检索结果-内蒙古大学图书馆

第四军医大学学报 2009年第23期30卷 2808-2811页

作者：周敏周琦李少林唐良萏赵迎泽重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016 重庆市肿瘤研究所重庆400016 重庆医科大学放射医学教研室重庆400016 重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术抑制人卵巢癌SKOV3细胞株HYAL2基因的表达,探讨siRNA-HYAL2对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:将靶向HYAL2的siRNA及对照分别转染人卵巢癌SKOV3细胞株,RT-PCR测定HYAL2基因mRNA表达情况,MTT法检测S... 详细信息

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术抑制人卵巢癌SKOV3细胞株HYAL2基因的表达,探讨siRNA-HYAL2对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:将靶向HYAL2的siRNA及对照分别转染人卵巢癌SKOV3细胞株,RT-PCR测定HYAL2基因mRNA表达情况,MTT法检测SKOV3细胞增殖,FCM检测细胞周期变化,构建Transwell小室体外侵袭模型观察其对细胞侵袭能力的影响.结果:转染siRNA-HYAL248 h后HYAL2基因mRNA表达水平明显降低,细胞存活率下降(P<0.05),S期细胞百分比降低、G0/G1期细胞百分比升高(P<0.05);转染24 h后平均穿膜细胞数减少(P<0.05).结论:siRNA-HYAL2能特异性抑制HYAL2的mRNA表达水平,HYAL2基因沉默后,卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力降低,HYAL基因可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点.

关键词：卵巢肿瘤 RNA干扰透明质酸酶增殖侵袭

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基因CGI-100真核表达载体的构建及其对K562细胞增殖的影响

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实用癌症杂志 2009年第2期24卷 117-120页

作者：黄凤霞张彦西安医学院医学技术系临床检验教研室 710021 重庆医科大学临床生化教研室重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室400016

目的构建CGI-100基因的真核表达载体并初步探讨其功能。方法采用DNA重组技术,将CGI-100基因亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒中,重组为pIRES2-EGFP-CGI-100,脂质体转染K562细胞,RT-PCR检测目的基因CGI-100的表达,采用体外培养技术,通过p... 详细信息

目的构建CGI-100基因的真核表达载体并初步探讨其功能。方法采用DNA重组技术,将CGI-100基因亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒中,重组为pIRES2-EGFP-CGI-100,脂质体转染K562细胞,RT-PCR检测目的基因CGI-100的表达,采用体外培养技术,通过pIRES2EGFP-CGI-100质粒转染K562细胞前后的生长曲线。结果pIRES2-EGFP-CGI-100在K562细胞中获得表达,对细胞增殖速度有明显影响。结论CGI-100表达产物可能是1个与K562细胞增殖有关的功能蛋白质,CGI-100基因可能是1个具有生物学功能的白血病未知基因。

关键词： CGI-100基因真核表达载体 K562细胞增殖

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靶向树突状细胞表面分子DEC-205长循环免疫脂质体稳定性模型的构建及其生物学特性

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生物信息学 2009年第2期7卷 104-107页

作者：胡雪曾照芳陈里里重庆医科大学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学物理教研室重庆400016

应用多相分散体系的动力稳定性和聚结稳定性理论,以薄膜分散法构建了靶向树突状细胞(dendritic cells,DCs)表面分子DEC-205长循环免疫脂质体(anti-DEC-205 iLPSM)的稳定性模型,并对其物理稳定性、生物学特性等进行了考察。结果表明经优... 详细信息

应用多相分散体系的动力稳定性和聚结稳定性理论,以薄膜分散法构建了靶向树突状细胞(dendritic cells,DCs)表面分子DEC-205长循环免疫脂质体(anti-DEC-205 iLPSM)的稳定性模型,并对其物理稳定性、生物学特性等进行了考察。结果表明经优化后的脂质体4℃贮存7d后粒径分布变化较小;FITC-dextran累积泄漏率小于7%;耦联抗DEC-205的免疫脂质体(anti-DEC-205 iLPSM)可特异性地识别DCs,并作为良好载体将FITC-dextran带入DCs浆内。anti-DEC-205 iLPSM模型的构建为进一步研究抗原靶向DEC-205受体后的体内免疫应答情况提供了工作基础,有望开发一种新型DCs疫苗应用于临床。

