检索结果-内蒙古大学图书馆

癌症 2009年第2期28卷 149-154页

作者：田文君冯文莉王宏斌黄世峰曹唯希黄宗干重庆医科大学医学检验系临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学临床学院血液科重庆400016

背景与目的:肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一;最近研究发现慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关,急变期显示更为... 详细信息

背景与目的:肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一;最近研究发现慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关,急变期显示更为严重的中心体异常。本研究建立携野生型p53基因的CML急变K562细胞株,以研究该细胞内野生型p53基因表达后p53信号转导通路对K562细胞中心体的影响。方法:用HEK293细胞扩增重组p53野生型、突变型及空载腺病毒载体,联合polybrene分别感染K562细胞;未接受感染的细胞作为空白对照。流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测P53蛋白表达。间接免疫荧光染色后用激光共聚焦计数K562细胞中心体的变化。Western blot检测p53信号转导通路下游效应分子生长阻滞和DNA损伤应答基因Gadd45a(growth arrest and DNAdamage)、BubR1(Bub1related)、Aurora A的表达。结果:成功建立携野生型p53基因的K562细胞株,腺病毒载体感染效率达60%以上,野生型p53可在K562细胞中持续表达。感染72h后,携野生型p53基因的K562细胞中中心体数量异常(n>2)的细胞比例降至(0.38±0.02)%,与空白对照组(0.71±0.14)%比较其差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot结果发现p53信号转导通路下游效应分子Gadd45a、BubR1表达分别上调93%、88%,而Aurora A的表达下降56%(P值均<0.05)。结论:重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达;野生型P53蛋白可能通过转录激活-依赖途径上调Gadd45a、BubR1表达以及转录激活-非依赖途径使Aurora A的表达下降,从而抑制K562细胞中心体的过度复制。

关键词： p53基因信号转导中心体 K562细胞 Gadd45a蛋白 BubR1蛋白 Aurora A激酶

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CCAAT/增强子结合蛋白α对K562细胞分化和凋亡的影响及其机制

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肿瘤 2009年第3期29卷 220-225页

作者：孙成铭黄世峰罗红伟刘钉宾田文君朱喜丹冯文莉黄宗干重庆医科大学医学检验系临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学临床学院血液科重庆400016

目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)对K562细胞株分化和凋亡的影响及对相关基因的调控,为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的治疗靶点。方法:将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα及空载体对照质粒... 详细信息

目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)对K562细胞株分化和凋亡的影响及对相关基因的调控,为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的治疗靶点。方法:将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα及空载体对照质粒pEGFP分别经阳离子脂质体2000介导转染K562细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株。Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化,FCM分析细胞表面分化抗原CD11b的表达、细胞周期及细胞凋亡,电子显微镜观察细胞凋亡,RT-PCR和Western印迹法检测细胞中相关基因Per2、cyclin B1和C-myc的表达。结果:筛选得到稳定表达C/EBPα的细胞株pEGFP-C/EBPα-K562。与空载体转染组及对照组细胞相比,转染组K562细胞分化明显,同时粒系细胞表面分化抗原CD11b表达增加;细胞周期分析发现,转染组细胞中G2期细胞增多,与空载体组和对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),同时出现细胞凋亡峰。细胞凋亡检测结果显示,转染组细胞凋亡明显增加(21.1%),与空载体组(6.0%)和对照组(4.2%)比较,差异有统计学意义(P<0.05);电子显微镜观察发现,转染组细胞中出现染色质浓集、断裂和核固缩等现象,并见凋亡小体;RT-PCR和Western印迹法检测发现,C/EBPα明显上调Per2 mRNA和蛋白表达,抑制cyclinB1、C-myc mRNA和蛋白的表达。结论:C/EBPα能促进K562细胞分化,并诱导细胞凋亡,其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控来实现的。

关键词：白血病,实验性 CCAAT增强子结合蛋白细胞周期细胞凋亡细胞,K562

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脂联素小干扰RNA（siRNA）对3T3-L1脂肪细胞代谢相关基因的影响

