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解剖学杂志 2015年第4期38卷 392-392,449页

作者：孙嘉政张晶邵月张力恒冉瑞图贾道勇张梦思张岩岩王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室

目的:探讨人参皂苷Rg1对大鼠脾结构与功能的影响及其初步机制.方法:Rg1注射组取脾,测定脾指数;石蜡切片H-E染色观察脾组织结构,计算脾白髓占脾组织切片的比例;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测脾细胞衰老情况;分离脾细胞,CCK-... 详细信息

目的:探讨人参皂苷Rg1对大鼠脾结构与功能的影响及其初步机制.方法:Rg1注射组取脾,测定脾指数;石蜡切片H-E染色观察脾组织结构,计算脾白髓占脾组织切片的比例;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测脾细胞衰老情况;分离脾细胞,CCK-8检测其对刀豆蛋白A刺激的增殖能力;流式细胞术检测脾细胞增殖周期和细胞凋亡;ELISA检测脾细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-2(IL-2)与白细胞介素-6(IL-6)的能力和晚期糖基化终产物(AGEs)、细胞活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,免疫印迹检测细胞衰老相关蛋白p53、p21、Rb的变化.结果:注射人参皂苷Rg1可使大鼠脾指数增加,脾白髓面积增加,脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力提高,脾细胞S期比例提高,G1期及G2/M期比例相对下降,细胞凋亡减少,ROS、MDA水平降低,脾细胞分泌TNF-α、GM-CSF、IL-2与IL-6的能力增加,SOD活性提高,P21、P53、Rb蛋白表达下调.结论:人参皂苷Rg1具有保护脾结构和激活脾细胞功能的作用.

关键词：人参皂苷Rg1 脾结构功能大鼠

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包皮成纤维细胞的生物学特性研究

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重庆医科大学学报 2009年第1期34卷 41-44页

作者：黎晓莉张雁吴宏重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的：探讨人包皮成纤维细胞的生物学特性，为人胚胎生殖细胞（Human embryonic germ *** cell）长期体外培养打下基础。方法：探索分离包皮成纤维细胞的方法；采用免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术等对人包皮成纤维细胞进行生长形态... 详细信息

目的：探讨人包皮成纤维细胞的生物学特性，为人胚胎生殖细胞（Human embryonic germ *** cell）长期体外培养打下基础。方法：探索分离包皮成纤维细胞的方法；采用免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术等对人包皮成纤维细胞进行生长形态观察，纯度鉴定，生长曲线及细胞周期检测，并就不同浓度丝裂霉素作用不同时间对人包皮成纤维细胞生长的影响进行研究。结果：0．25％胰酶，4℃消化过夜（12～16h）较37℃，5％CO2孵育2h更容易分离表皮和真皮；包皮成纤维细胞波形蛋白染色呈强阳性，纯度达95％以上；细胞生长曲线没有明显的滞留期，在1-6d处于快速增殖期，第7d开始处于平台期；细胞周期大多数处于Go／G，期，细胞周期与细胞生长曲线保持一致。丝裂霉素抑制包皮成纤维细胞增殖的适宜浓度及时间为12．5ug／ml作用2．5h。结论：包皮成纤维细胞的生物学特性表明其可以作为人EG细胞长期体外培养的饲养层。

关键词：生物学特性包皮成纤维细胞饲养层

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衰老模型骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖分化

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基础医学与临床 2016年第1期36卷 12-18页

作者：景鹏伟胡文煦宋小英张岩岩贾道勇王亚平王璐重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的研究衰老骨髓基质细胞对骨髓造血细胞增殖分化能力的影响,为阐述机体造血微环境衰老对造血干/祖细胞增殖的影响提供实验依据。方法全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓基质细胞,分为对照组和衰老组。衰老组:常规培养基内加入30 mg/m L D-... 详细信息

目的研究衰老骨髓基质细胞对骨髓造血细胞增殖分化能力的影响,为阐述机体造血微环境衰老对造血干/祖细胞增殖的影响提供实验依据。方法全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓基质细胞,分为对照组和衰老组。衰老组:常规培养基内加入30 mg/m L D-半乳糖作用48 h。CCK-8法测定BMSCs增殖;流式细胞术分析细胞周期;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老BMSCs百分率;Western blot检测P16、P21和P53蛋白表达。骨髓造血细胞与BMSCs共培养,集落计数检测髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)增殖分化。ELISA检测BMSCs培养上清液中IL-1β、GM-CSF和SCF含量;DCFH-DA流式荧光检测BMSC活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测BMSCs内过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与对照组相比,D-半乳糖诱导BMSCs衰老,细胞阻滞于G0/G1期(P<0.01),增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性率升高(P<0.01);衰老相关蛋白P16、P21和P53表达明显上调(P<0.01)。与衰老BMSCs共培养的骨髓造血细胞增殖分化能力减弱。衰老BMSCs内ROS、MDA氧化损伤指标上升,SOD抗氧化指标下降(P<0.01);BMSCs培养上清液IL-1β、GM-CSF和SCF含量明显下降(P<0.01)。结论衰老骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖、分化能力,其机制可能与骨髓基质细胞氧化损伤,分泌活性因子改变有关。

