧化应激免疫印迹法衰老小鼠

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人参总皂甙对白血病细胞KG1α增殖、凋亡的影响

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第三军医大学学报 2010年第24期32卷 2599-2603页

作者：刘晓岩李静王建伟姜蓉陈地龙重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的探讨人参总皂甙（total saponins of panax ginseng,TSPG）对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖的影响。方法取对数生长期的KG1α细胞,调整密度为5×108/L,空白对照组予以常规培养;人参总皂甙TSPG组分别加入0.1、0.2、0.4、0.6、... 详细信息

目的探讨人参总皂甙（total saponins of panax ginseng,TSPG）对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖的影响。方法取对数生长期的KG1α细胞,调整密度为5×108/L,空白对照组予以常规培养;人参总皂甙TSPG组分别加入0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 g/L TSPG。采用MTT比色法测定细胞存活率,瑞氏染色法以及光电镜观察细胞形态学改变。流式细胞仪测定细胞周期分布的变化以及细胞的凋亡率。免疫细胞化学的方法检测细胞中β-catenin、NF-κB p65蛋白表达的变化。RT-PCR半定量检测细胞中β-catenin mRNA和NF-κB p65 mRNA水平的变化。结果人参总皂甙TSPG在体外对KG1α增殖具有明显抑制作用。在0.1~0.8 g/L TSPG浓度范围内,其抑制作用呈浓度依赖性,在浓度0.4 g/L处达到细胞的半数抑制率,且在48 h抑制率达到高峰。0.4 g/L TSPG作用48 h后,可见细胞分散生长,数量明显减少;细胞明显分化或凋亡,产生核分裂象,胞质中产生凋亡小体以及空泡;与对照组相比,加药组KG1α细胞周期分布无明显变化（P〉0.05）;与对照组相比,加药组细胞凋亡率显著增高,其改变具有统计学意义（P〈0.05）;与对照组相比,加药组细胞内β-catenin蛋白因子表达降低其表达区域由胞核向胞膜转移,NF-κB p65因子的表达也明显减弱其表达区域由胞核向胞膜转移;与对照组相比,加药组β-catenin和NF-κB p65 mRNA的水平降低,其改变具有统计学意义（P〈0.05）。结论 TSPG可抑制KG1α细胞增殖诱导细胞凋亡,且TSPG抑制KG1α细胞增殖的作用机制可能与其抑制β-catenin及NF-κB p65蛋白表达,降低β-catenin和NF-κB p65 mRNA的水平有关。

关键词：人参总皂甙 KG1α细胞增殖抑制凋亡

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