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中华内分泌代谢杂志 2009年第5期25卷 560-561页

作者：朱伟杨刚毅李伶李钶陈文雯李生兵重庆医科大学附属第二医院内分泌科 400010 重庆医科大学检验系临床生化教研室和教育部实验诊断重点实验室

采用RNA干扰技术抑制3T3-L1脂肪细胞脂联素基因表达，干预后细胞的葡萄糖转运蛋白（GLUT）-1、GLUT-4、胰岛素受体底物1和激素敏感脂肪酶mRNA表达水平分别下调53％、26％、27％和38％（P〈0．05或P〈0．01）。

关键词： RNA干扰脂联素代谢 3T3-L1脂肪细胞

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针对IER3IP1基因的shRNA真核表达载体的构建和鉴定

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重庆医科大学学报 2009年第5期34卷 578-582页

作者：雷燕张彦汪永强重庆医科大学检验系临床生化教研室临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:构建特异性针对IER3IP1基因的shRNA(Short Hairpin RNA)的真核表达载体,观察对IER3IP1基因表达的沉默作用,筛选出抑制效果较好的干扰片段。方法:针对IER3IP1基因,设计合成2对特异性DNA片段以及1对无关序列的阴性对照DNA片断,将它... 详细信息

目的:构建特异性针对IER3IP1基因的shRNA(Short Hairpin RNA)的真核表达载体,观察对IER3IP1基因表达的沉默作用,筛选出抑制效果较好的干扰片段。方法:针对IER3IP1基因,设计合成2对特异性DNA片段以及1对无关序列的阴性对照DNA片断,将它们插入真核表达载体pGenesil-1中构建重组质粒,质粒转染L02正常肝脏细胞株后,以半定量RT-PCR法检测转染后24、48、72hIER3IP1基因的抑制效果。结果:成功构建2个特异性针对IER3IP1的shRNA真核表达载体;所构建的载体中有1对能够特异性的降低L02细胞中IER3IP1的mRNA表达水平,且干扰效果显著,抑制率较高,与空载对照组比在转染后24、48、72h抑制率分别为64%、79%、69%。结论:设计构建的真核表达载体可以特异性干扰IER3IP1基因的表达,为进一步研究IER3IP1基因的功能奠定了基础。

关键词： RNA干扰基因,IER3IP1

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clpP基因缺陷对肺炎链球菌毒力表达降低的研究

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第三军医大学学报 2009年第4期31卷 307-310页

作者：张群胥文春尹一兵朱兴华李有强张雪梅重庆医科大学医学检验系生化教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的探索clpP基因缺陷对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,***)毒力的影响。方法用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法失活clpP基因,用PCR、Western blot鉴定缺陷菌株,通过RT-PCR分析自溶素(major autoly-sin A,lytA)、表面黏附A(pneumococcal surface adhesion A,psaA)、溶血素(pneumolysin,ply)和胆碱结合蛋白A(cholinebinding protein A,cbpA)的表达,并通过动物实验观察clpP基因缺陷株毒力改变情况。结果RT-PCR显示clpP缺陷株的4个毒力因子mRNA表达水平均低于野生菌,两者比较有统计学差异(P<0.05);小鼠毒力实验表明野生菌株半数致死时间为22h,而缺陷株半数致死时间为8d,两者比较有统计学差异(P<0.01);缺陷菌在小鼠体内被清除速度也显著快于野生菌株(P<0.05)。结论clpP基因缺陷使***多种毒力因子表达减弱,毒力降低。

关键词：肺炎链球菌毒力因子热休克蛋白 clpP基因

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内脂素对改善胰岛素抵抗及相关基因的作用

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解放军医学杂志 2009年第4期34卷 474-477页

作者：杨艳杨刚毅李伶张凌苗宗玉卢春敏重庆医科大学检验系临床生化教研室、教育部临床检验诊断学重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第二医院内分泌科