关键词：衰老造血微环境骨髓基质细胞造血细胞,增殖分化

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短期丰富生存环境对中老年雌性大鼠海马结构及其内有髓神经纤维的影响

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解剖学报 2010年第2期41卷 219-223页

作者：仇玄卢伟杨姝李琛夏磊黄春霞杨俊卿唐勇重庆医科大学组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学生理学教研室重庆400016 重庆医科大学药理学教研室重庆400016

目的探讨短期丰富生存环境干预对中老年雌性大鼠海马结构及其内有髓神经纤维的影响。方法将20只14月龄的雌性SD大鼠随机分为丰富生存环境组和标准环境组,每组各10只,对丰富生存环境组的动物给予4个月丰富生存环境干预,标准环境组于普通... 详细信息

目的探讨短期丰富生存环境干预对中老年雌性大鼠海马结构及其内有髓神经纤维的影响。方法将20只14月龄的雌性SD大鼠随机分为丰富生存环境组和标准环境组,每组各10只,对丰富生存环境组的动物给予4个月丰富生存环境干预,标准环境组于普通标准环境下饲养4个月;然后每组各随机选取5只,采用Morris水迷宫对大鼠的空间学习能力进行测试,然后运用透射电子显微镜和体视学方法分别对大鼠大脑海马结构及其内有髓神经纤维进行定量研究。结果短期丰富生存环境组中老年雌性大鼠与标准环境组相比,其空间学习能力明显增强;丰富生存环境组海马结构内有髓神经纤维总长度和总体积分别显著增加了43.4%和47.4%,且有髓神经纤维总长度的增加主要是由于细小直径的有髓神经纤维长度增加所致。海马结构总体积和海马结构内有髓神经纤维直径未见改变。结论4个月丰富生存环境干预对于14月龄雌性大鼠空间学习能力、海马内有髓神经纤维均有显著性影响。

关键词：丰富生存环境空间学习能力 Morris水迷宫海马结构有髓神经纤维体视学雌性大鼠

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人参皂苷Rh_2(S)抑制HDAC6促白血病细胞凋亡作用研究

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中草药 2018年第24期49卷 5876-5881页

作者：刘泽洪陈益李静冉建华周鹏郭星娴吕艳伟陈地龙重庆医药高等专科学校生理教研室重庆401331 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学解剖教研室重庆400016 三峡医药高等专科学校重庆万州402120

目的研究人参皂苷Rh2(S)促白血病K562和KG1a细胞凋亡的机制。方法 CCK-8法检测人参皂苷Rh2(S)对细胞增殖的影响;镜下观察细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡;Western blotting法检测周期和凋亡相关蛋白以及组蛋白去乙酰... 详细信息

目的研究人参皂苷Rh2(S)促白血病K562和KG1a细胞凋亡的机制。方法 CCK-8法检测人参皂苷Rh2(S)对细胞增殖的影响;镜下观察细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡;Western blotting法检测周期和凋亡相关蛋白以及组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、热休克蛋白90(HSP90)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达。结果 CCK-8结果显示人参皂苷Rh2(S)对K562和KG1a细胞具有较明显的增殖抑制作用;FCM结果显示人参皂苷Rh2(S)能够将K562和KG1a细胞周期阻滞在G0/G1期,同时促进细胞凋亡;Westernblotting结果显示人参皂苷Rh2(S)能够抑制Bcl-2、Cyclin D1、HDAC6、HSP90、p-Akt和β-catenin蛋白的表达,促进Bax、Ac-α-tubulin和GSK-3β蛋白的表达。结论 Rh2(S)通过抑制HDAC6的表达导致HSP90的表达下降,进一步抑制Akt的活性,激活GSK-3β,最后抑制Wnt/β-catenin信号通路,促进白血病细胞凋亡。

关键词：人参皂苷Rh2(S) 凋亡白血病乙酰化修饰组蛋白去乙酰化酶6 热休克蛋白90 蛋白激酶B 糖原合成酶激酶-3 β-连环蛋白

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姜黄素诱导人髓母细胞瘤Daoy细胞自噬的实验研究

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重庆医科大学学报 2014年第3期39卷 332-336页