关键词：免疫脂质体树突状细胞 DEC-205 稳定性模型

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罗格列酮对2型糖尿病患者血浆成纤维细胞生长因子-21的影响

罗格列酮对2型糖尿病患者血浆成纤维细胞生长因子-21的影响

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2009年脂质代谢与器官损害国际学术研讨会

作者：董靖杨刚毅李伶李钶重庆医科大学附属第二医院内分泌科重庆医科大学检验系临床生化教研室和教育部实验诊断重点实验室

目的成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是一种肝脏来源的内分泌相关因子,具有影响糖代谢和胰岛素敏感性的作用。目前的研究发现,FGF-21能促进脂肪细胞葡萄糖摄取,FGF-21过表达转基因鼠阻止了饮食诱导的肥胖。但FGF-21在人体内的生理作用及... 详细信息

目的成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是一种肝脏来源的内分泌相关因子,具有影响糖代谢和胰岛素敏感性的作用。目前的研究发现,FGF-21能促进脂肪细胞葡萄糖摄取,FGF-21过表达转基因鼠阻止了饮食诱导的肥胖。但FGF-21在人体内的生理作用及其机制目前尚不清楚。我们前期的研究发现,2型糖尿病(T2DM)患者空腹血浆FGF-21水平显著升高,推测这可能是对高血糖和高胰岛素血症的一种代偿反应或者是发生了FGF-21抵抗。罗格列酮是一种能够改善胰岛素敏感性的常用降

关键词： Fibroblast growth factor-21 Type 2 diabetes mellitus Rosiglitazone

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RNAi介导的脂联素基因抑制对ApoE基因敲除小鼠糖脂代谢的影响

RNAi介导的脂联素基因抑制对ApoE基因敲除小鼠糖脂代谢的影响

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2009年脂质代谢与器官损害国际学术研讨会

作者：刘瑞杨刚毅李伶孙逊朱伟重庆医科大学附属第二医院内分泌科重庆医科大学检验系临床生化教研室和教育部实验诊断重点实验室

＜正＞目前胰岛素抵抗（IR）和2型糖尿病（T2DM）遗传与环境因素共同作用的结果。目前一般认为T2DM的发生是与多个基因变异相关,即多个微效基因的变异加上环境因素而共同致病。因此,要建立与人类T2DM完全类似的动物模型十分困难。为进... 详细信息

＜正＞目前胰岛素抵抗（IR）和2型糖尿病（T2DM）遗传与环境因素共同作用的结果。目前一般认为T2DM的发生是与多个基因变异相关,即多个微效基因的变异加上环境因素而共同致病。因此,要建立与人类T2DM完全类似的动物模型十分困难。为进一步构建类似于人类T2DM病理生理表型特征的动

关键词： RNAi Adiponectin Insulin resistance Glucose-lipid metabolism

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脂联素siRNA对3T3-L1脂肪细胞代谢相关基因及CORS-26的影响

脂联素siRNA对3T3-L1脂肪细胞代谢相关基因及CORS-26的影响

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2009年脂质代谢与器官损害国际学术研讨会

作者：杨刚毅朱伟李伶李钶重庆医科大学附属第二医院内分泌科重庆医科大学检验系临床生化教研室和教育部实验诊断重点实验室

目的脂联素(Acrp30)是脂肪组织分泌的一种肽类激素。已有研究表明,脂联素在抗动脉粥样硬化、抗炎、调节糖脂代谢、增加胰岛素敏感性等方面具有广泛的生理功能,并与糖尿病、肥胖、心血管疾病等的发生和发展具有密切的关系。但其确切生理... 详细信息

目的脂联素(Acrp30)是脂肪组织分泌的一种肽类激素。已有研究表明,脂联素在抗动脉粥样硬化、抗炎、调节糖脂代谢、增加胰岛素敏感性等方面具有广泛的生理功能,并与糖尿病、肥胖、心血管疾病等的发生和发展具有密切的关系。但其确切生理功能及作用机制目前并不十分清楚。本研究应用RNAi技术构建了Acrp30-shRNA腺病毒载体,并利用该载体抑制了3T3-L1脂肪细胞脂联

关键词： RNA interference Adiponectin 3T3-L1 cell Metabolism CORS-26

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肿瘤坏死因子α诱导的胰岛素抵抗对小鼠脂肪甘油三酯水解酶的影响