目的探讨内脂素(visfatin)基因过表达对高脂诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠胰岛素敏感性及其信号系统的影响。方法构建大鼠内脂素基因重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-visfatin。20只雄性SD大鼠分为3组。对照组(NC组,n=5):注射0.3mg空载体pcDNA3... 详细信息

目的探讨内脂素(visfatin)基因过表达对高脂诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠胰岛素敏感性及其信号系统的影响。方法构建大鼠内脂素基因重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-visfatin。20只雄性SD大鼠分为3组。对照组(NC组,n=5):注射0.3mg空载体pcDNA3.1(+),普通饲料组(NT组,n=7)和高脂组(HT,n=8)大鼠注射0.3mg重组质粒pcDNA3.1(+)-visfatin。在实验前(基础值)、第1次钳夹后即刻、质粒处理后3d和第2次钳夹后即刻,分别自各组大鼠颈静脉取血,分离血浆,采用Westernbloting测定血浆内脂素蛋白表达。在转染前和转染后3d采用两次高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术评价大鼠胰岛素敏感性的变化,并测定大鼠空腹血浆胰岛素(FIns)、血糖(BG)、血浆游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及葡萄糖输注率(GIR)等指标。采用斑点印迹法检测胰岛素受体底物-1(IRS-1)酪氨酸磷酸化,采用RT-PCR法测定过氧化物酶体增生激活受体γ(PPARγ)mRNA表达水平的变化。结果内脂素质粒注射3d后及第2次钳夹术后,NT和HT组血浆内脂素水平较注射前均升高(P<0.01)。质粒注射后3d,NT、HT组大鼠TC和HDL-C均较注射前明显降低(P<0.05)。钳夹术中,NT和HT组大鼠GIR较注射前明显升高(P<0.01)。NT和HT组大鼠肝脏和肌肉组织中IRS-1酪氨酸磷酸化水平和肝脏中PPARγmRNA水平也较NC组均明显升高(P<0.05和P<0.01)。NT组脂肪组织中PPARγmRNA水平较NC组明显增高(P<0.01)。结论内脂素可能通过上调PPARγmRNA水平和IRS-1酪氨酸磷酸化水平使机体胰岛素敏感性增加。

关键词：内脂素 PPARγ 受体,胰岛素高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术

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2型糖尿病合并酮症患者血浆FGF-21水平改变

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中国糖尿病杂志 2009年第4期17卷 284-286,292页

作者：何宁李伶杨刚毅陈文雯李生兵李钶重庆医科大学附属第二医院内分泌科 400010 重庆医科大学检验系临床生化教研室和教育部实验诊断重点实验室

目的探讨初诊T2DM及其酮症(T2DK)患者血浆FGF-21水平变化与BMI、WHR、血糖、血浆胰岛素水平等的关系。方法放免法测定68例T2DM、41例T2DK患者及52例正常人(NC组)血浆FGF-21水平,分析血浆FGF-21水平与BMI、WHR、HOMA-IR、HOMA-IS、血脂... 详细信息

目的探讨初诊T2DM及其酮症(T2DK)患者血浆FGF-21水平变化与BMI、WHR、血糖、血浆胰岛素水平等的关系。方法放免法测定68例T2DM、41例T2DK患者及52例正常人(NC组)血浆FGF-21水平,分析血浆FGF-21水平与BMI、WHR、HOMA-IR、HOMA-IS、血脂、血糖、血浆胰岛素和FFA水平等的关系。结果血浆FGF-21水平T2DM组明显高于NC组,T2DK组又明显高于T2DM组。空腹血浆FGF-21水平分别与SBP、DBP、FPG、2hPG、HbA_1c、HDL-C和FFA呈明显正相关,与Fins、2hIns和HOMA-IS呈明显负相关。DBP、wHR、2hIns、2hPG和FFA是影响血浆FGF-21水平的独立相关因素。控制年龄、性别、血压等后,血浆FGF-21水平与T2DM及T2DK发病均呈显著相关,其似然比呈上升趋势。结论血浆FGF-21水平的改变与糖脂代谢紊乱和胰岛素分泌有关,并可能参与了T2DM及T2DK的发生和发展。