作者：刘桂元毛蜀何密斯马天明唐俐重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室、干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:观察姜黄素(Curcumin)诱导人髓母细胞瘤Daoy细胞自噬的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养人髓母细胞瘤Daoy细胞,不同浓度姜黄素作用24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖;荧光染色、RT-PCR和Western blot检测自噬相关蛋白Becl... 详细信息

目的:观察姜黄素(Curcumin)诱导人髓母细胞瘤Daoy细胞自噬的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养人髓母细胞瘤Daoy细胞,不同浓度姜黄素作用24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖;荧光染色、RT-PCR和Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达;RT-PCR和Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路中PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达。PI3K激动剂insulin处理细胞后,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达变化。结果:姜黄素明显抑制Daoy细胞的生长,呈时间-剂量依赖性。免疫荧光显示Beclin1和LC3在姜黄素处理组中的表达明显增强。姜黄素作用不同时间,Daoy细胞中Beclin1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的mRNA和蛋白水平均增高(mRNA:F=1 360.962、42.366,P=0.000、0.000;蛋白:F=32.723、11.847,P=0.001、0.008),而PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达受到明显抑制(F=329.662、80.638、183.536,P=0.000、0.000、0.000)。PI3K激动剂insulin不能有效阻断姜黄素引起的PI3K、p-Akt和p-mTOR的降低。结论:姜黄素诱导自噬抑制髓母细胞瘤Daoy细胞生长,其机制可能与上调自噬相关基因表达,抑制自噬负调控PI3k/Akt/mTOR信号通路有关。

关键词：姜黄素髓母细胞瘤自噬 PI3K Akt mTOR信号通路

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人参多糖对K562细胞基因表达谱的影响

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中草药 2011年第5期42卷 940-943页

作者：李建平何轩姜蓉李静左国伟雷翠蓉王亚平王建伟陈地龙重庆医科大学组织胚胎教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的利用基因表达谱芯片研究人参多糖对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法人参多糖处理K562细胞48 h后,分别提取给药组和对照组K562细胞总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用2种不同的荧光染料Cy3和Cy5进行线... 详细信息

目的利用基因表达谱芯片研究人参多糖对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法人参多糖处理K562细胞48 h后,分别提取给药组和对照组K562细胞总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用2种不同的荧光染料Cy3和Cy5进行线性扩增标记,与Illumina全基因组表达谱基因芯片杂交,采用生物信息学方法分析人参多糖处理后K562细胞基因表达谱的改变。结果共发现差异基因306个,其中上调基因220个,下调基因86个,并对其进行生物学功能分类。结论诱导肿瘤细胞分化是多基因作用的综合结果,筛选的基因对研究肿瘤发生、发展与逆转分化,以及寻找潜在的抗肿瘤药物作用靶点可能有意义。

关键词：人参多糖 K562细胞基因表达谱基因芯片抗肿瘤

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人参皂苷Rh_2通过自噬途径对KG1α细胞增殖和凋亡的影响

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中草药 2017年第2期48卷 305-311页

作者：刘小霞陈益熊伟李静陈地龙刘泽洪江津中心医院中医科重庆402260 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医药高等专科学校生理学教研室重庆401331

目的研究人参皂苷Rh_2(Rh_2)对人白血病细胞KG1α增殖的抑制作用,并从自噬凋亡角度来探讨其机制。方法采用CCK-8法检测Rh_2对KG1α细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态;吖啶橙染色观察R... 详细信息

目的研究人参皂苷Rh_2(Rh_2)对人白血病细胞KG1α增殖的抑制作用,并从自噬凋亡角度来探讨其机制。方法采用CCK-8法检测Rh_2对KG1α细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态;吖啶橙染色观察Rh_2对细胞自噬的影响;Western blotting和RT-PCR检测Rh_2对白血病细胞自噬重要蛋白和基因表达的影响;运用自噬抑制剂(3-MA)研究自噬对细胞增殖和凋亡的影响。结果 CCK-8显示Rh_2在低浓度时能有效抑制KG1α细胞增殖,且其抑制作用具有浓度和时间依赖性;FCM检测和Hoechest染色结果显示Rh_2能增加细胞的凋亡,使染色质呈凋亡形态改变;吖啶橙染色发现Rh_2组细胞绿色荧光增强,细胞出现大量的酸性自噬小泡;Western blotting和RT-PCR结果发现Rh_2上调Beclin-1、LC3A、LC3B、激活型Caspase-3表达和增加Bax/Bcl-2值,并激活MAPK、ATK、ERK信号通路;细胞自噬剂(3-MA)会削弱Rh_2对KG1α细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结论 Rh_2可能通过激活MAPK、ATK、ERK信号通路,诱导细胞自噬途径,从而抑制KG1α细胞增殖和促进其凋亡。