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中华医学杂志 2008年第34期88卷 2417-2421页

作者：程玉兰李伶杨刚毅石绍川陈渝朱伟孙逊重庆医科大学检验系临床生化教研室教育部省部共建重点实验室 400016 重庆医科大学附属第二医院内分泌科

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的胰岛素抵抗（IR）对糖脂代谢及脂肪甘油三酯水解酶（ATGL）的影响。方法健康雄性C57BL／6J小鼠随机分为2组，分别给予腹腔注射TNF-α6μg·kg^-1·d^-1（TNF组，20只）和等体积生理盐水... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的胰岛素抵抗（IR）对糖脂代谢及脂肪甘油三酯水解酶（ATGL）的影响。方法健康雄性C57BL／6J小鼠随机分为2组，分别给予腹腔注射TNF-α6μg·kg^-1·d^-1（TNF组，20只）和等体积生理盐水（NC组，20只）共7d。采用2-脱氧-^3H葡萄糖（2-DOG）为示踪剂的扩展胰岛素钳夹技术评价小鼠胰岛素敏感性和糖代谢变化，用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白质印迹法分别测定代谢相关基因ATGL、激素敏感性脂酶（HSL）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）等组织mRNA或血浆蛋白表达水平的变化。结果TNF-α处理后，小鼠空腹血糖（FBG）、血浆胰岛素和游离脂肪酸（FFA）水平均增高。在胰岛素钳夹术中，TNF组血浆胰岛素水平明显高于NC组[（341．7±17．7）vs（84．7±5．5）mU／L，P〈0．01]，胰岛素对FFA的抑制作用明显障碍[FFA，TNF组：（0．82±0．03）mmol／L，NC组：（0．43±0．07）mmol／L，P〈0．01]。TNF组葡萄糖输注率（GIR）明显低于NC组[（39．1±2．3）vs（54．2±2．2）mg·kg^-1·min^-1，P〈0．01]，骨骼肌葡萄糖摄取率（MGU）也明显低于NC组[（15．8±1．7）vs（20．9±2．5）μmol·100g^-1·min^-1，P〈0．01]。TNF组脂肪组织ATGL mRNA表达明显低于对照组（0．85±0．09vs1．37±0．12，P〈0．01），ATGL蛋白水平也明显低于对照组（0．53±0．03vs0．65±0．05，P〈0．05）。TNF组小鼠脂肪组织PPARγ mRNA表达明显低于对照组（0．83±0．07VS1．07±0．07，P〈0．05）。结论在TNF-α诱导的IR中，ATGL在脂代谢相关通路中起着调控作用。

关键词：肿瘤坏死因子胰岛素抗药性脂代谢脂肪甘油三酯水解酶

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核磷蛋白A型突变体对髓性白血病细胞系增殖的影响

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临床检验杂志 2008年第1期26卷 20-23页

作者：骆展鹏何鹏张伶杨松钟晓明高玉洁重庆医科大学医学检验系临床血液教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016

目的研究核磷蛋白A型突变体基因转染对人髓性白血病细胞系体外增殖的影响。方法构建含核磷蛋白A型突变基因(NPM-mA)的真核表达质粒pEGFPC1-NPM-mA,选择NPM-mA阴性、抑癌基因p14ARF有无缺失的两株人髓性白血病细胞KG-1a和K562作为靶细胞,... 详细信息

目的研究核磷蛋白A型突变体基因转染对人髓性白血病细胞系体外增殖的影响。方法构建含核磷蛋白A型突变基因(NPM-mA)的真核表达质粒pEGFPC1-NPM-mA,选择NPM-mA阴性、抑癌基因p14ARF有无缺失的两株人髓性白血病细胞KG-1a和K562作为靶细胞,将pEGFPC1-NPM-mA重组质粒和pEGFPC1空质粒分别转染白血病细胞,以未转染组为对照。用RT-PCR和免疫组化来分析转染细胞目的基因mRNA和蛋白质的表达。采用台盼蓝拒染法计数活细胞,绘制转染前后生长曲线,观察细胞体外生长的改变。结果转染后的两种白血病细胞株表达NPM-mA mRNA,胞浆内NPM-mA蛋白阳性,符合NPM突变蛋白胞质移位的特点。细胞生长曲线显示,转染NPM-mA质粒的KG-1a细胞较空质粒转染和未转染组细胞生长速度明显加快,而转染NPM-mA质粒的K562细胞则较对照组细胞生长明显受抑制(P<0.05)。结论NPM-mA基因稳定转染可影响白血病细胞的增殖活性,在无ARF缺失时NPM-mA突变体可促进白血病细胞体外生长。