关键词： FGF-21 糖尿病,2型糖尿病酮症

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siRNA沉默AnnexinⅡ基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的影响

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第三军医大学学报 2009年第3期31卷 223-226页

作者：郭变琴陈婷梅文阳安重庆医科大学医学检验系临床血液教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016

目的探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默AnnexinⅡ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学特性的影响。方法体外化学合成AnnexinⅡ序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),脂质体介导转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用荧光显微镜... 详细信息

目的探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默AnnexinⅡ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学特性的影响。方法体外化学合成AnnexinⅡ序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),脂质体介导转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用荧光显微镜观察转染效率。收集siRNA干扰的细胞,RT-PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学法分别检测AnnexinⅡmRNA和蛋白的抑制水平,并采用MTT法、流式细胞术测定细胞增殖能力和细胞周期的变化,Millicell小室测定细胞侵袭、迁移能力的变化。结果AnnexinⅡ-siRNA能有效抑制AnnexinⅡmRNA和蛋白的表达(P<0.05);经siRNA干扰后的细胞,细胞增殖能力显著减低(P<0.05);G0/G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少(P<0.05);细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05)。结论采用siRNA干扰AnnexinⅡmRNA和蛋白表达后,能有效逆转乳腺癌细胞的某些恶性生物学特点,表明AnnexinⅡ与乳腺癌的发生、发展及转移有一定的关系。

关键词： RNA干扰乳腺癌 AnnexinⅡ基因细胞增殖细胞周期侵袭转移

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基于PIRS的科研型实验室综合信息系统的研发

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激光杂志 2009年第5期30卷 50-51页

作者：胡雪曾照芳甘平陈里里重庆医科大学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院医学物理学教研室重庆400016

在阐述首席研究员负责制(principal investigator responsibility system,PIRS)下引入科研型实验室综合信息系统(Laboratory Information Systems,LIS)的必要性和可行性的基础上,提出基于C/S、B/S结合模式的LIS总体结构,给出了系统的功能模块、设计特色和关键问题解决方法等。其LIS运行结果表明该LIS能为PIRS对人力、物流、财务及质量控制的管理提供强大支持。

关键词：首席研究员负责制科研型实验室信息系统集成

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钟基因Per2对白血病K562细胞增殖、分化、凋亡的影响及其机制研究

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第三军医大学学报 2009年第4期31卷 301-306页

作者：孙成铭黄世峰罗红伟刘钉宾田文君朱喜丹冯文莉涂植光温健萍黄宗干重庆医科大学医学检验系临床血液学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆市重点实验室 Canadian Blood Services Hamilton 重庆医科大学附属第一医院血液科重庆400016

目的研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏染色... 详细信息

目的研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏染色观察细胞形态,台盼蓝拒染法和MTT法检测K562细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡,电镜观察细胞凋亡,RT-PCR及Western blot方法检测该细胞株中增殖、凋亡相关基因p53、cyclin B1和c-myc等的表达。结果筛选到稳定表达Per基因的稳定表达细胞株K562/Per2细胞,与空载体转染组及未处理对照组细胞相比,K562/Per2细胞体积缩小,但是分化不明显;台盼蓝拒染法和MTT实验发现Per2抑制细胞生长与增殖能力;流式细胞仪检测周期结果K562/Per2细胞中G2期细胞增多[转染组(36.1±5.5)%,空载组(12.5±2.9)%,未处理对照组(9.7±2.3)%,P<0.05],凋亡检测显示转染组细胞凋亡明显增加[14.8%P<0.05];电镜结果显示染色质浓集、断裂,核固缩和凋亡小体;RT-PCR及Western blot显示Per2明显上调p53基因的mRNA和蛋白表达,而抑制cyclin B1、c-myc基因mR-NA和蛋白的表达。结论钟基因Per2能抑制K562细胞的生长和增殖,并诱导其发生凋亡,但对分化无明显作用。其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控并阻止细胞周期进程来实现的。

关键词：钟基因增殖凋亡细胞周期节律调节

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