关键词：人参皂苷Rh2 白血病自噬凋亡 MAPK ATK ERK

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早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠海马结构内有髓神经纤维改变的体视学研究

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第三军医大学学报 2017年第8期39卷 760-766页

作者：赵振华晁凤蕾张蕾张毅周春妮蒋林肖倩罗艳敏黄维李常琼唐炜李桃唐勇重庆医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室、干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的探讨早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠海马结构内有髓神经纤维及髓鞘的改变。方法运用Morris水迷宫方法测试10月龄APP/PS1转基因AD小鼠和同月龄野生型小鼠的空间学习和记忆能力改变的情况;运用无偏体视... 详细信息

目的探讨早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠海马结构内有髓神经纤维及髓鞘的改变。方法运用Morris水迷宫方法测试10月龄APP/PS1转基因AD小鼠和同月龄野生型小鼠的空间学习和记忆能力改变的情况;运用无偏体视学方法结合透射电子显微镜技术对各组小鼠海马结构总体积,CA1和齿状回(dentate gyrus,DG)内有髓神经纤维的总长度和总体积,以及有髓神经纤维髓鞘总体积进行三维定量研究。结果 1与野生型小鼠相比,10月龄APP/PS1转基因AD小鼠的逃避潜伏期显著性增加(P<0.05),所在象限游泳时间百分比显著减少(P<0.01),而穿台次数差异无统计学意义(P>0.05);2与野生型小鼠相比,10月龄APP/PS1转基因AD小鼠海马体积、CA1体积、DG体积均显著性减小(P<0.05,P<0.01);3与同月龄野生型小鼠相比,10月龄APP/PS1转基因AD小鼠海马CA1区和DG内有髓神经纤维的总长度差异没有统计学意义(P>0.05),但是海马CA1区和DG内有髓神经纤维的总体积显著性减小(P<0.05),髓鞘总体积也显著减小(P<0.05,P<0.01)。结论 10月龄时APP/PS1转基因AD小鼠海马CA1和DG内均存在脱髓鞘改变,可能是引起AD早期空间学习记忆能力减退的结构基础之一。

关键词：海马CA1区齿状回有髓神经纤维髓鞘体视学

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老年雄性APP/PS1模型小鼠大脑海马齿状回内有髓神经纤维结构的体视学研究

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重庆医科大学学报 2017年第1期42卷 79-84页

作者：朱殷青蒋林张毅周春妮晁风蕾张蕾唐静梁芯綦英强张杨唐勇重庆医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:运用现代体视学方法定量研究16月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠海马齿状回有髓神经纤维的结构改变,以期深入了解阿尔茨海默病海马的形态学改变。方法:Morris水迷宫方法测试16月龄雄性野生型小鼠和16月龄雄性APP/PS1双转基因模型小鼠... 详细信息

目的:运用现代体视学方法定量研究16月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠海马齿状回有髓神经纤维的结构改变,以期深入了解阿尔茨海默病海马的形态学改变。方法:Morris水迷宫方法测试16月龄雄性野生型小鼠和16月龄雄性APP/PS1双转基因模型小鼠的空间学习记忆能力,透射电子显微镜技术和现代体视学方法定量研究模型小鼠和野生型小鼠海马齿状回内有髓神经纤维长度、有髓神经纤维及其轴突和髓鞘体积等参数。结果:Morris水迷宫结果显示在前六天的隐蔽站台试验中模型组小鼠逃避潜伏期明显长于野生型小鼠(分组效应:F=9.952,P=0.008;时间效应:F=3.082,P=0.023;时间分组交互作用:F=0.312,P=0.873),在第七天的空间探索试验中模型小鼠穿台次数明显少于野生型小鼠(F=2.961,P=0.011),原平台所在象限停留时间百分比明显小于野生型小鼠(F=0.090,P=0.002)。虽然两组小鼠海马体积没有统计学差异,但是DG区内有髓神经纤维的超微结构均存在退行性改变,体视学定量分析结果显示在0.7~1.2μm直径段模型组小鼠海马DG内有髓神经纤维长度较野生型组明显降低(P=0.022)。结论:16月龄时APP/PS1模型小鼠空间学习记忆能力明显减退,且海马DG内0.7~1.2μm直径段有髓神经纤维明显丢失可能是APP/PS1模型小鼠空间学习记忆能力进行性减退的结构基础之一。

关键词： APP/PS1模型小鼠齿状回有髓神经纤维透射电子显微镜体视学

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