关键词：白血病核磷蛋白基因突变

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特异性O1群稻叶型霍乱弧菌单克隆抗体的制备、筛选及识别抗原表位的分析

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第三军医大学学报 2008年第15期30卷 1444-1447页

作者：张娟张君余晓林吴倩蒋飞龙黄长武李兴禄黄爱龙郑建重庆医科大学感染性疾病教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学检验系实验诊断教研室重庆400016 重庆医科大学附属第二医院检验科重庆400010

目的制备并筛选出高特异性高活性的抗O1群稻叶型霍乱弧菌(Vibrio cholerae O1 Serotype Inaba)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为霍乱的预防诊断提供有力的抗体工具。方法应用杂交瘤技术,通过灭活的O1群稻叶型霍乱弧菌免疫的BAL... 详细信息

目的制备并筛选出高特异性高活性的抗O1群稻叶型霍乱弧菌(Vibrio cholerae O1 Serotype Inaba)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为霍乱的预防诊断提供有力的抗体工具。方法应用杂交瘤技术,通过灭活的O1群稻叶型霍乱弧菌免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合制备特异性McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行了特异性及排除性筛选,对筛选出的特异性McAb进行了包括亚型鉴定,效价、亲和常数的测定以及特异性的鉴定与分析,并通过单克隆抗体的位点相加实验、与O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖(LPS)的间接ELISA和Western blot实验对McAb识别的抗原表位进行了初步分析。结果融合了386株能分泌抗O1群稻叶型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,通过用O1群小川型、O139霍乱弧菌及9种非霍乱弧菌的细菌进行的筛选,最后得到4株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其分泌的抗体亚类分别为2株IgG1,1株IgG2a,1株IgG2b;腹水效价均达10-6;亲和常数达108以上。间接ELISA法及Western blot证实所获的McAb可与O1群稻叶型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示4株McAb识别不同的抗原表位,与LPS的反应表明其中2株针对O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖,2株针对非脂多糖抗原位点。结论获得霍乱弧菌O1群稻叶型特异性McAb,初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。

关键词：霍乱 O1群稻叶型霍乱弧菌单克隆抗体表位

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RNAi重组体抑制白血病K562细胞系中NPM1基因的表达

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第三军医大学学报 2008年第10期30卷 938-941页

作者：何鹏骆展鹏张伶杨松钟晓明高玉洁重庆医科大学医学检验系临床血液学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016

目的构建核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin1,NPM1)特异性的RNAi真核表达载体,观察对白血病K562细胞系NPM1表达的抑制作用。方法采用RT-PCR检测白血病细胞系(THP1和K562)和急性髓系白血病(AML)细胞NPM1mRNA水平。设计合成2条针对NPM1基因并... 详细信息

目的构建核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin1,NPM1)特异性的RNAi真核表达载体,观察对白血病K562细胞系NPM1表达的抑制作用。方法采用RT-PCR检测白血病细胞系(THP1和K562)和急性髓系白血病(AML)细胞NPM1mRNA水平。设计合成2条针对NPM1基因并具有小发夹结构的DNA序列,经退火形成互补双链,再克隆至载体pGenSil-1中构建含NPM1的RNAi重组体,经酶切及测序鉴定后通过脂质体转染K562细胞,同时设立pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组。采用RT-PCR检测各组转染细胞中NPM1的mRNA水平。结果白血病细胞系和AML细胞均高表达NPM1 mRNA。针对人NPM1基因的RNAi重组体构建成功,并能够稳定转染K562细胞,导致白血病细胞NPM1mR-NA相对表达量下降64%,而pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组未能下调NPM1表达。结论白血病细胞高表达NPM1基因,其mRNA表达水平能够被靶向NPM1的RNAi重组体特异性地下调。

关键词：核仁磷酸蛋白1 RNA干扰白血病 K562细胞

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